Cell Meter 荧光法细胞内pH检测试剂盒 货号21180-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 荧光法细胞内pH检测试剂盒

Cell Meter 荧光法细胞内pH检测试剂盒

货号 21180 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1000 Tests 价格 5244
Ex (nm) 503 Em (nm) 528
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 荧光法细胞内pH检测试剂盒  是美国AAT Bioquest生产的胞内pH检测试剂盒,细胞内pH变化涉及多种生理和病理过程,包括细胞增殖,细胞凋亡,受精,恶性肿瘤,多药耐药性,离子转运,溶酶体贮积症和阿尔茨海默病。 Cell Meter 荧光细胞内pH测定试剂盒利用AAT Bioquest专有的荧光指示剂测量相对细胞内pH变化。它是一种均相的,动力学的活细胞荧光测定法,它使用标准程序或酸负荷程序。设计标准方案用于治疗靶标,同时治疗时细胞内pH降低。 “酸负荷”程序旨在测量与GPCR活化或生长因子活性引起的细胞代谢变化相关的细胞内pH的增加。在“酸负荷”程序中,在将荧光pH染料以最小体积加载到细胞中之后加入氯化铵溶液。该“酸加载”步骤之后是在相对大体积(~4X)的缓冲液中加入激动剂。突然的体积变化引发来自细胞的氨(NH 3)流出,导致细胞内pH的快速降低,并因此导致荧光信号的降低。通过相对荧光信号增加测量激动剂对随后的细胞内pH恢复的影响。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 荧光法细胞内pH检测试剂盒 。

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 535nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色透明
其他仪器
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer

产品说明书

操作步骤

运行pH测定以获得标准细胞

1.将100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)RatioWorks TM BCFL,AM染料加工溶液加入到细胞板中。注意:如果化合物干扰血清,重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基(96孔板100μL/孔或染料加载前384孔板25μL/孔)。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟,然后在室温下将板孵育另外30分钟。注意:如果测定需要37°C,立即进行实验,无需进一步室温孵育。

3.使用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

4.通过监测Ex / Em = 490 / 535nm(截止= 515nm)或505 / 535nm和430 / 535nm(截止= 515nm)处的荧光进行pH测定以进行比率测量。添加化合物为50μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)。注意:化合物应在化合物添加后3至5分钟内完成,但在测定开发过程中建议至少8分钟的数据收集。

 

运行pH测定酸

1.从细胞板上除去生长培养基。

2.将50μL/孔/ 96孔板RatioWorks™BCFL,AM染料加工溶液添加到细胞板中。

3.将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟,然后在室温下将板孵育另外30分钟。注意:如果测定需要37°C,立即进行实验,无需进一步室温孵育。

4.加入5μL的220mM NH 4 Cl并将板离心5秒。在室温下孵育15分钟。注意:NH4Cl溶液应在HHBS(组分C)中新鲜制备。

5.使用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

6.通过监测Ex / Em = 490 / 535nm(截止= 515nm)或505 / 535nm和430 / 535nm(截止= 515nm)处的荧光进行pH测定以进行比率测量。添加的化合物为200μL/孔/ 96孔板。注意:化合物应在化合物添加后3至5分钟内完成,但在测定开发过程中建议至少8分钟的数据收集。

 

示例数据分析和数据

        从空白标准孔获得的读数(RFU)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算Carbachol样品。 

Cell Meter 荧光法细胞内pH检测试剂盒     货号21180

图1. CHO-M1细胞中的卡巴胆碱剂量反应。 在96孔黑壁/透明底板中,将CHO-M1细胞以每100μL/孔60,000个细胞接种过夜。 将生长培养基用50μL/孔的RatioWorks BCFL,AM染料加载溶液替换37℃1小时,然后用5μL/孔的220mM NH 4 Cl孵育15分钟。 通过FlexStation(Molecular Devices)添加Carbachol(200μL/孔)以达到最终指示的浓度。 使用Ex / Em = 490 / 535nm(截止= 515nm)产生荧光信号。

 

参考文献

The Redox Status of Cancer Cells Supports Mechanisms behind the Warburg Effect
Authors: Jorgelindo Da Veiga Moreira, Minoo Hamraz, Mohammad Abolhassani, Erwan Bigan, Sabine Pérès, Loic Paulevé, Marcel Levy Nogueira, Jean-Marc Steyaert, Laurent Schwartz
Journal: Metabolites (2016): 33

 

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说明书
Cell Meter 荧光法细胞内pH检测试剂盒 .pdf