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Amplite 荧光法丁酰胆碱酯酶活性检测试剂盒
| 货号 | 11407 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 100 Tests | 价格 | 6564 |
| Ex (nm) | Em (nm) | ||
| 分子量 | 溶剂 | ||
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
丁酰胆碱酯酶（EC 3.1.1.8； BChE），也称为假胆碱酯酶或血浆胆碱酯酶，主要在肝脏中合成，并存在于血液中。BChE是一种非特异性胆碱酯酶，可以水解许多不同的胆碱酯，是抵御有毒化合物进入血液的第一道防线。它已被鉴定为有机磷酸中毒的临床生物标志物。Amplite 比色丁酰胆碱酯酶活性测定试剂盒是合成的丁酰胆碱酯类底物，可被BChE水解并产生硫代胆碱。硫胆碱可与5、5′-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（DTNB）反应，并生成黄色发色团，可在410 nm处检测到。该测定方便，灵敏，并且在各种样品中均可检测到低至6 mU / mL。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法丁酰胆碱酯酶活性检测试剂盒。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 490nm |
| 发射： | 525nm |
| cutoff： | 515nm |
| 推荐孔板： | 黑色孔板 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
- 准备BChE标准品，测试样品和染料工作溶液
- 添加BChE标准品或测试样品（100 uL）
- 添加BChE染料工作溶液（100 uL）
- 在室温下孵育10-30分钟
- 检测Ex / Em = 490/525nm的荧光强度
注意：开始实验前，在室温下解冻试剂盒所有成分。
溶液配制
储备溶液配制
1.Thiolite 绿色原液（200X）：将50 uL DMSO（组分E）加入小瓶Thiolite Green（组分A）中，制成200X Thiolite Green储备溶液。
2.丁硫代胆碱（BTC）储备溶液（100X）：将120 uL ddH2O加入BTC小瓶（组分C）中，制成100X BTC储备液。
3.丁胆碱酯酶（BChE）标准溶液（5 U / mL）：将50 uL含0.1％BSA的ddH2O加入BChE标准品（组分D）小瓶中，制成5 U / mL BChE标准品溶液。
标准溶液配制
将20 uL的5U / mL BChE标准溶液添加到980 uL的测定缓冲液（组分B）中，以生成100mU / mL的BChE标准溶液（BS1），然后取100 mU / mL的BChE标准溶液（BS1），并在测定缓冲液（组分B）中进行1：3连续稀释，以得到系列换算的BChE标准溶液（BS2-BS7）。注意：减少的BChE标准溶液溶液，应在4小时内使用。
工作溶液配制
BChE染料工作溶液：将50 uL的200X Thiolite Green储备溶液和100 uL的100X BTC储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，使总体积为10.1 mL BChE染料工作溶液。 注意：避光。
实验步骤
表1.在透明的96微孔板中的BChE标准品和测试样品的布局。 BS = BChE标准品（BS1-BS7，100至0.13 mU / mL）; BL =空白对照； TS =测试样品
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BL |
BL |
TS |
TS |
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DS1 |
DS1 |
… |
… |
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DS2 |
DS2 |
… |
… |
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DS3 |
DS3 |
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DS4 |
DS4 |
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DS5 |
DS5 |
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DS6 |
DS6 |
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DS7 |
DS7 |
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表2. 每个孔的试剂组成
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Well |
Volume |
Reagent |
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DS1-DS7 |
100 uL |
连续稀释 (100 to 0.13 mU/mL) |
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BL |
100 uL |
缓冲液 (Component B) |
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TS |
100 uL |
实验样品 |
-
根据表1和表2提供的布局，准备BChE标准品（BS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 uL的试剂代替100 uL。 注意：根据需要处理细胞或组织样品。
-
将100 uL BChE染料工作溶液添加到BChE标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，使总测定体积为200 uL /孔。 对于384孔板，将25 uL BChE工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 uL /孔。
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在避光条件下，于室温下孵育反应10至30分钟。
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使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490/525nm处检测荧光的增加。
图示
 图1.使用Gemini荧光酶标仪在带有Amplite 荧光丁酰胆碱酯酶检测试剂盒的黑色96孔板上测定丁酰胆碱酯酶的剂量响应。 孵育10分钟可检测到低至0.1 mU / mL的丁酰胆碱酯酶。 |
参考文献
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