ApoBrite U470 caspase 3/7底物 细胞渗透 (停产) 货号20200-AAT Bioquest荧光染料

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ApoBrite U470 caspase 3/7底物 细胞渗透 (停产)

ApoBrite U470 caspase 3/7底物 细胞渗透 (停产)

ApoBrite U470 caspase 3/7底物 细胞渗透 (停产)    货号20200 货号 20200 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 0
Ex (nm) 350 Em (nm) 470
分子量 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

ApoBrite U470 caspase 3/7底物是美国AAT Bioquest生产的细胞功能探针,ApoBrite U470是我们最近开发的可渗透细胞的荧光半胱天冬酶底物,是首个直接检测活细胞中半胱天冬酶活性的荧光探针。 ApoBrite U470由三个部分组成,包括a)掩蔽的荧光团,b)半胱天冬酶选择性肽片段(DEVD),以及c)细胞穿透部分。细胞穿透部分将探针带入活细胞。一旦进入活细胞,胱天蛋白酶选择性肽片段被胱天蛋白酶切割以释放掩蔽的荧光团。恢复的荧光强度与要测量的胱天蛋白酶的活性直接相关。与活细胞中现有的半胱天冬酶测定相比,ApoBrite U470更稳定,方便和准确。 ApoBrite U470释放出具有Ex / Em〜350/470的荧光团。如NucView试剂所报道的,它不需要DNA相互作用就能发荧光。如FMK肽探针所报道的,它不抑制胱天蛋白酶活性。尽管胱天蛋白酶的荧光FMK肽抑制剂被广泛用于检测活细胞中的胱天蛋白酶活性,但是该技术有一些严重的局限性:a)FMK半胱天冬酶抑制剂具有高细胞毒性,因为FMK肽与活性胱天蛋白酶共价结合。 b)FMK肽与caspase不可逆地共价结合会抑制caspase活性,导致假阳性凋亡。 C)FMK分析具有极高的背景,并且需要大量洗涤,从而导致通量非常低; d)FMK肽在水溶液中不稳定,必须立即使用。

产品说明书

操作步骤

1)将细胞在生长培养基中过夜培养。

2)通过将2 µL 500X ApoBrite caspase底物DMSO储备溶液加入1 mL HHBS中,制成1X ApoBrite caspase底物工作溶液。

3)除去生长培养基,并用HHBS洗涤一次。

4)加入100 µL /孔/ 96孔板的1X ApoBrite caspase底物工作溶液,并在37ºC,5%CO2的培养箱中孵育2小时。

5)去除ApoBrite caspase底物工作溶液,并用HHBS洗涤一次。

6)将生长培养基加回到载有ApoBrite caspase底物的细胞中,并根据需要处理细胞(例如1µM Staurosporine 1小时)。

7)用适当的荧光仪器(例如荧光显微镜或流式细胞仪)分析细胞。

 

参考文献

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

 

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产品名称 货号
ApoBrite V570 caspase 3/7底物 细胞渗透 Cat#20201

说明书
ApoBrite U470 caspase 3/7底物 细胞渗透 (停产).pdf