Amplite 荧光法通用型基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒 绿色荧光 货号13510-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法通用型基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒 绿色荧光

Amplite 荧光法通用型基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒 绿色荧光

Amplite 荧光法通用型基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒 绿色荧光    货号13510 货号 13510 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 3924
Ex (nm) 494 Em (nm) 515
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法通用型基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测MMP的试剂盒,基质金属蛋白酶(MMP)构成锌依赖性内肽酶家族,其在细胞外基质内起作用。 这些酶负责结缔组织的分解,并且在骨重塑,月经周期和组织损伤的修复中是重要的。虽然很难评估MMP对某些病理过程的确切贡献,但MMP似乎在关节炎的发展以及癌症的侵袭和转移中起关键作用。

我们的Amplite 通用荧光MMP活性测定试剂盒使用Tide Fluor 2(TF2)/ Tide Quencher 2(TQ2)荧光共振能量转移(FRET)肽作为通用MMP活性指示剂。 它旨在检查MMP酶的一般活性并筛选MMP抑制剂。 在完整的FRET肽中,TF2的荧光被TQ2猝灭。 在通过MMP切割成两个单独的片段后,回收TF2的荧光。 TF2探针具有优异的荧光量子产率和更长的波长,比EDANS / Dabcyl FRET底物灵敏得多。 其信号可通过荧光酶标仪在Ex / Em = 490/525 nm处轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法通用型基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒。 

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适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

添加适当的对照或测试样品(50μL)

预孵育10-15分钟

添加MMP Green™底物溶液(50μL)

孵育0分钟(用于动力学读数)或30分钟至1小时(终点读数)

在Ex / Em = 490/525 nm处监测荧光强度

注意:在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.根据需要制备含有生物样品的MMP。

 

2.激活pro-MMPs:

2.1制备2mM APMA工作溶液(2X):用1:500稀释1M APMA(组分B)和测定缓冲液(组分C),得到2mM APMA工作溶液(2X)。

注意:APMA属于有机汞。 小心轻放! 根据当地法规处理。

2.2用APMA包埋MMPs:用等体积的2mM APMA工作溶液(2X,来自步骤2.1)孵育含有MMP的样品或纯化的MMPs。 有关孵育时间,请参阅说明书中的附录I. 在实验之前立即激活MMP。

注意1:将含酶样品保存在冰上。 避免剧烈涡旋酶。长时间储存活化酶会使酶失活。

注意2:对于酶活化,优选在较高蛋白质浓度下活化。激活后,您可以进一步稀释酶。

 

3.准备工作解决方案:

3.1制备MMP Green™底物工作溶液:用1:100稀释MMP Green™底物(组分A)和测定缓冲液(组分C),如说明书中表1所示。

3.2制备MMP稀释:如果使用纯化的MMP,则在测定缓冲液(组分C)中将MMP稀释至合适的浓度。

注意:Pro-MMP需要在使用前激活(参见步骤2.2)。 避免剧烈涡旋酶。 

3.3制备抑制剂和化合物稀释:如果您正在筛选MMPs抑制剂,请根据需要稀释已知的MMPs抑制剂和测试化合物。

 

4.根据说明书中的表2和表3在96孔微孔板中建立酶促反应:

 

5.运行酶反应:

5.1如果您正在筛选MMPs抑制剂,则将培养板在酶反应(例如25°C或37°C)的所需温度下预孵育10-15分钟。

5.2将50μL(96孔)或20μL(384孔)MMP Green™底物溶液(来自步骤3.1)加入到测定板的样品和对照孔中。充分混合试剂。

5.3用Ex / Em = 490 / 525nm的荧光板读数器监测荧光强度。

动态读数:立即开始测量荧光强度,每5分钟连续记录数据30至60分钟。

终点读数:在室温下孵育反应30至60分钟,如果可能,避免光照。 充分混合试剂,然后测量荧光强度。

 

参考文献

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说明书
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