上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
D-荧光素钾盐 CAS 115144-35-9
货号 | 12506 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 100 mg | 价格 | 1272 | |
Ex (nm) | 328 | Em (nm) | 533 | |
分子量 | 318.41 | 溶剂 | Water | |
产品详细介绍 |
简要概述
D-荧光素是最流行和多功能的生物发光底物。萤火虫荧光素酶/荧光素生物发光系统存在于萤火虫(Photinus pyralis)和其他几种甲虫中。荧光素酶通过二氧杂环丁酮中间体氧化ATP活化的荧光素。萤火虫荧光素酶通过荧光素的ATP依赖性氧化产生光。来自该反应的560nm化学发光在数秒内达到峰值,当荧光素和ATP过量存在时,光输出与荧光素酶活性成比例。萤火虫荧光素酶长期以来与抗体结合,并在荧光素作为检测底物的免疫测定中用作标记物。与HRP和碱性磷酸酶相比,荧光素酶对化学修饰的耐受性较差。该酶的一个特别优点是除了其高灵敏度之外,在哺乳动物组织中存在低内源荧光素酶活性。荧光素酶的另一个重要用途是卫生监测领域。荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染,因为存在于所有生物体中的ATP需要产生发光。这种ATP生物发光的主要应用是通过测试食品加工厂中的表面来确定质量,以确定是否存在设备或产品的污染。D-荧光素 游离酸 D-Luciferin 是美国AAT Bioquest 的产品。
D-荧光素钾盐及D-荧光素使用中的常见问题
金畔问号:荧光素酶到底该如何检测?
产品说明书
操作方法
以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子,它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。
1.用于体外生物发光图像测定的实施方案
1.1在无菌水中制备100mM(100-200X)荧光素原液。混合均匀。立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。
1.2在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。
1.3从培养细胞中分离培养基。
1.4将荧光素工作溶液加入细胞中,并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。
2.用于体内生物发光图像测定的实施方案
2.1在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液,不含Mg2+和Ca2+。 混合均匀。
2.2过滤器通过0.2μm过滤器过滤灭菌溶液。立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。
2.3在动物体重150mg / kg(或10μL/ g荧光素储备溶液)成像前10-15分钟腹膜内(i.p.)注射荧光素。
注意:应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究,以确定峰值信号时间。
3.荧光素报告分析分子测定的实施方案
3.1在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。
3.2制备1mM D-荧光素的工作溶液,其中含有3mM ATP,1mM DTT和15mM MgSO 4的25mM tricine缓冲液,pH7.8。
3.3将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白。
3.4根据制造商的说明,使用荧光素工作溶液的普利光度计。
3.5注入200μl荧光素工作溶液,无延迟,10秒积分时间。
注意1:D-荧光素钾盐溶于无菌水和缓冲液,溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用,D型转化为L型)的情况下,D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气,将加速D-荧光素钾的降解速度。储备溶液可以在不含ATP的水中制备,并在-20°C下避光储存。必须用适当的碱中和游离酸溶解。
注意2:D-荧光素可与任何现有的文献或ATP分析系统一起使用。
注意3:如果检测ATP,请戴上手套并使用无ATP容器,尽量减少所有可能的ATP污染源。仅使用无菌无ATP水和试剂。使用高压灭菌水进行所有试剂制备。
试剂应用文献
Bioluminescence imaging of Arc expression in mouse brain under acute and chronic exposure to pesticides
Authors: Izumi, Hironori and Ishimoto, Tetsuya and Yamamoto, Hiroshi and Mori, Hisashi
Journal: NeuroToxicology (2018)
参考文献
C3-Luc Cells Are an Excellent Model for Evaluation of Cellular Immunity following HPV16L1 Vaccination
Authors: Li-Li Li, He-Rong Wang, Zhi-Yi Zhou, Jing Luo, Xiao-Li Wang, Xiang-Qian Xiao, Yu-Bai Zhou, Yi Zeng
Journal: PloS one (2016): e0149748
Genome-wide microRNA analysis identifies miR-188-3p as novel prognostic marker and molecular factor involved in colorectal carcinogenesis
Authors: Martin Pichler, Verena Stiegelbauer, Petra Vychytilova-Faltejskova, Cristina Ivan, Hui Ling, Elke Winter, Xinna Zhang, Matthew Goblirsch, Annika Wulf-Goldenberg, Masahisa Ohtsuka
Journal: American Association for Cancer Research (2016): clincanres–0497
Identification of a Novel Protein Kinase A Inhibitor by Bioluminescence-Based Screening
Authors: Tetsuya Ishimoto, Kenji Azechi, Hisashi Mori
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2015): 1969–1974
Discovery of novel adenylyl cyclase inhibitor by cell-based screening
Authors: Hiroki Mano, Tetsuya Ishimoto, Takuya Okada, Naoki Toyooka, Hisashi Mori
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2014): 1689–1693
相关产品
产品名称 | 货号 |
D-荧光素钠盐 CAS 103404-75-7 | Cat#12509 |