Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 近红外荧光 货号11553-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 近红外荧光

Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 近红外荧光

Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 近红外荧光     货号11553 货号 11553 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 3924
Ex (nm) 648 Em (nm) 668
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒,过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小,因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比,过氧化酶也更便宜;其主要缺点是在保护剂(例如叠氮化钠)存在的条件下溶解性低;而在低浓度下,过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA(酶联免疫吸附实验)、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite荧光法过氧化酶检测试剂盒 *近红外荧光* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析检测方案。本试剂盒使用Amplite IR,HRP近红外荧光底物。Amplite IR是过氧化酶的显色底物,它比H2O2和过氧化酶,及其它的过氧化酶的显色底物(例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue)具有更高的灵敏度。Amplite IR可产生在647 nm具有最大吸收光,在670 nM处具有最大激发光的底物,这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小,在600nm处几乎没有光吸收。本试剂盒可以用于ELISAs,酶促反应动力学分析,氧化酶抑制剂高通量筛选等。本试剂盒经过最优化处理,并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒。 

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适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 647 ± 5 nm
推荐孔板: 透明底板
荧光酶标仪  
激发: 640nm
发射: 680nm
cutoff: 665nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备过氧化物酶工作溶液(50μL)
2.添加HRP标准品和/或测试样品(50μL)
3.在室温下孵育30-60分钟
4.监测Ex / Em = 640/680 nm处的荧光强度(截止= 665 nm)

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Amplite IR过氧化物酶底物储备液(100X):
将250μLDMSO(组分E)加入到Amplite IR过氧化物酶底物(组分A)的小瓶中以制备100X Amplite IR过氧化物酶底物储备溶液。

1.2 HRP标准溶液(20 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分C)加入到辣根过氧化物酶(组分D)的小瓶中以制备20U / mL HRP标准溶液。

1.3 H2O2储备溶液(20 mM):
将22.7μL的3%H2O2(0.88M,组分B)加入977μL的测定缓冲液(组分C)中以制备20mM H2O2储备溶液。 注意:稀释的H2O2溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

 

2.标准溶液

HRP标准
将15μL20U / mL HRP标准溶液加入985μL测定缓冲液(组分C)中,得到300 mU / mL HRP标准溶液(SD7)。 取300 mU / mL HRP标准溶液(SD7),进行1:3连续稀释,得到连续稀释的HRP标准品(SD6 – SD1)和分析缓冲液(组分C)。

 

3.工作溶液

将50μL的100X Amplite IR过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20mM H2O2储备溶液加入到4.9mL的测定缓冲液(组分C)中以制备过氧化物酶工作溶液,避光。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品(SD1-SD7,0.41至300mU / mL),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
SD1 SD1
SD2 SD2
SD3 SD3    
SD4 SD4    
SD5 SD5    
SD6 SD6    
SD7 SD7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
SD1-SD7 50ul 连续稀释液(0.41至300 mU / mL)
BL 50ul 分析缓冲液(组分C)
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品(SD),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL过氧化物酶工作溶液,使总过氧化物酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μL过氧化物酶工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟,避光。

4.用荧光板读数器在激发= 600-650nm,发射= 650-690nm(最佳Ex / Em = 640 / 680nm,截止= 665nm)监测荧光增加。 注意:也可将板的内容物转移到白色透明底板上,并用吸光度酶标仪在647±5nm波长下读数。 与荧光读数相比,吸收检测具有较低的灵敏度。

 

参考文献

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Authors: Dudkin EA, Gruberg ER.
Journal: J Comp Neurol (1999): 212

 

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说明书
Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 近红外荧光 .pdf