Bio-Rad伯乐常用现货表

Bio-Rad伯乐常用现货表
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货号  描述  中文  报价
1653308  INNER GLASS PLATE,5,M-P3  玻璃板 237.60
1653310  OUTER GLASS PLT,.75 SP,5,M-P3  玻璃板 710.60
1653311  OUT GLASS PLT W/1mm SP,5,M-P3  玻璃板 710.60
1653312  OUT GLASS PLT W/1.5mmSP,5,M-P3  玻璃板 750.20
1653352  COMB,5 TOOTH,.75mm THK,M-P3  梳子 217.80
1653353  COMB,9 TOOTH,.75mm THK,M-P3  梳子 217.80
1653354  COMB,10 TOOTH,.75mm THK,M-P3  梳子 217.80
1653355  COMB,15 TOOTH,.75mm THK,M-P3  梳子 217.80
1653356  COMB,2D/PREP,.75mm THK,M-P3  梳子 217.80
1653357  COMB,5 TOOTH,1mm THK,M-P3  梳子 217.80
1653358  COMB,9 TOOTH,1mm THK,M-P3  梳子 217.80
1653359  COMB,10 TOOTH,1mm THK,M-P3  梳子 217.80
1653360  COMB,15 TOOTH,1mm THK,M-P3  梳子 217.80
1653365  COMB,10 TOOTH,1.5mm THK,M-P3  梳子 217.80
1653366  COMB,15 TOOTH,1.5mm THK,M-P3  梳子 217.80
1652082  MINIPACK GPII CUVETTE,0.2cm,5  电击杯 247.50
1652083  MINIPACK GPII CUVETTE,0.1cM,5  电击杯 247.50
1652086  CUVETTES 2MM PKG 50 STERILE  电击杯 2427.70
1652088  CUVETTES 4MM PKG 50 STERILE  电击杯 2427.70
1652089  CUVETTES 1MM PKG 50 STERILE  电击杯 2427.70
1652091  GENEPULSER CUVETTE,0.4CM,500PK  电击杯 18441.50
1652092  GENEPULSER CUVETTE,0.2CM,500PK  电击杯 18441.50
1652093  GENEPULSER CUVETTE,0.1CM,500PK  电击杯 18441.50
1653304 CASTING FRAME,M-P3  制胶架 632.50
1653305 GASKET,CASTING STAND,M-P3  垫条 612.70
1703931 GEL HOLDER, MINI TRANS-BLOT  转印夹 1234.20
1703932 FILTER PAPER 50/PKG,MINI T/B  厚滤纸 523.60
1703933 FOAM PADS PKG 0F 4, MINI T/B  海绵垫 612.70
1610374 PRECISION PLUS STD DUAL COLOR  双色预染蛋白marker 642.40
1610375 PREC PLUS STD KALEIDOSCOPE  蓝色预染蛋白marker 779.90
1620177 IMMUN-BLOT PVDF MEM,26CMX3.3M  PVDF膜 2576.20
1705060 Clarity Western ECL Substrate, 200ml  100ml装Clarity化学发光液 1609.30
1705061 Clarity Western ECL Substrate, 500ml  250ml装Clarity化学发光液 3217.50
1708890 KIT,iSCRIPT cDNA SYNTHESIS,25R  iScript™ cDNA 合成试剂盒 760.10
1708891 KIT,iSCRIPT cDNA SYNTHES,100R  iScript™ cDNA 合成试剂盒 2832.50
TBS0201 TUBE,STRIP-8,NATL 120 STRIPS  PCR8联管,高位 789.80
TCS0801 CAP STRIP-8,DOMED 130 STRIPS  PCR8联管盖 503.80
TCS0803 OPTICAL,8-CAP STRIP,FLAT (120)  PCR8联管盖通用 385.00
TLS0801 TUBE,STRIP-8,LO-PRO NAT 120/PK  PCR8联管,低位 898.70
TLS0851 TUBE,STRIP-8,LO-PRO WHT 120/PK  PCR8联管,低位 986.70
HSP9601 HSP-96,WHT/CLR 50/BX  Hard-Shell® 96 孔全裙边 PCR 反应板,低位 通明 1835.90
HSP9655 HSP-96,WHT/WHT 50/BX  Hard-Shell® 96 孔全裙边 PCR 反应板,低位 白色 1835.90
MLP9601 MULTIPLATE-96,NATL 25/BX  Multiplate96孔无裙边PCR反应板,高位 1075.80
MLP9651 MULTIPLATE-96,WHITE 25/BX  Multiplate96孔无裙边PCR反应板 1401.40
MSB1001 MICROSEAL B ADHES SEAL,100/PK  Microseal® ‘B’ 封板膜 1293.60
1450015 TC10 Counting slides, double-chamber 150 slides (300 samples)  细胞计数板  计数板试剂盒 3493.60
1450016 TC10 Counting slides, double-chamber 300 slides (600 samples)  细胞计数板 计数板试剂盒 6503.20

灭活卡介苗佐剂 1×50mg/支 灭活结核杆菌冻干粉 关节造模 免疫 实验试剂 包邮

灭活卡介苗佐剂 1×50mg/支 灭活结核杆菌冻干粉 关节造模 免疫 实验试剂 包邮

1 本品简介
本品是用结核杆菌标准菌株ATCC 25177在固体培养基上培养,然后经液体培养基放大培养,离心收集菌体,为结核杆菌减毒活菌菌体,经75℃ 1h度灭活。加入冻干保护剂(明胶、谷氨酸钠、氯化钾和蔗糖),经冻干制备而成。

商品名 卡介苗冻干粉
规格 50mg
成分 结核杆菌
保护剂 明胶、谷氨酸钠、氯化钾和蔗糖
形态 菌体
运输方式 冰袋低温运输
用途 用于制备佐剂、关节造模、免疫;注明:不能用于临床、食品等相关领域

2 使用方法
使用前先用75%的酒精对管口进行消毒处理,然后在无菌条件下操作。使用生理盐水混合定容后,建议充分混悬菌体,以使注射器针头可以顺畅吸取菌体为准。
注意:如果是关节造模,在与佐剂混合后请继续在75℃水浴2h灭活。禁止金属浴或烘烤。
3 储存   
4度条件下保质期2年。因细菌在37度下培养,正常情况下室温条件并不影响菌种成活率。
4 安全说明  
本品仅可用于实验,不可用于临床和人体试验。

FastDNA SPIN 50mL土壤试剂盒 116560600 土壤DNA提取试剂盒10g

FastDNA SPIN 50mL土壤试剂盒 116560600 土壤DNA提取试剂盒10g
MP Biomedicals
FastDNA SPIN土壤试剂盒
从土壤、淤泥等复杂环境样本
快速高效提取总DNA

由于其独特的设计,FastDNA SPIN土壤试剂盒,能从土壤、淤泥等复杂环境样本中高效提取全部微生物的总DNA:将多达500mg的样本加入到裂解介质E管中振荡裂解,获取多种疑难样本(例如真菌孢子、内生孢子、革兰氏菌和酵母等)总DNA,经过硅胶基质离心纯化,可直接用于PCR等下游实验。
 
通用广——适用于不同来源的土壤;
高效裂解——瞬间完全裂解样品中的所有微生物;
高产出——DNA产量高,纯度高;
高质量——保留DNA分子的大小和完整;
方便——有效的去除腐殖酸和PCR抑制剂,可直接用于下游实验;
无污染——封闭的裂解介质管避免交叉污染;
一致——不同实验之间优异的重复;
无毒——无需有危害的有机试剂;
广泛验证——超过500篇引用文献。

 

免费试用
 
产品:FastDNA SPIN土壤试剂盒
货号:116560000
规格:5次

 

 
DNA/RNA提取
 宏基因组学和生物多样研究更多优质选择
 
MP
 
1

 

DNA提取试剂盒

No.1 FastDNA SPIN土壤试剂盒
DNA·最畅销款
货号:116560200
规格:50次
1、多达500mg的土壤样品或其他环境生物学样品;
2、内含裂解介质E;
3、通过硅胶离心柱法纯化DNA;
4、有效去除腐殖酸和其他PCR抑制剂。
 
No.2 FastDNA SPIN 50mL土壤试剂盒
DNA·大量提取
货号:116560600
规格:10次
1、多达10g的土壤样品或其他环境生物学样品;
2、内含50mL裂解介质管(含裂解介质);
3、通过硅胶离心柱法纯化DNA(50mL离心过滤管);
4、有效去除腐殖酸或多酚类。
 
No.3 FastDNA-96 SPIN 土壤微生物试剂盒
DNA·高通量
货号:119696200
规格:2×96次
1、多达130mg的土壤样品或其他环境生物学样品;
2、内含96深孔板及裂解介质;
3、50-100μL洗脱液含约5μg的总DNA;
4、有效去除腐殖酸或多酚类。
 
No.4 FastDNA SPIN 粪便试剂盒
DNA·直接用于PCR
货号:116570200
规格:50次
1、多达500mg的粪便样品;
2、内含裂解介质E;
3、通常可以从500mg粪便样品中分离得到10-20μg总DNA;
4、去除对下游实验有影响的有机污染物。
 
No.5 FastDNA-96粪便试剂盒
DNA·高通量
货号:119696400
规格:2×96次
1、每孔多达80mg干/湿粪便样品;
2、96孔深孔板内含裂解介质Y;
3、50-100μL洗脱液含约5μg的总DNA;
4、去除全部PCR抑制剂。
 

2

 

RNA提取试剂盒

No.1 FastRNA Pro直接法土壤试剂盒
从土壤分离·直接用于RT-PCR
货号:116070050
规格:50次
1、多达500mg的土壤样品或其他环境生物学样品;
2、内含裂解介质E;
3、有效去除腐殖酸和其他抑制剂;
4、匀浆时有效灭活RNA酶,防止RNA降解。
 
No.2 FastRNA Pro间接法土壤试剂盒
从上清液分离·直接用于RT-PCR
货号:116075050
规格:50次
1、多达1g的土壤样品或其他环境生物学样品;
2、初步分离土壤中的微生物和其他生物样品;
3、内含裂解介质E;
4、匀浆时有效去除PCR抑制剂和灭活RNA酶活。

DNA数据库建设专用DNA-STR分型试剂盒 DNATyper®15试剂盒

第一包:

序号 采购项 货物品牌及型号 制造商 单位 数量 单价 金额
1 DNA数据库建设专用DNA-STR分型试剂盒 DNATyper®15试剂盒 公安部物证鉴定中心 260 9000 2340000
投标总报价 小写:¥2340000.00
大写:人民币贰佰叁拾肆万圆整

第二包:

序号 采购项 货物品牌及型号 制造商 单位 数量 单价 金额
<span=”ole_link66″>1 </span=”ole_link66″> Identifilerplus
试剂盒
<span=”ole_link62″>Life Technologies </span=”ole_link62″>
4427368
200人份/盒
<span=”ole_link34″>美国Life Technologies </span=”ole_link34″> 6 27500 165000
2 Y 试剂盒 Life Technologies
4359513
100人份/盒
美国Life Technologies 1 30000 30000
3 3130 遗传分
析仪缓冲液
Life Technologies
402824、25ml/瓶
美国Life Technologies 12 1300 15600
4 3130 POP4 Life Technologies
4352755、7ml/瓶
美国Life Technologies <span=”ole_link3″>瓶 </span=”ole_link3″> 20 5300 106000
5 96 孔板 Life Technologies
N8010560、10块/盒
美国Life Technologies 20 780 15600
6 L500 Life Technologies
4322682、800次上样
美国Life Technologies 10 4380 43800
7 3130 毛细管 Life Technologies
4333464、8*36厘米
美国Life Technologies 1 8000 8000
8 HIDI Life Technologies
4311320、25ml/瓶
<span=”ole_link29″>美国Life Technologies </span=”ole_link29″> 10 450 4500
9 PK Life Technologies
100mg/瓶
<span=”ole_link30″>美国Life Technologies </span=”ole_link30″> 2 480 960
10 10ul 枪头 Axygen、1000只/盒 美国Axygen <span=”ole_link32″>盒 </span=”ole_link32″> 30 140 4200

中国采招网(bidcenter.com .cn:)

 

11 200ul 枪头 Axygen、1000只/盒 美国Axygen 10 140 1400
12 1000ul 枪头 Axygen、1000只/盒 美国Axygen 2 160 320
13 1.5 离心管 Axygen、500个/盒 美国Axygen 5 180 900
14 8 联管 Axygen、125排/盒 美国Axygen 10 950 9500
15 PSA 条 芬格尔、100条/盒 芬格尔 4 1300 5200
16 FOB 条 芬格尔、100条/盒 芬格尔 <span=”ole_link2″>盒 </span=”ole_link2″> 4 1100 4400
17 打孔器 达博、1.2ml 北京达博创新 2 1300 2600
18 单道移液器 艾本德、P10 德国Eppendorf 1 2000 2000
19 单道移液器 艾本德、P20 德国Eppendorf 1 2000 2000
20 单道移液器 艾本德、P100 德国Eppendorf 1 2000 2000
21 单道移液器 艾本德、P200 德国Eppendorf 1 2000 2000
22 单道移液器 艾本德、P1000 德国Eppendorf 1 2000 2000
23 八道移液器 艾本德、八道 德国Eppendorf <span=”ole_link1″>支 </span=”ole_link1″> 1 8000 8000
24 <span=”ole_link39″>脱落细胞粘 </span=”ole_link39″>
取器
博坤、10个/包 长春博坤 10 160 1600
25 PVC 手套 鸿瑞、10盒/箱 石家庄鸿瑞 3 600 1800
投标总报价 ¥:439380元

BD代理商 灭活结核杆菌 H37 Ra 231141 上海 北京 现货

BD DIFCO 灭活结核杆菌(M.Tuberculosis H37 Ra) 231141 上海代理商现货
BD代理商 灭活结核杆菌 H37 Ra 231141 上海 北京 现货
BD DIFCO灭活结核杆菌 231141 H37 RA 冻干粉
灭活结核杆菌(冻干粉) 结核杆菌 231141 BD DIFCO灭活结核杆菌231141
BD DIFCO 灭活结核杆菌(M.Tuberculosis H37 Ra) 231141
产品名称: BD DIFCO灭活结核杆菌 231141
英文名称: M Tuberculosis H37 Ra, Desiccatedr
产品货号: 231141
产品规格: 6*100MG
产品产地: 美国
产品商标: BD DIFCO
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保存与运输: 2-8 摄氏度
产品名称: BD DIFCO灭活结核杆菌231141
英文名称: M Tuberculosis H37 Ra, Desiccatedr
产品货号: 231141
产品规格: 6*100MG
产品产地: 美国
产品商标: BD DIFCO
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保存与运输: 2-8 摄氏度

BD DIFCO 灭活结核杆菌(M.Tuberculosis H37 Ra) 231141 上海代理商现货

BD DIFCO 灭活结核杆菌(M.Tuberculosis H37 Ra) 231141 上海代理商现货
BD DIFCO灭活结核杆菌 231141 H37 RA 冻干粉
灭活结核杆菌(冻干粉) 结核杆菌 231141 BD DIFCO灭活结核杆菌231141
BD DIFCO 灭活结核杆菌(M.Tuberculosis H37 Ra) 231141
产品名称: BD DIFCO灭活结核杆菌 231141
英文名称: M Tuberculosis H37 Ra, Desiccatedr
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英文名称: M Tuberculosis H37 Ra, Desiccatedr
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BD DIFCO灭活结核杆菌 231141 H37 RA 冻干粉

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灭活结核杆菌(冻干粉) 结核杆菌 231141 BD DIFCO灭活结核杆菌231141

BD DIFCO 灭活结核杆菌(M.Tuberculosis H37 Ra) 231141

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英文名称: M Tuberculosis H37 Ra, Desiccatedr
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BD DIFCO灭活结核杆菌 231141

灭活结核杆菌(冻干粉) 结核杆菌 231141 BD DIFCO灭活结核杆菌231141

BD DIFCO 灭活结核杆菌(M.Tuberculosis H37 Ra) 231141

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灭活结核杆菌(冻干粉) 结核杆菌 231141 BD DIFCO灭活结核杆菌231141

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英文名称: M Tuberculosis H37 Ra, Desiccatedr
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产品规格: 6*100MG
产品产地: 美国
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和光 wako 残留DNA提取试剂盒(碘化钠法) 292-81101 50 tests

Code No. 292-81101 (For 50 tests)

和光 wako 残留DNA提取试剂盒(碘化钠法) 292-81101  50 tests

残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

 

本产品遵照中国药典记载的碘化钠法,属于宿主细胞残余DNA抽提试剂盒。请用于疫苗和治疗用生物制品中含有的宿主细胞残余DNA的提取。

本试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA,回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90分钟。提取的DNA可以通过Q-PCR法进行定量。

 

采用该试剂盒提取DNA有两种方案。方案#1和方案#2分别从提纯样品(如纯化蛋白质)和原料样品(如细胞裂解物,一种含有高浓度蛋白质或脂质的溶液)中提取DNA。两种方案的不同点见下表。

 

  涉及样品 样品预处理步骤 洗涤步骤频次 试剂盒中“洗净液A,CP”
方案 #1 提纯样品 不需要 1次 未使用
方案 #2 原料样品 需要 2次 使用

 

 

【特点】

・遵照中国药典记载的碘化钠法

・高回收率

・单管提取DNA(无需更换管)

 

【通过碘化钠法提取DNA的原理】

通过碘化钠和N-月桂酰肌氨酸钠,将样品中的蛋白质及脂质等溶解。再添加2-丙醇,使DNA与糖原共同沉淀。此时离液离子的碘化钠及N-月桂酰肌氨酸钠阻碍样品中的蛋白质及脂质等成分沉淀,DNA及糖原发生特异性沉淀。

 

【试剂盒构成】

Code No. 内容物 内容量
299-81111 碘化钠溶液, CP 26mL×1
296-81121 N-月桂酰肌氨酸钠溶液, CP 1.2mL×1
293-81131 洗净液A, CP 42mL×1
290-81141 洗净液B, CP 40mL×2
297-81151 糖原溶液, CP 0.1mL×1

 

【存储】

2-10℃避光保存。

 

【50次试验所需的附加材料】

<试剂>

1) 2-丙醇 20 mL

2) 无菌蒸馏水 6 mL

 

<仪器>

1) 微型离心机

2) 涡旋混合器

3) 50x2mL或1.5mL离心管

4) 微量移液器

5) 微量移液器吸头

6) 加热器

 

【使用前】

 

  • “洗净液A, CP”根据批次不同,溶液颜色有可能存在差异(无色~浅黄色),产品性能没有问题,属正常现象。
  • 在碘化钠溶液, CP或N-月桂酰肌氨酸钠溶液, CP产生沉淀物时,请在50℃条件下加热至沉淀物溶解。
  • 请使用未受DNA或DNase污染的试剂及器具。
  • 如果提取的DNA中残留有碘化钠,将导致无法通过吸光度准确测量DNA浓度。请通过Q-PCR法将DNA定量。

 

 

【使用方法#1】

 

<试剂的调制>

  1. 溶液I

在26mL的“碘化钠溶液, CP”容器中添加6mL“无菌蒸馏水”、1mL“N-月桂酰肌氨酸钠溶液, CP”、65µL“糖原溶液, CP”共计三种。利用涡旋混合器充分混合均匀。

备注:在冷藏保存条件下,溶液I稳定状态可保持约5个月。

 

  1. 溶液II

在40 mL“洗净液 B, CP”容器中添加2µL“糖原溶液, CP”。立即使用涡旋混合器充分混合均匀。

备注:

・此时,即使产生白色沉淀物也不会影响DNA的提取效率。请直接使用。

・在冷藏保存条件下,溶液 II稳定状态可保持约1周。在少量使用时,只需调制所需量即可。例如:20mL“洗净液B, CP”中添加1µL“糖原溶液, CP”。

 

<DNA的提取>

  1. 吸取100µL样品加入1.5 mL或2mL离心管。
  2. 再添加300µL配制好的溶液I至该离心管,并使用涡旋混合器混合均匀;
  3. 将离心管在60℃条件下加热15分钟
  4. 取出离心管,加入 400µL 2-丙醇至离心管,并使用涡旋混合器混合均匀。
  5. 离心管在室温下静置15分钟。
  6. 将离心管进行离心( 10,000 g, 15分钟,室温)。出现白色颗粒。
  7. 用移液管移除或小心倾倒管中上清液,直至管中液体容积小于约100µL。

备注:

・请注意不要去除颗粒

・若有颗粒漂浮,再次将离心管进行离心(10,000 g,15分钟,室温)。

・若残留溶液残留在管壁,将离心管倒置于滤纸以移除残留液体。

 

  1. 在离心管中添加1mL溶液II,并使用涡旋混合器混合均匀。请剧烈搅拌使白色颗粒从离心管上剥离。

9.将离心管进行离心( 10,000 g, 5分钟,室温)。

  1. 用移液管或小心倾倒的方式尽可能多地移除管中的上清液。

备注:

・请注意不要去除颗粒

・若有颗粒漂浮,再次将离心管进行离心(10,000 g,5分钟,室温)。

・若残留溶液残留在管壁,将离心管倒置于滤纸以移除残留液体。

  1. 将颗粒置于加热器、真空干燥器中加热(60℃)使其干燥,或使其自然干燥。

备注:

・若过分干燥的话,将导致DNA重新溶解困难。当颗粒呈潮湿的状态时,停止干燥。

・颗粒中含有DNA和糖原。

・由于溶液II包含可以抑制qPCR的乙醇,管中残留液体过多会降低qPCR效率。

 

  1. 将颗粒在无菌蒸馏水或缓冲液中重新溶解,至Q-PCR。

 

 

【使用方法#2】

 

<试剂的调制>

  1. 溶液I-B

在26mL的“碘化钠溶液,CP”容器中添加65µL的“糖原溶液,CP”,利用涡旋混合器充分混合均匀。

备注:在2-10避光保存条件下,溶液I-B稳定状态可保持约5个月。

 

  1. 溶液II

在40 mL“洗净液 B,CP”容器中添加2µL“糖原溶液,CP”。立即使用涡旋混合器充分混合均匀。

备注:

此时,即使溶液II中产生白色沉淀物也不会影响DNA的提取质量

在2-10避光保存条件下,溶液 II稳定状态可至少保持约1周。制备少量时,只需调制所需量的“糖原溶液,CP”和“洗净液 BCP”即可。例如,在20 mL“洗净液 BCP”无菌容器中添加1µL“糖原溶液,CP”

 

<样品制备 >

■样品溶液中蛋白质浓度小于2mg/mL时

 

  1. 将下列试剂加入样品溶液至最终浓度。

 

试剂 最终浓度

十二烷基硫酸钠 0.10%

二硫苏糖醇 50mmol/L

 

  1. 在加热器中加热(55℃)30分钟。

 

■样品溶液中蛋白质浓度大于2mg/mL时

  1. 将下列试剂加入样品溶液至最终浓度。

 

试剂 最终浓度

十二烷基硫酸钠 0.10%

二硫苏糖醇 50mmol/L

氯化钠 150mmol/L

乙二胺四乙酸 (EDTA) 1mmol/L

 

  1. 将蛋白酶K按照样品溶液中每1mg蛋白质20µg的比例加入样品溶液。
  2. 采用三羟甲基氨基甲烷将pH调至约7.5。
  3. 在加热器中加热(55℃)至少1小时。

 

 

<DNA的提取>

 

  1. 吸取400-500µL 样品溶液加入2mL空白离心管。
  2. 添加20µL“N-月桂酰肌氨酸钠溶液,CP”至该离心管,并使用涡旋混合器混合均匀。
  3. 添加500µL溶液I-B至该离心管,并使用涡旋混合器混合均匀。
  4. 在加热器中将离心管在40℃条件下加热15分钟。
  5. 从加热器中取出离心管。加入900µL 2-异丙醇至离心管,并使用涡旋混合器混合均匀。
  6. 离心管在室温下静置15分钟。
  7. 将离心管进行离心( 10,000 g, 15分钟,室温)。出现白色颗粒。
  8. 用移液管移除或小心倾倒管中上清液,直至管中液体容积小于约100µL。

备注:

・请注意不要去除管中颗粒。

・若有颗粒漂浮,再次将离心管进行离心(10,000 g,15分钟,室温)。

・若残留溶液残留在管壁,将离心管倒置于滤纸以移除残留液体。

  1. 添加800µL“洗净液A,CP”至该离心管,并使用涡旋混合器充分混合均匀。

确保颗粒从管壁脱落。

  1. 将离心管进行离心( 10,000 g, 5分钟,室温)
  2. 用移液管移除或小心倾倒管中上清液,直至管中液体容积小于约100µL。

备注:

・请注意不要去除管中颗粒。

・若有颗粒漂浮,再次将离心管进行离心(10,000 g,5分钟,室温)。

・若残留溶液残留在管壁,将离心管倒置于滤纸以移除残留液体。

  1. 添加5mL溶液II至该离心管,并使用涡旋混合器充分混合均匀。
  2. 将离心管进行离心( 10,000 g, 5分钟,室温)。
  3. 用移液管或小心倾倒的方式尽可能多地移除管中的上清液。

备注:

・请注意不要去除管中颗粒。

・若有颗粒漂浮,再次将离心管进行离心(10,000 g,5分钟,室温)。

・若残留溶液残留在管壁,将离心管倒置于滤纸以移除残留液体。

  1. 将颗粒置于加热器、真空干燥器中加热(60℃)使其干燥,或使其自然干燥。

备注:

・若过分干燥的话,将导致DNA重新溶解困难。当颗粒呈潮湿的状态时,停止干燥。

・颗粒中含有DNA和糖原。

・由于溶液II包含可以抑制qPCR的乙醇,管中残留液体过多会降低qPCR效率。

  1. 将颗粒在无菌蒸馏水或缓冲液中重新溶解,至Q-PCR。

 

【FAQ】

 

  1. 利用吸光度测量提取的DNA浓度时,在230nm波长处出现波峰。
  2. 虽然残留有碘化钠,但对于Q-PCR无影响。

 

  1. DNA的回收率低
  2. 在DNA提取操作步骤7.和10.中极有可能一部分颗粒被除去。请使用移液管谨慎去除上清液。

 

 

<Reference>

Ishizawa, M., Kobayashi, Y., Miyamura, T. and Matuura, S. (1991) Simple Procedure of DNA isolation from human serum, Nucleic Acids Res., 19, 5792.

Code No. 292-81101 (For 50 tests)

 

DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method(Sodium Iodide Method)

 

This product is in compliance with sodium Iodide method and designed for use in extracting residual host cell DNA in biological samples such as vaccines and biopharmaceuticals.

It offers high recovery of DNA even from samples containing only a very small amount of DNA. The entire extraction step is completed with a single tube for 60-90 minutes. The extracted DNA can be quantified by qPCR.

 

There are two protocols for DNA extraction using this kit. Protocol #1 and Protocol #2 are used for DNA extracting from clean samples such as purified protein and crude samples such as cell lysate, solution containing high-concentration protein or lipid, respectively. Difference between the two protocols are indicated in the table below.

 

  Sample of

interest

Pretreatment step of sample Number of
washing steps
“Washing Solution A, CP” in the kit
Protocol #1 Clean Not required 1 time Not used
Protocol #2 Crude Required 2 times Used

 

【Features】

・In compliance with sodium Iodide method

・High quality and recovery

・Completed in a single tube for 60-90 minutes.

 

【Principle of sodium Iodide method for DNA extraction】

An chaotropic reagent, Sodium Iodide, and an anionic detergent participate in solubilization of proteins and lipids contained in biological samples. After addition of 2-propanol to the mixture, nucleic acids are co-precipitated with glycogen as a carrier, while other components remain soluble in the solution phase.

 

【Kit contents】

Code No. Components Size
299-81111 Sodium Iodide Solution, CP 26mL×1
296-81121 Sodium N-Lauryl Sarcosinate Solution, CP 1.2mL×1
293-81131 Washing Solution A, CP 42mL×1
290-81141 Washing Solution B, CP 40mL×2
297-81151 Glycogen Solution, CP 0.1mL×1

 

【Storage】

Store at 2-10℃ in the dark.

 

【Additional materials required for 50 tests】

<Reagents>

1) 2-Propanol 20 mL

2) Sterile distilled water 6 mL

 

<Instruments>

1) Microcentrifuge

2) Vortex mixer

3) 50x2mL or 1.5mL of centrifuge tube

4) Micropipette

5) Micropipette tips

6) Heating block

 

 

Precautions for Use

 

  • The color of “Washing Solution A, CP”may be slightly different between product lots. g. faint yellow or colorless. It does not affect quality of DNA extraction.
  • If precipitate is observed in “Sodium Iodide Solution, CP” or “Sodium N-Lauryl Sarcosinate Solution, CP”, warm it or them at 50℃until the precipitate is no longer visible.
  • Use DNA-free, DNase-free and sterilizedreagents and Instruments.
  • DNA concentration cannotbe accurately measured by absorbance if sodium Iodide remains in the extracted DNA. Measure the amount of DNA by qPCR

 

 

Protocol #1

 

< Preparation of Reagents>

Solution I-A

Add 6mL of sterile distilled water, 1mL of “Sodium N-Lauryl Sarcosinate Solution, CP” and 65µL of “Glycogen Solution, CP” into the bottle of 26mL of “Sodium Iodide Solution, CP”. Mix it with a vortex mixer.

Note : Solution I-A can be stored at 2-10℃ in the dark for approximately 5 months.

 

Solution II

Add 2µL of “Glycogen Solution, CP” into the bottle of 40 mL of “Washing Solution B, CP”. Mix it with a vortex mixer immediately.

Notes :

  • It does not affect quality of DNA extraction if white precipitates appear in Solution II.
  • Solution II can be stored at 2-10℃in the dark for approximately a week at least. If preparing a small volume of Solution II, use required amount of “Glycogen Solution, CP” and “Washing Solution B, CP”. For example, add 1µL of “Glycogen Solution, CP” into 20mL of “Washing Solution B, CP” in a sterilized tube.

 

< DNA Extraction Procedure>

  1. Dispense100µof sample solution to a 2mL or 1.5mL blank centrifuge tube.
  2. Add 300µLof Solution I-A into the tube and mix it with a vortex mixer.
  3. 3.Warm the tube at 60℃ for 15 minutes in a heating block.
  4. 4.Remove the tube from the heating block. Add 400µLof 2-Propanol into the tube and mix it with a vortex mixer.
  5. Leave the tube at room temperaturefor 15 minutes.
  6. Centrifugethe tube with 10,000 g at room temperature for 15 minutes.

A faint white pellet appears in the tube.

  1. Remove supernatant from the tubeby using a pipette or decanting carefully until the liquid volume in the tube is less than approximately 100µL.

Notes :

・Be careful not to remove the pellet from the tube.

・Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 15 minutes again if the pellet floats.

・In case that residual liquid remains on the tube wall, place the tube upside down on a paper filter to remove it.

  1. Add 1mL of Solution IIinto the tube and mix it with a vortex mixer vigorously.

Ensure that the pellet is detached from the tube wall.

9.Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes.

  1. Removeas much supernatant as possible from the tube by using a pipette or decanting carefully.

Notes :

・Be careful not to remove the pellet from the tube.

・Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes again if the pellet floats.

・In case that residual liquid remains on the tube wall, place the tube upside down on a paper filter to remove it.

  1. Dry the pellet by warming it at 60℃ in a heating block, vacuum dryeror natural drying.

Notes :

・Too dry pellet is difficult to be dissolved. Stop drying the pellet when it still is wet.

・Much residual liquid in the tube may cause low qPCR efficiency because Solution II contains ethanol, which can inhibit qPCR.

・The pellet contains DNA and glycogen.

  1. Dissolve the pellet with sterile distilled wateror buffer, and proceed with qPCR.

 

 

 

Protocol #2

 

< Preparation of Reagents >

  1. Solution I-B

65µL of “Glycogen Solution, CP” into the bottle of 26mL of “Sodium Iodide Solution, CP”. Mix it with a vortex mixer.

Note : Solution I-B can be stored at 2-10 in the dark for approximately 5 months.

 

  1. Solution II

Add 2µL of “Glycogen Solution, CP” into the bottle of 40 mL of “Washing Solution B, CP”. Mix it with a vortex mixer immediately.

Notes :

・It does not affect quality of DNA extraction if white precipitates appear in Solution II.

・Solution II can be stored at 2-10 in the dark for approximately a week at least. If preparing a small volume of Solution II, use required amount of “Glycogen Solution, CP” and “Washing Solution B, CP”. For example, add 1µL of “Glycogen Solution, CP” into 20mL of “Washing Solution B, CP” in a sterilized tube.

 

 

< Preparation of Samples >

■In case that protein concentration in the sample solution is less than 2mg/mL.

 

  1. Addthe reagents below into the sample solution to the final concentration.

 

Reagents Final concentration

Sodium Dodecyl Sulfate 0.10%

Dithiothreitol 50mmol/L      

 

  1. Warm it at 55℃for 30 minutesin a heating block.

 

■In case that protein concentration in the sample solution is more than 2mg/mL.

  1. Addthe reagents below into the sample solution to the final concentration.

 

Reagents Final concentration

Sodium Dodecyl Sulfate 0.10%

Dithiothreitol 50mmol/L

Sodium Chloride 150mmol/L

EDTA 1mmol/L      

 

  1. Add 20µg of Proteinase K per 1mg of protein in the sample solution in to the sample solution.
  2. Adjust pH to be approximately 7.5 with Tris.
  3. Warm it at 55℃for an hour at least in a heating block.

 

< DNA Extraction Procedure>

 

  1. Dispense 400-500µL of sample solution to a 2mL blank centrifuge tube.
  2. Add 20µL of “Sodium N-Lauryl Sarcosinate Solution, CP” into the tube and mix it with a vortex mixer.
  3. Add 500µL of Solution I-B into the tube and mix it with a vortex mixer.
  4. Warm the tube at 40℃for 15 minutes in a heating block.
  5. Remove the tube from the heating block. Add 900µL of 2-Propanol into the tube and mix it with a vortex mixer.
  6. Leave the tube at room temperature for 15 minutes.
  7. Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 15 minutes.

A faint white pellet appears in the tube.

  1. Remove supernatant from the tubeby using a pipette or decanting carefully until the liquid volume in the tube is less than approximately 100µL.

Notes :

・Be careful not to remove the pellet from the tube.

・Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 15 minutes again if the pellet floats.

・In case that residual liquid remains on the tube wall, place the tube upside down on a paper filter to remove it.

  1. Add 800µL of “Washing Solution A, CP” into the tube and mix it with a vortex mixer vigorously.

Ensure that the pellet is detached from the tube wall.

  1. Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes.
  2. Remove supernatant from the tubeby using a pipette or decanting carefully until the liquid volume in the tube is less than approximately 100µL.

Notes :

・Be careful not to remove the pellet from the tube.

・Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes again if the pellet floats.

・In case that residual liquid remains on the tube wall, place the tube upside down on a paper filter to remove it.

  1. Add 1.5mL of Solution II into the tube and mix it with a vortex mixer vigorously.
  2. Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes.
  3. Removeas much supernatant as possible from the tube by using a pipette or decanting carefully.

Notes :

・Be careful not to remove the pellet from the tube.

・Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes again if the pellet floats.

・In case that residual liquid remains on the tube wall, place the tube upside down on a paper filter to remove it.

  1. Dry the pellet by warming it at 60℃ in a heating block, vacuum dryeror natural drying.

Notes :

・Too dry pellet is difficult to be dissolved. Stop drying the pellet when it still is wet.

・Much residual liquid in the tube may cause low qPCR efficiency because Solution II contains ethanol, which can inhibit qPCR.

・The pellet contains DNA and glycogen.

  1. Dissolve the pellet with sterile distilled water or buffer, and proceed with qPCR.

 

 

FAQ

 

  1. Peak wavelengthappeared at 230nm when extracted DNA concentration was measured by absorbance.
  2. Sodium Iodide remains in the extracted DNA. Measure the amount of DNA by qPCR

 

  1. DNA recovery rate was too low.
  2. Apart of DNApellet may have been removed at step 7 or 10. Remove the supernatant with a pipette carefully.

 

<Reference>

Ishizawa, M., Kobayashi, Y., Miyamura, T. and Matuura, S. (1991) Simple Procedure of DNA isolation from human serum, Nucleic Acids Res., 19, 5792.

按照美国AIN-93标准生产的 大鼠、小鼠纯化型标准饲料(鼠粮) 定制饲料

按照美国AIN-93标准生产的
大鼠、小鼠纯化型标准饲料(鼠粮)

 

【美国AIN-93标准】美国营养学会(AIN93)标准是在其前身AIN76A标准基础上修订,替代了AIN-76A标准。该标准对大鼠和小鼠进行了分期制定标准,其中,M型用于维持期(成年期),G型用于生长期和繁殖期(妊娠、哺乳)。AIN93标准成为当今广泛使用的标准。尽管在AIN93标准颁布后,美国国家标准(NRC-95标准)对大鼠和小鼠的营养素水平的要求高于AIN93,但至今AIN93没有修改,有不少研究论文中采用了符合NRC标准的AIN93标准,实际上就是符合NRC-95标准的纯化型饲料。

上海金畔生物科技有限公司按照美国AIN93标准生产的纯化型标准饲料代码:JP3001,用于大鼠和小鼠的喂养和科学研究。

【对美国AIN-93标准的错误认识】AIN93标准中包括几个部分,其中,包括配比(配方)和饲料的热量和营养素各项指标的含量。很多人只知道AIN93标准配方,却不知道做成的饲料每种营养素含量应当达到的水平,从而盲目购买和使用所需的饲料原料。经常有研究人员向我们咨询为什么购买的其他单位的号称生产AIN93标准饲料,喂养的结果是动物很多异常,例如,动物饮食不正常,盲肠变黑,胆结石,肾结石,等等异常现象。

 

大鼠、小鼠AIN-93标准饲料的用途


【1】以纯化型饲料为基础制作模型饲料时,本产品作为模型饲料的对照饲料。

【2】研究食物或者饲料中除了营养素成分之外的成分的功能时,本产品作为对照喂养的饲料。

【3】用于大鼠和小鼠营养素需要量的饲料。

大鼠、小鼠AIN-93标准纯化饲料产品介绍


产品代码:LAD3001G。用于喂养生长期和繁殖期(妊娠、哺乳)大鼠或小鼠。

产品代码:LAD3001M。用于喂养成年期大鼠或小鼠。

生产标准:符合美国AIN93标准,并且符合实验动物配合饲料通用质量要求(GB 14924.1), 实验动物配合饲料卫生标准(GB 14924.2)。

饲料类型:棒状,也可根据用户需要提供粉状、液体状。

原料组成:酪蛋白、玉米淀粉、玉米糊精,糖、纤维素、豆油、蛋氨酸、胆碱、维生素、矿物质。

产品规格:根据用户需要每袋包装量。

最小起订:不限。

产品包装:内层是牛皮纸袋,外层是内衬塑料的包装袋。

包装消毒:国标规定清洁级动物使用的饲料包装需消毒。本产品根据用户需要决定是否需要辐照消毒。

保质期:从产品到达用户,至使用结束,如果超过一个月,这种情况下应当在收货后及时在4度冷藏,这时的保质期是4个月。如果需要长期喂养动物而没有条件冷藏,则建议采取分批购买,我们会分批生产和分批发货。

大鼠、小鼠AIN-93饲料说明


什么叫纯化饲料?

纯化饲料是指原料为高纯度的单体,日粮型饲料则是以天然或加工的粮食为原料,成分极其复杂。纯化饲料中成分清楚,尤其是没有影响动物机能的非营养素和抗营养素,没有毒性成分。

AIN93标准是什么意思?

AIN93标准有几层意思,(1)配方固定,组成成分固定,也就是所谓的AIN93“配方标准”。(2)成品饲料中每种营养成分的“含量标准”,这是AIN93的核心标准。不少单位有人希望省钱,节省开支,从而自己制作AIN93标准饲料。实际上,这种做法既不科学,又在经费上不省钱。

不科学的原因:(1)自己制作时,表面上是按照AIN93配方标准制作,但是,配方原料的营养素含量和纯度达不到要求,属于盲目采购,从而导致不能达到AIN93规定的含量标准(核心标准)。(2)即便是原料能够保障达到了配方标准,还有生产过程的损耗和消毒造成的损耗,这就很难保障制作的成品饲料达到AIN93规定的含量标准。(3)还有一个技术难题是,怎样制成颗粒状,毫无疑问,自己制作饲料时无法解决这个问题,如果不制成颗粒而是用粉状饲料,那么,长时间喂养对动物机能有明显影响,此外,粉状饲料喂养不仅不方便,而且容易造成饲料极大的浪费。

AIN93饲料涉及几十种原料,大多数只需要微量,而购买时都是大包装,造成经费浪费。

自己制作AIN93要特别注意泌尿系统结石:

如果科研人员按照美国AIN93配方自制实验动物饲料,由于制作不科学有可能引起(1)雌雄动物都会出现严重的肾结石、膀胱结石、肾积水、肾肿大,(2)雌雄动物出现结石的时间和部位表现有差别,雄性比雌性更敏感,雄性动物在5周左右已经出现,雌性稍迟出现,有的雄性动物可出现巨大肾,雌性动物以膀胱结石更多。(3)同一笼中的动物出现结石的时间和严重程度不一,所以,在解剖时往往不是每一动物都有明显的结石。

大鼠和小鼠吃AIN93标准的饲料,每天吃多少?

这要看动物的大小。一般来说,接近成年或成年的大鼠大约每天30g左右,小鼠大约是5g左右。

AIN93标准的各项营养素成分


AIN93标准饲料的各项营养素估计值见下表。

项目、成分 AIN93G AIN93M
热量 3766千卡/kg 3601千卡/kg
蛋白的热量占 19.3% 14.1%
脂肪的热量占 16.7% 10%
含水量 6.6% 6.8%
脂肪 7% 4%
碳水化合物 64.3% 72.7%
蛋白质 17.8% 12.5%
灰分 4.17% 3.89%
氨基酸含量
丙氨酸 4.6g 3.3g
精氨酸 6.4g 4.5g
天冬氨酸 12.2g 8g
谷氨酸 36.3g 25.5g
甘氨酸 3.2g 2.3g
赖氨酸 13g 9.2g
蛋氨酸 4.6g 3.3g
胱氨酸 3.7g 2.4g
色氨酸 2.1g 1.6g
脯氨酸 20.5g 14.3g
丝氨酸 9.7g 6.7g
组氨酸 4.6g 3.3g
亮氨酸 15.4g 10.9g
异亮氨酸 8.5g 5.9g
苯丙氨酸 8.8g 6.2g
酪氨酸 9.3g 6.6g
苏氨酸 6.7g 4.7g
缬氨酸 10g 7g
矿物质含量:
5000ppm 5000ppm
3000ppm 3000ppm
3600ppm 3600ppm
1039ppm 1033ppm
513ppm 511ppm
45ppm 45ppm
38ppm 35ppm
10ppm 10ppm
6ppm 6ppm
0.2ppm 0.2ppm
1ppm 1ppm
无机硫 300ppm 300ppm
1631ppm 1613ppm
其他有益元素 这里不显示 这里不显示
维生素含量:
维生素A 4IU/g 4IU/g
维生素D 1IU/g 1IU/g
维生素E 0.075IU/g 0.075IU/g
维生素K 0.9 ppm 0.86 ppm
硫胺素,B1 5 ppm 5 ppm
核黄素 6 ppm 6 ppm
烟酸 30 ppm 30 ppm
泛酸 15 ppm 15 ppm
维生素B6 6 ppm 6 ppm
胆碱 1000 ppm 1000 ppm
叶酸 2ppm 2ppm
生物素 0.2ppm 0.2ppm
维生素B12 25ppb 25ppb

动脉粥样硬化饲料 High fat rodent diet with 1.25% cholesterol D12108C 12.5kg

动脉粥样硬化饲料 High fat rodent diet with 1.25% cholesterol D12108C 12.5kg

动脉粥样硬化是一种复杂的慢性疾病,其特征为脂质在动脉壁堆积,最终形成版块,从而导致动脉缩小、硬化、以及/或者完全阻塞。

 

研究表明,含饱和脂肪和胆固醇的食物与循环胆固醇水平升高密切相关。

 

跟人类一样,西方膳食可诱导某些啮齿类动物(如小鼠、仓鼠和豚鼠)LDL-C升高和动脉粥样硬化。

 

ApoE敲除或者LDL受体敲除小鼠是诱导动脉粥样硬化的易感小鼠。大鼠很难诱导高胆固醇血症,因为当在膳食中添加胆固醇时,大鼠内源性的胆固醇产生迅速下降。然而,通常采用高脂添加胆固醇的饲料(如D12108C和D12079B)来诱导动脉粥样硬化和胆固醇血症,D12079B比D12108C含有更少的胆固醇,发展成动脉粥样硬化比较缓慢。Veillard等对ApoE敲除小鼠喂养D12108C饲料14周,观察到在第8周时,形成相当严重的病变。

 

推荐饲料:D12079B,D12108C。

 推荐产品  货号  规格  生产厂商
High fat rodent diet with 1.25% cholesterol D12108C 12.5kg 美国RDI
5% Sodium Cholic Acid,12.5% Cholesterol D12336 12.5kg 美国RDI

脂肪肝(NAFLD)饲料 Methionine and Choline Deficient Diet A02082002B 12.5kg

 脂肪肝(NAFLD)饲料    
 
非酒精性脂肪肝是一系列疾病状态,包括从脂肪变性到非酒精性脂肪性肝炎,其后进展为肝纤维化、肝硬化和肝癌。与人类很多疾病由膳食导致的一样,啮齿类动物的脂肪肝也可由膳食诱导。目前,常用三种膳食类型来诱导脂肪肝,分别为:蛋氨酸和胆碱缺乏(MCD)饲料、胆碱缺乏(CD)饲料和高脂(HFD)饲料。

 

MCD饲料用于研究肝病已有超过40年的历史,喂食MCD饲料的啮齿类动物将在2-4周内发展出显著脂肪肝,然后迅速演变为肝炎和纤维化。重要的是,与人类和其它方法诱导的NAFLD啮齿类动物模型不一样,喂养MCD饲料的啮齿类动物会减轻体重,且不发生胰岛素抵抗,这与人类典型的NASH患者情况相反,他们不但肥胖而且对胰岛素抵抗。

 

CD饲料与MCD饲料相比,潜在优势在于不但增加肝脏脂肪水平,而且增加体重,导致血脂异常和胰岛素抵抗。CD饲料所诱发的肝脏脂肪堆积、肝脏损伤和炎症并没有MCD饲料的严重。

 

HFD可以诱导啮齿类动物模型体重和体脂肪增加并导致胰岛素抵抗。一般来说,HFD喂养与MCD喂养相比,并不产生肝纤维化,且只有轻微脂肪肝。

 

推荐饲料:A02082002B,D05010401-03。

 
 推荐产品  货号  规格  生产厂商
Methionine and Choline Deficient Diet A02082002B 12.5kg 美国RDI
Methionine/choline deficient diet with 60 kcal% fat A06071301B 12.5kg 美国RDI
choline deficient diet with 0.1% Methionine A06071302 12.5kg 美国RDI
40 kcal% Fat, 20 kcal% Sucrose, and 2% Cholesterol D09100301 12.5kg 美国RDI

残留DNA提取试剂盒(碘化钠法) 292-81101

Code No. 292-81101 (For 50 tests)

 

残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

 

本产品遵照中国药典记载的碘化钠法,属于宿主细胞残余DNA抽提试剂盒。请用于疫苗和治疗用生物制品中含有的宿主细胞残余DNA的提取。

本试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA,回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90分钟。提取的DNA可以通过Q-PCR法进行定量。

 

采用该试剂盒提取DNA有两种方案。方案#1和方案#2分别从提纯样品(如纯化蛋白质)和原料样品(如细胞裂解物,一种含有高浓度蛋白质或脂质的溶液)中提取DNA。两种方案的不同点见下表。

 

  涉及样品 样品预处理步骤 洗涤步骤频次 试剂盒中“洗净液A,CP”
方案 #1 提纯样品 不需要 1次 未使用
方案 #2 原料样品 需要 2次 使用

 

 

【特点】

・遵照中国药典记载的碘化钠法

・高回收率

・单管提取DNA(无需更换管)

 

【通过碘化钠法提取DNA的原理】

通过碘化钠和N-月桂酰肌氨酸钠,将样品中的蛋白质及脂质等溶解。再添加2-丙醇,使DNA与糖原共同沉淀。此时离液离子的碘化钠及N-月桂酰肌氨酸钠阻碍样品中的蛋白质及脂质等成分沉淀,DNA及糖原发生特异性沉淀。

 

【试剂盒构成】

Code No. 内容物 内容量
299-81111 碘化钠溶液, CP 26mL×1
296-81121 N-月桂酰肌氨酸钠溶液, CP 1.2mL×1
293-81131 洗净液A, CP 42mL×1
290-81141 洗净液B, CP 40mL×2
297-81151 糖原溶液, CP 0.1mL×1

 

【存储】

2-10℃避光保存。

 

【50次试验所需的附加材料】

<试剂>

1) 2-丙醇 20 mL

2) 无菌蒸馏水 6 mL

 

<仪器>

1) 微型离心机

2) 涡旋混合器

3) 50x2mL或1.5mL离心管

4) 微量移液器

5) 微量移液器吸头

6) 加热器

 

【使用前】

 

  • “洗净液A, CP”根据批次不同,溶液颜色有可能存在差异(无色~浅黄色),产品性能没有问题,属正常现象。
  • 在碘化钠溶液, CP或N-月桂酰肌氨酸钠溶液, CP产生沉淀物时,请在50℃条件下加热至沉淀物溶解。
  • 请使用未受DNA或DNase污染的试剂及器具。
  • 如果提取的DNA中残留有碘化钠,将导致无法通过吸光度准确测量DNA浓度。请通过Q-PCR法将DNA定量。

 

 

【使用方法#1】

 

<试剂的调制>

  1. 溶液I

在26mL的“碘化钠溶液, CP”容器中添加6mL“无菌蒸馏水”、1mL“N-月桂酰肌氨酸钠溶液, CP”、65µL“糖原溶液, CP”共计三种。利用涡旋混合器充分混合均匀。

备注:在冷藏保存条件下,溶液I稳定状态可保持约5个月。

 

  1. 溶液II

在40 mL“洗净液 B, CP”容器中添加2µL“糖原溶液, CP”。立即使用涡旋混合器充分混合均匀。

备注:

・此时,即使产生白色沉淀物也不会影响DNA的提取效率。请直接使用。

・在冷藏保存条件下,溶液 II稳定状态可保持约1周。在少量使用时,只需调制所需量即可。例如:20mL“洗净液B, CP”中添加1µL“糖原溶液, CP”。

 

<DNA的提取>

  1. 吸取100µL样品加入1.5 mL或2mL离心管。
  2. 再添加300µL配制好的溶液I至该离心管,并使用涡旋混合器混合均匀;
  3. 将离心管在60℃条件下加热15分钟
  4. 取出离心管,加入 400µL 2-丙醇至离心管,并使用涡旋混合器混合均匀。
  5. 离心管在室温下静置15分钟。
  6. 将离心管进行离心( 10,000 g, 15分钟,室温)。出现白色颗粒。
  7. 用移液管移除或小心倾倒管中上清液,直至管中液体容积小于约100µL。

备注:

・请注意不要去除颗粒

・若有颗粒漂浮,再次将离心管进行离心(10,000 g,15分钟,室温)。

・若残留溶液残留在管壁,将离心管倒置于滤纸以移除残留液体。

 

  1. 在离心管中添加1mL溶液II,并使用涡旋混合器混合均匀。请剧烈搅拌使白色颗粒从离心管上剥离。

9.将离心管进行离心( 10,000 g, 5分钟,室温)。

  1. 用移液管或小心倾倒的方式尽可能多地移除管中的上清液。

备注:

・请注意不要去除颗粒

・若有颗粒漂浮,再次将离心管进行离心(10,000 g,5分钟,室温)。

・若残留溶液残留在管壁,将离心管倒置于滤纸以移除残留液体。

  1. 将颗粒置于加热器、真空干燥器中加热(60℃)使其干燥,或使其自然干燥。

备注:

・若过分干燥的话,将导致DNA重新溶解困难。当颗粒呈潮湿的状态时,停止干燥。

・颗粒中含有DNA和糖原。

・由于溶液II包含可以抑制qPCR的乙醇,管中残留液体过多会降低qPCR效率。

 

  1. 将颗粒在无菌蒸馏水或缓冲液中重新溶解,至Q-PCR。

 

 

【使用方法#2】

 

<试剂的调制>

  1. 溶液I-B

在26mL的“碘化钠溶液,CP”容器中添加65µL的“糖原溶液,CP”,利用涡旋混合器充分混合均匀。

备注:在2-10避光保存条件下,溶液I-B稳定状态可保持约5个月。

 

  1. 溶液II

在40 mL“洗净液 B,CP”容器中添加2µL“糖原溶液,CP”。立即使用涡旋混合器充分混合均匀。

备注:

此时,即使溶液II中产生白色沉淀物也不会影响DNA的提取质量

在2-10避光保存条件下,溶液 II稳定状态可至少保持约1周。制备少量时,只需调制所需量的“糖原溶液,CP”和“洗净液 BCP”即可。例如,在20 mL“洗净液 BCP”无菌容器中添加1µL“糖原溶液,CP”

 

<样品制备 >

■样品溶液中蛋白质浓度小于2mg/mL时

 

  1. 将下列试剂加入样品溶液至最终浓度。

 

试剂 最终浓度

十二烷基硫酸钠 0.10%

二硫苏糖醇 50mmol/L

 

  1. 在加热器中加热(55℃)30分钟。

 

■样品溶液中蛋白质浓度大于2mg/mL时

  1. 将下列试剂加入样品溶液至最终浓度。

 

试剂 最终浓度

十二烷基硫酸钠 0.10%

二硫苏糖醇 50mmol/L

氯化钠 150mmol/L

乙二胺四乙酸 (EDTA) 1mmol/L

 

  1. 将蛋白酶K按照样品溶液中每1mg蛋白质20µg的比例加入样品溶液。
  2. 采用三羟甲基氨基甲烷将pH调至约7.5。
  3. 在加热器中加热(55℃)至少1小时。

 

 

<DNA的提取>

 

  1. 吸取400-500µL 样品溶液加入2mL空白离心管。
  2. 添加20µL“N-月桂酰肌氨酸钠溶液,CP”至该离心管,并使用涡旋混合器混合均匀。
  3. 添加500µL溶液I-B至该离心管,并使用涡旋混合器混合均匀。
  4. 在加热器中将离心管在40℃条件下加热15分钟。
  5. 从加热器中取出离心管。加入900µL 2-异丙醇至离心管,并使用涡旋混合器混合均匀。
  6. 离心管在室温下静置15分钟。
  7. 将离心管进行离心( 10,000 g, 15分钟,室温)。出现白色颗粒。
  8. 用移液管移除或小心倾倒管中上清液,直至管中液体容积小于约100µL。

备注:

・请注意不要去除管中颗粒。

・若有颗粒漂浮,再次将离心管进行离心(10,000 g,15分钟,室温)。

・若残留溶液残留在管壁,将离心管倒置于滤纸以移除残留液体。

  1. 添加800µL“洗净液A,CP”至该离心管,并使用涡旋混合器充分混合均匀。

确保颗粒从管壁脱落。

  1. 将离心管进行离心( 10,000 g, 5分钟,室温)
  2. 用移液管移除或小心倾倒管中上清液,直至管中液体容积小于约100µL。

备注:

・请注意不要去除管中颗粒。

・若有颗粒漂浮,再次将离心管进行离心(10,000 g,5分钟,室温)。

・若残留溶液残留在管壁,将离心管倒置于滤纸以移除残留液体。

  1. 添加5mL溶液II至该离心管,并使用涡旋混合器充分混合均匀。
  2. 将离心管进行离心( 10,000 g, 5分钟,室温)。
  3. 用移液管或小心倾倒的方式尽可能多地移除管中的上清液。

备注:

・请注意不要去除管中颗粒。

・若有颗粒漂浮,再次将离心管进行离心(10,000 g,5分钟,室温)。

・若残留溶液残留在管壁,将离心管倒置于滤纸以移除残留液体。

  1. 将颗粒置于加热器、真空干燥器中加热(60℃)使其干燥,或使其自然干燥。

备注:

・若过分干燥的话,将导致DNA重新溶解困难。当颗粒呈潮湿的状态时,停止干燥。

・颗粒中含有DNA和糖原。

・由于溶液II包含可以抑制qPCR的乙醇,管中残留液体过多会降低qPCR效率。

  1. 将颗粒在无菌蒸馏水或缓冲液中重新溶解,至Q-PCR。

 

【FAQ】

 

  1. 利用吸光度测量提取的DNA浓度时,在230nm波长处出现波峰。
  2. 虽然残留有碘化钠,但对于Q-PCR无影响。

 

  1. DNA的回收率低
  2. 在DNA提取操作步骤7.和10.中极有可能一部分颗粒被除去。请使用移液管谨慎去除上清液。

 

 

<Reference>

Ishizawa, M., Kobayashi, Y., Miyamura, T. and Matuura, S. (1991) Simple Procedure of DNA isolation from human serum, Nucleic Acids Res., 19, 5792.

Code No. 292-81101 (For 50 tests)

 

DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method(Sodium Iodide Method)

 

This product is in compliance with sodium Iodide method and designed for use in extracting residual host cell DNA in biological samples such as vaccines and biopharmaceuticals.

It offers high recovery of DNA even from samples containing only a very small amount of DNA. The entire extraction step is completed with a single tube for 60-90 minutes. The extracted DNA can be quantified by qPCR.

 

There are two protocols for DNA extraction using this kit. Protocol #1 and Protocol #2 are used for DNA extracting from clean samples such as purified protein and crude samples such as cell lysate, solution containing high-concentration protein or lipid, respectively. Difference between the two protocols are indicated in the table below.

 

  Sample of

interest

Pretreatment step of sample Number of
washing steps
“Washing Solution A, CP” in the kit
Protocol #1 Clean Not required 1 time Not used
Protocol #2 Crude Required 2 times Used

 

【Features】

・In compliance with sodium Iodide method

・High quality and recovery

・Completed in a single tube for 60-90 minutes.

 

【Principle of sodium Iodide method for DNA extraction】

An chaotropic reagent, Sodium Iodide, and an anionic detergent participate in solubilization of proteins and lipids contained in biological samples. After addition of 2-propanol to the mixture, nucleic acids are co-precipitated with glycogen as a carrier, while other components remain soluble in the solution phase.

 

【Kit contents】

Code No. Components Size
299-81111 Sodium Iodide Solution, CP 26mL×1
296-81121 Sodium N-Lauryl Sarcosinate Solution, CP 1.2mL×1
293-81131 Washing Solution A, CP 42mL×1
290-81141 Washing Solution B, CP 40mL×2
297-81151 Glycogen Solution, CP 0.1mL×1

 

【Storage】

Store at 2-10℃ in the dark.

 

【Additional materials required for 50 tests】

<Reagents>

1) 2-Propanol 20 mL

2) Sterile distilled water 6 mL

 

<Instruments>

1) Microcentrifuge

2) Vortex mixer

3) 50x2mL or 1.5mL of centrifuge tube

4) Micropipette

5) Micropipette tips

6) Heating block

 

 

Precautions for Use

 

  • The color of “Washing Solution A, CP”may be slightly different between product lots. g. faint yellow or colorless. It does not affect quality of DNA extraction.
  • If precipitate is observed in “Sodium Iodide Solution, CP” or “Sodium N-Lauryl Sarcosinate Solution, CP”, warm it or them at 50℃until the precipitate is no longer visible.
  • Use DNA-free, DNase-free and sterilizedreagents and Instruments.
  • DNA concentration cannotbe accurately measured by absorbance if sodium Iodide remains in the extracted DNA. Measure the amount of DNA by qPCR

 

 

Protocol #1

 

< Preparation of Reagents>

Solution I-A

Add 6mL of sterile distilled water, 1mL of “Sodium N-Lauryl Sarcosinate Solution, CP” and 65µL of “Glycogen Solution, CP” into the bottle of 26mL of “Sodium Iodide Solution, CP”. Mix it with a vortex mixer.

Note : Solution I-A can be stored at 2-10℃ in the dark for approximately 5 months.

 

Solution II

Add 2µL of “Glycogen Solution, CP” into the bottle of 40 mL of “Washing Solution B, CP”. Mix it with a vortex mixer immediately.

Notes :

  • It does not affect quality of DNA extraction if white precipitates appear in Solution II.
  • Solution II can be stored at 2-10℃in the dark for approximately a week at least. If preparing a small volume of Solution II, use required amount of “Glycogen Solution, CP” and “Washing Solution B, CP”. For example, add 1µL of “Glycogen Solution, CP” into 20mL of “Washing Solution B, CP” in a sterilized tube.

 

< DNA Extraction Procedure>

  1. Dispense100µof sample solution to a 2mL or 1.5mL blank centrifuge tube.
  2. Add 300µLof Solution I-A into the tube and mix it with a vortex mixer.
  3. 3.Warm the tube at 60℃ for 15 minutes in a heating block.
  4. 4.Remove the tube from the heating block. Add 400µLof 2-Propanol into the tube and mix it with a vortex mixer.
  5. Leave the tube at room temperaturefor 15 minutes.
  6. Centrifugethe tube with 10,000 g at room temperature for 15 minutes.

A faint white pellet appears in the tube.

  1. Remove supernatant from the tubeby using a pipette or decanting carefully until the liquid volume in the tube is less than approximately 100µL.

Notes :

・Be careful not to remove the pellet from the tube.

・Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 15 minutes again if the pellet floats.

・In case that residual liquid remains on the tube wall, place the tube upside down on a paper filter to remove it.

  1. Add 1mL of Solution IIinto the tube and mix it with a vortex mixer vigorously.

Ensure that the pellet is detached from the tube wall.

9.Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes.

  1. Removeas much supernatant as possible from the tube by using a pipette or decanting carefully.

Notes :

・Be careful not to remove the pellet from the tube.

・Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes again if the pellet floats.

・In case that residual liquid remains on the tube wall, place the tube upside down on a paper filter to remove it.

  1. Dry the pellet by warming it at 60℃ in a heating block, vacuum dryeror natural drying.

Notes :

・Too dry pellet is difficult to be dissolved. Stop drying the pellet when it still is wet.

・Much residual liquid in the tube may cause low qPCR efficiency because Solution II contains ethanol, which can inhibit qPCR.

・The pellet contains DNA and glycogen.

  1. Dissolve the pellet with sterile distilled wateror buffer, and proceed with qPCR.

 

 

 

Protocol #2

 

< Preparation of Reagents >

  1. Solution I-B

65µL of “Glycogen Solution, CP” into the bottle of 26mL of “Sodium Iodide Solution, CP”. Mix it with a vortex mixer.

Note : Solution I-B can be stored at 2-10 in the dark for approximately 5 months.

 

  1. Solution II

Add 2µL of “Glycogen Solution, CP” into the bottle of 40 mL of “Washing Solution B, CP”. Mix it with a vortex mixer immediately.

Notes :

・It does not affect quality of DNA extraction if white precipitates appear in Solution II.

・Solution II can be stored at 2-10 in the dark for approximately a week at least. If preparing a small volume of Solution II, use required amount of “Glycogen Solution, CP” and “Washing Solution B, CP”. For example, add 1µL of “Glycogen Solution, CP” into 20mL of “Washing Solution B, CP” in a sterilized tube.

 

 

< Preparation of Samples >

■In case that protein concentration in the sample solution is less than 2mg/mL.

 

  1. Addthe reagents below into the sample solution to the final concentration.

 

Reagents Final concentration

Sodium Dodecyl Sulfate 0.10%

Dithiothreitol 50mmol/L      

 

  1. Warm it at 55℃for 30 minutesin a heating block.

 

■In case that protein concentration in the sample solution is more than 2mg/mL.

  1. Addthe reagents below into the sample solution to the final concentration.

 

Reagents Final concentration

Sodium Dodecyl Sulfate 0.10%

Dithiothreitol 50mmol/L

Sodium Chloride 150mmol/L

EDTA 1mmol/L      

 

  1. Add 20µg of Proteinase K per 1mg of protein in the sample solution in to the sample solution.
  2. Adjust pH to be approximately 7.5 with Tris.
  3. Warm it at 55℃for an hour at least in a heating block.

 

< DNA Extraction Procedure>

 

  1. Dispense 400-500µL of sample solution to a 2mL blank centrifuge tube.
  2. Add 20µL of “Sodium N-Lauryl Sarcosinate Solution, CP” into the tube and mix it with a vortex mixer.
  3. Add 500µL of Solution I-B into the tube and mix it with a vortex mixer.
  4. Warm the tube at 40℃for 15 minutes in a heating block.
  5. Remove the tube from the heating block. Add 900µL of 2-Propanol into the tube and mix it with a vortex mixer.
  6. Leave the tube at room temperature for 15 minutes.
  7. Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 15 minutes.

A faint white pellet appears in the tube.

  1. Remove supernatant from the tubeby using a pipette or decanting carefully until the liquid volume in the tube is less than approximately 100µL.

Notes :

・Be careful not to remove the pellet from the tube.

・Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 15 minutes again if the pellet floats.

・In case that residual liquid remains on the tube wall, place the tube upside down on a paper filter to remove it.

  1. Add 800µL of “Washing Solution A, CP” into the tube and mix it with a vortex mixer vigorously.

Ensure that the pellet is detached from the tube wall.

  1. Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes.
  2. Remove supernatant from the tubeby using a pipette or decanting carefully until the liquid volume in the tube is less than approximately 100µL.

Notes :

・Be careful not to remove the pellet from the tube.

・Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes again if the pellet floats.

・In case that residual liquid remains on the tube wall, place the tube upside down on a paper filter to remove it.

  1. Add 1.5mL of Solution II into the tube and mix it with a vortex mixer vigorously.
  2. Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes.
  3. Removeas much supernatant as possible from the tube by using a pipette or decanting carefully.

Notes :

・Be careful not to remove the pellet from the tube.

・Centrifuge the tube with 10,000 g at room temperature for 5 minutes again if the pellet floats.

・In case that residual liquid remains on the tube wall, place the tube upside down on a paper filter to remove it.

  1. Dry the pellet by warming it at 60℃ in a heating block, vacuum dryeror natural drying.

Notes :

・Too dry pellet is difficult to be dissolved. Stop drying the pellet when it still is wet.

・Much residual liquid in the tube may cause low qPCR efficiency because Solution II contains ethanol, which can inhibit qPCR.

・The pellet contains DNA and glycogen.

  1. Dissolve the pellet with sterile distilled water or buffer, and proceed with qPCR.

 

 

FAQ

 

  1. Peak wavelengthappeared at 230nm when extracted DNA concentration was measured by absorbance.
  2. Sodium Iodide remains in the extracted DNA. Measure the amount of DNA by qPCR

 

  1. DNA recovery rate was too low.
  2. Apart of DNApellet may have been removed at step 7 or 10. Remove the supernatant with a pipette carefully.

 

<Reference>

Ishizawa, M., Kobayashi, Y., Miyamura, T. and Matuura, S. (1991) Simple Procedure of DNA isolation from human serum, Nucleic Acids Res., 19, 5792.