钙黄绿素红,AM

	货号	21900	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	2604
	Ex (nm)	562	Em (nm)	576
	分子量	1015.79	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

钙黄绿素红,AM是美国AAT Bioquest生产的用于检测活细胞的荧光探针，Calcein AM是用于标记和检测活细胞细胞功能的最流行的荧光探针之一。然而，Calcein AM的单色使得在多色应用中不可能使用这种有价值的试剂。例如，由于与GFP相同的颜色，不可能将Calcein AM与GFP-转化细胞组合使用。为了解决Calcein AM的这种颜色限制，我们开发了Calcein Orange ，Calcein Red 和Calcein Deep Red 。这些新的Calcein AM类似物与Calcein AM结合使用，可以对活细胞进行多色标记和功能分析。非荧光Calcein Red AM可以轻松进入活细胞并水解产生强荧光Calcein Red 染料。可以使用常见的TRITC / Cy3滤波片组检测Calcein Red 染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙黄绿素红,AM。 

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产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Calcein Red AM原液。
2.1使用Calcein Red AM的量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Calcein Red TM AM与492.23μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMCalceinRed AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1最终孔内浓度的Calcein Red AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
3.3最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中，混合16μL的Calcein Red AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议Calcein Red AM的最终浓度为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127孔浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μM的Calcein Red AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-60分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 560/574 nm运行实验。

参考文献

A perfused human blood–brain barrier on-a-chip for high-throughput assessment of barrier function and antibody transport
Authors: Nienke R Wevers, Dhanesh G Kasi, Taylor Gray, Karlijn J Wilschut, Benjamin Smith, Remko van Vught, Fumitaka Shimizu, Yasuteru Sano, Takashi Kanda, Graham Marsh
Journal: Fluids and Barriers of the CNS (2018): 23

Astragaloside IV protects blood-brain barrier integrity from LPS-induced disruption via activating Nrf2 antioxidant signaling pathway in mice
Authors: Hongli Li, Ping Wang, Fei Huang, Jinmei Jin, Hui Wu, Beibei Zhang, Zhifei Wang, Hailian Shi, Xiaojun Wu
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简要概述

钙黄绿素AM是最流行的荧光探针之一，用于标记和检测活细胞的细胞功能。但是，钙黄绿素AM的单色使得无法在多色应用中使用这种有价值的试剂。例如，由于与GFP相同的颜色，不可能在结合GFP的细胞中使用钙黄绿素AM。为了解决钙黄绿素AM的颜色限制，我们开发了钙黄绿橙 ，钙黄绿 和钙黄绿 。这些新的Calcein AM类似物与Calcein AM结合使用，可以对活细胞进行多色标记和功能分析。非荧光钙黄绿素 AM可以轻松进入活细胞并水解产生强荧光钙黄绿素 染料。可以使用通用的TRITC / Cy3滤波片组检测Calcein Red 染料。

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产品说明书

操作步骤

      AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。在使用高质量无水二甲基亚砜（DMSO）之前，应将其重新配制。DMSO储备溶液可在-20°C的环境中干燥保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

1.准备2至5 mM的AM酯高品质无水DMSO储备溶液。非离子型洗涤剂F-127有时用于增加AM酯的水溶性。

注：20％的Pluronic等体积® F-127溶液可以稀释到装载缓冲器之前加入到细胞活力指标DMSO储备溶液。最终的Pluronic ® F-127的浓度为约0.02％。

2.在实验当天，将细胞活力的固体指示剂溶解在DMSO中，或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。在您选择的缓冲液（例如Hanks和Hepes缓冲液）中准备1至10 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为4至5 µM的细胞活力指标。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。

3.如果您的细胞中含有有机阴离子转运蛋白，则可将丙磺舒（1-2.5 mM）或亚砜并吡嗪（0.1-0.25 mM）添加到细胞培养基中，以减少去酯化指示剂的泄漏。在室温或37°C下将细胞与AM酯孵育20分钟至一小时。

注意：降低装载温度可能会减少指示器的分隔。

4.在无细胞活力指示剂的缓冲液（如果适用，包含阴离子转运蛋白抑制剂）中洗涤细胞，以去除多余的探针。

注意：立即通过流式细胞仪分析细胞样品，以测定零时每个细胞的平均荧光强度，无需清洗。

5.在所需的Ex / Em波长下运行实验。

参考文献

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