钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 货号21119-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐    货号21119 货号 21119 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 6564
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 880.07 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂,钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜,流式细胞仪,荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中,Fluo-3和Fluo-4最常用。但是,Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光,并且需要苛刻的细胞加载条件才能最大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可改善细胞负载和钙响应,同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长(在〜490 nm处具有最大激发和在〜520 nm处具有最大发射)。Fluo-8®AM仅需要室温,而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外,Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍,是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂,具有不同的钙结合亲和力(Fluo-8®:Kd = 389 nM; Fluo-8H:Kd = 232 nM; Fluo-8L:Kd = 1.86 µM; Fluo-8FF :Kd = 10 µM)。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐。

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钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南,实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b)在实验当天,将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02%Pluronic®F-127在您选择的缓冲液(如Hanks和Hepes缓冲液)中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影,建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

注意:非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c)如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以在细胞培养基中加入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d)在HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如2.5mM丙磺舒,如果适用)中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e)在所需的Ex / Em波长下进行实验(见说明书中的表1)。

 

2.测量细胞内钙响应:

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

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Emerin plays a crucial role in nuclear invagination and in the nuclear calcium transient
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Individual evaluation of cardiac marker expression and self-beating during cardiac differentiation of P19CL6 cells on different culture substrates
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Multiple pathways for elevating extracellular adenosine in the rat hippocampal CA1 region characterized by adenosine sensor cells
Authors: Kunihiko Yamashiro, Yuki Fujii, Shohei Maekawa, Mitsuhiro Morita
Journal: Journal of Neurochemistry (2016)

OptoDyCE as an automated system for high-throughput all-optical dynamic cardiac electrophysiology
Authors: Aleksandra Klimas, Christina M Ambrosi, Jinzhu Yu, John C Williams, Harold Bien, Emilia Entcheva
Journal: Nature communications (2016)

The G protein-coupled receptor GPR157 regulates neuronal differentiation of radial glial progenitors through the Gq-IP3 pathway
Authors: Yutaka Takeo, Nobuhiro Kurabayashi, Minh Dang Nguyen, Kamon Sanada
Journal: Scientific reports (2016)

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐 Cat#21118

说明书
钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐.pdf