iFluor 488酰肼是美国AAT Bioquest生产的iFluor系列荧光染料，虽然FITC是用于制备绿色荧光生物缀合物的最流行的荧光标记染料，但是FITC存在某些限制，例如用于显微镜成像的严重光漂白和pH敏感荧光。与荧光素衍生物如FITC的缀合物相比，用iFluor 488染料制备的蛋白质缀合物要好得多。iFluor 488缀合物比荧光素缀合物明显更亮，并且光稳定性更高。此外，iFluor 488的荧光不受pH（4-10）的影响。这种pH不敏感性是对荧光素的主要改进，荧光素仅在pH大于9时发出其最大荧光。iFluor 488酰肼相当稳定并且对羰基（例如醛）表现出良好的反应性和选择性。iFluor系列染料是AF系列染料的完美替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 488酰肼。 

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样本神经元细胞标记方案

该样品标记方案用于用iFluor 488酰肼标记神经元细胞。 您可能需要针对特定细胞进行进一步优化。

1.准备染料储备液：

1.1将1mg iFluor 488酰肼溶解在100μl200mMKCl中以制备10mM溶液（10mg / ml）。

1.2通过过滤对上述溶液进行灭菌。

 

2.标记细胞：

2.1通过使超极化电流通过电极，用iFluor 488酰肼储备溶液（来自步骤1）标记神经元细胞（例如，Manduca sexta幼虫中的附属植物牵开器运动神经元）。

 

3.固定细胞：

3.1用4％多聚甲醛在100mM磷酸盐缓冲液（pH 7）中固定细胞30分钟。

注意：固定后，细胞可在乙醇中脱水并在二甲苯中清除。

 

样本糖蛋白标记方案

该标记方案被开发用于山羊抗小鼠IgG与iFluor 647酰肼的缀合。您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。

1.准备蛋白质醛溶液（溶液A）：

1.1将5mg山羊抗小鼠IgG抗体溶于0.5mL 0.1M乙酸钠，0.15M NaCl，pH5.5中

注意：确保蛋白质浓度> 10 mg / ml，以获得最佳标记效率。

1.2通过离心30-60分钟，用0.2ml的100mM高碘酸钠（21mg / ml）处理蛋白质溶液。

1.3加入30μL乙二醇终止反应。

 

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

2.1将1mg iFluor 染料酰肼溶解在0.1ml DMSO中以制备10mg / ml染料储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。

 

3.运行缀合反应：

3.1在有效摇动下将10μL染料储备溶液（溶液B）加入50μL蛋白质溶液（溶液A）中。

3.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物，在黑暗中保持30-60分钟。

 

4.纯化缀合物（以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。）

4.1根据制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

4.2将反应混合物（直接从步骤3）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

4.3一旦样品在顶部树脂表面下方运行，就加入PBS（pH 7.2-7.4）。

4.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成柱纯化。

注1：为立即使用，染料 – 蛋白质偶联物可以等分多次使用，而对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥蛋白质结合物溶液。

注2：对于小规模标记，建议使用即用型旋转商用色谱柱以方便使用。

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

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