Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光 货号22843-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光     货号22843 货号 22843 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 3924
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在同时检测凋亡,坏死和健康细胞。凋亡被描述为一种主动的,程序性的自主细胞拆卸过程,可避免引起炎症。在凋亡中,磷脂酰丝氨酸(PS)被转移到质膜的外部小叶。作为细胞凋亡初始/中间阶段的通用指标,在观察形态变化之前,可以检测到磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现。该试剂盒中使用的PS指示剂与膜PS结合后会发出红色荧光。膜不透性DNA Nuclear Green DCS1(Ex / Em = 490/525 nm)标记核的能力证明,质膜完整性的丧失代表了晚期细胞凋亡和坏死的简单方法。此外,该试剂盒还提供了活细胞细胞质标记染料CytoCalcein Violet 450(Ex / Em = 405/450 nm),用于标记活细胞细胞质。该试剂盒经过优化,可通过流式细胞仪或荧光显微镜同时检测细胞凋亡(红色),坏死(绿色和/或红色)和健康细胞(蓝色)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒。

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 405 nm, 488 nm, 633 nm激光
发射: 450/40 nm, 530/30 nm, 660/20 nm滤波片
通道: Pacific Blue, FITC, APC通道
荧光显微镜  
激发: DAPI, FITC, Cy5滤波片
发射: DAPI, FITC, Cy5滤波片
推荐孔板: 黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用测试化合物制备细胞(200 µL /样品)
  2. 添加Apopxin 深红色测定溶液
  3. 在室温下孵育30-60分钟
  4. 使用具有660/20 nm(用于凋亡-APC通道),530/30 nm(用于坏死-FITC通道)和450/40 nm发射滤光片(用于健康细胞-Pacific blue通道)的流式细胞仪或带有荧光显微镜的细胞分析 DAPI(健康细胞),FITC(坏死细胞)和Cy5滤波片(凋亡细胞)

 

溶液配制

储备溶液配制

1. CytoCalcein 紫色450储备溶液(200X):将100 µL DMSO加到CytoCalcein Violet 450(组分D)小瓶中,制成200X CytoCalcein Violet 450储备溶液, 避光。

  

实验步骤

1.用Apopxin 深红色制备和孵育细胞:

1.1用测试化合物处理细胞一段时间(对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为4-6小时)以诱导凋亡。

1.2离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液(组分B)中。

1.4向细胞中加入2 µL 100X Apopxin 深红色(组分A)。

1.5可选1:向坏死细胞中加入1 µL 200X Nuclear Green DCS1(组分C)。

1.6可选2:然后向细胞中加入1 µL 200X CytoCalcein Violet 450储备液,以进行健康的细胞染色。

1.7避光保存,于室温下孵育30至60分钟。

1.8在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,添加300 µL分析缓冲液(组分B)以增加体积。

1.9使用流式细胞仪检测荧光强度,该流式细胞仪的荧光强度为660/20 nm(凋亡-APC通道),530/30 nm(坏死-FITC通道)和450/40 nm发射滤光片(健康细胞-Pacific Blue通道)显微镜用DAPI(健康细胞),FITC(坏死细胞)和Cy5滤波片(凋亡细胞)。

2.使用流式细胞仪分析细胞:

2.1使用流式细胞仪分别对Apopxin 深红色结合物进行定量,该流式细胞仪的荧光强度为660/20 nm(凋亡-APC通道),530/30 nm(坏死-FITC通道)和450/40 nm发射滤光片(健康细胞-Pacific Blue通道)。 注意:Apopxin 与贴壁细胞结合的流式细胞仪分析未经过常规测试,因为在细胞分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤。 

3.使用荧光显微镜分析细胞:

3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后用测定缓冲液重悬细胞。

3.2将细胞添加到盖玻片或黑色96孔板的上。注意:对于贴壁细胞,建议直接在盖玻片(或黑色96孔板)上生长细胞。与Apopxin 深红色孵育后,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后将测定缓冲液加回到盖玻片(或96孔板)中。将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。与Apopxin 深红色孵育后,还可以将细胞固定在2%甲醛中,并在显微镜下观察。

3.3使用Cy5滤光片在荧光显微镜下用Apopxin 深红色分析凋亡细胞。当添加Nuclear Green DCS1时,使用FITC滤波片检测细胞活力;或当向细胞中添加CytoCalcein Violet 450时,使用Violet滤波片检测细胞活力。质膜上的红色染色表明Apopxin 深红色与细胞表面的PS结合。

 

参考文献

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说明书
Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光 .pdf