Amplite 荧光法L-天门冬氨酸(天冬氨酸)检测试剂盒 货号13827-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法L-天门冬氨酸(天冬氨酸)检测试剂盒

Amplite 荧光法L-天门冬氨酸(天冬氨酸)检测试剂盒

Amplite 荧光法L-天门冬氨酸(天冬氨酸)检测试剂盒    货号13827 货号 13827 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 4584
Ex (nm) 571 Em (nm) 585
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法L-天门冬氨酸(天冬氨酸)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测天门冬氨酸的试剂盒,天冬氨酸(或天冬氨酸)是带负电荷的极性氨基酸。 天冬氨酸参与嘧啶生物合成的控制点,转氨反应,与天冬酰胺的相互转化,在尿素循环中导致AMP的代谢途径中,并且是高丝氨酸,苏氨酸,异亮氨酸和甲硫氨酸的前体。 它也参与苹果酸天冬氨酸穿梭。 Amplite 荧光天冬氨酸测定试剂盒为生物样品中天冬氨酸的定量分析提供了灵敏的荧光分析方法。 天冬氨酸转化为丙酮酸,通过酶偶联反应产生过氧化氢。 用Amplite Red底物监测由天冬氨酸产生的过氧化氢的量,用Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光酶标仪定量天冬氨酸。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法L-天门冬氨酸(天冬氨酸)检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品以及稀释的天冬氨酸标准品(50 µL)
2.加入等体积的工作溶液(50 µL)
3.在37°C下孵育20-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 天冬氨酸标准溶液(10 mM):
将100 uL ddH2O加入天冬氨酸标准样品瓶(组分E)中,制成10 mM天冬氨酸标准溶液。

1.2 Amplite Red底物储备液(200X):
向Amplite Red底物(组分A)中加入50 µL DMSO(组分F),制成200X Amplite Red底物原液。

 

2.标准溶液

天冬氨酸标准
向990 µL 1X PBS缓冲液中加入10 µL 10 mM天冬氨酸标准液,得到100 µM天冬氨酸溶液(ASP7)。然后在1X PBS缓冲液中进行1:3的系列稀释,以得到系列稀释的天冬氨酸标准品(ASP6-ASP1)。

 

3.工作溶液

3.1 Conversion Mix(100X):
将50 µL ddH2O加入转化混合液(组分D)中,制成100X转化混合储备液。

3.2 Amplite Red:
将5 mL分析缓冲液(组分C)加入一瓶酶混合液1瓶(组分B1)中; 混合均匀。 将100μLddH2O加入一个酶混合物2小瓶中(组分B2); 混合均匀。 将整个小瓶(100μL)的酶混合液2、25μL的200X Amplite Red底物储备液和50μL的100X Conversion Mix溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中并充分混合。 注意:工作溶液不稳定,请立即使用,并避免直接暴露在光线下。

 

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中的天冬氨酸标准品和测试样品的布局。 ASP =天冬氨酸标准品(ASP1-ASP7,0.1至100 µM); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
ASP1 ASP1
ASP2 ASP2
ASP3 ASP3    
ASP4 ASP4    
ASP5 ASP5    
ASP6 ASP6    
ASP7 ASP7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
ASP1-ASP7 50ul 连续稀释(0.1至100 µM)
BL 50ul 1X PBS缓冲液
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和表2提供的布局,准备天冬氨酸标准品(ASP),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂,而不是50 µL。

2.在天冬氨酸标准液,空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL Amplite Red™工作溶液,以使天冬氨酸总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板,请向每个孔中添加25 µL工作溶液,总体积为50 µL /孔。 注意:在pH 6.5至7.0下进行天冬氨酸测定。

3.将反应混合物在37°C孵育20-30分钟。

4.用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm(截止= 570 nm)下监测荧光的增加。

 

参考文献

A systematic and mechanistic evaluation of aspartic acid as filler for directly compressed tablets containing trimethoprim and trimethoprim aspartate
Authors: ElShaer A, Hanson P, Mohammed AR.
Journal: Eur J Pharm Biopharm (2013): 468

Enzymatic assay for D-aspartic acid using D-aspartate oxidase and oxaloacetate decarboxylase
Authors: Kato S, Ikuta T, Hemmi H, Takahashi S, Kera Y, Yoshimura T.
Journal: Biosci Biotechnol Biochem (2012): 2150

Distribution of free D-aspartic acid and D-aspartate oxidase in frog Rana esculenta tissues
Authors: Di Giovanni M, Burrone L, Chieffi Baccari G, Topo E, Santillo A.
Journal: J Exp Zool A Ecol Genet Physiol (2010): 137

Thyroid hormones and D-aspartic acid, D-aspartate oxidase, D-aspartate racemase, H2O2, and ROS in rats and mice
Authors: Topo E, Fisher G, Sorricelli A, Errico F, Usiello A, D’Aniello A.
Journal: Chem Biodivers (2010): 1467

A physiological mechanism to regulate D-aspartic acid and NMDA levels in mammals revealed by D-aspartate oxidase deficient mice
Authors: Errico F, Pirro MT, Affuso A, Spinelli P, De Felice M, D’Aniello A, Di Lauro R.
Journal: Gene (2006): 50

Aslfm, the D-aspartate ligase responsible for the addition of D-aspartic acid onto the peptidoglycan precursor of Enterococcus faecium
Authors: Bellais S, Arthur M, Dubost L, Hugonnet JE, Gutmann L, van Heijenoort J, Legrand R, Brouard JP, Rice L, Mainardi JL.
Journal: J Biol Chem (2006): 11586

Feasibility study: fast liquid chromatography-mass spectrometry for the quantification of aspartic acid in an aspartate drug
Authors: Schmidt J.
Journal: Anal Bioanal Chem (2003): 1120

Modelling the hydrolysis of succinimide: formation of aspartate and reversible isomerization of aspartic acid via succinimide
Authors: Aylin F, Konuklar S, Aviyente V.
Journal: Org Biomol Chem (2003): 2290

Potassium N-(6-amino-3,4-dihydro-3-methyl-5-nitroso-4-oxopyrimidin-2-yl)-(S)-aspartate N-(6-amino-3,4-dihydro-3-methyl-5-nitroso-4-oxopyrimidin-2-yl)-(S)-aspartic acid 4.88-hydrate: a two-dimensional coordination polymer
Authors: Cuesta R, Glidewell C, Lopez R, Low JN.
Journal: Acta Crystallogr C (2003): m315

[Simultaneous analysis of aspartic acid and sorbitol in potassium magnesium aspartate and sorbitol injection by ion-exclusion chromatography with evaporative light-scattering detection]
Authors: Wei Y, Ding MY, Zhang WQ.
Journal: Se Pu (2002): 356

 

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产品名称 货号
Amplite 比色法L-天门冬氨酸(天冬氨酸)检测试剂盒 Cat#13828

说明书
Amplite 荧光法L-天门冬氨酸(天冬氨酸)检测试剂盒.pdf