Remove-iT PNGase F 货 号 #P0706L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 糖生物学与蛋白质工具 – 糖苷内切酶

Remove-iT PNGase F                              收藏

Remove-iT PNGase F              货   号                  #P0706L Remove-iT PNGase F              货   号                  #P0706L

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识别位点

Remove-iT PNGase F              货   号                  #P0706L

Remove-iT PNGase F 水解糖肽/蛋白上所有类型的 N-糖链 [x = H 或者寡糖]。

特性

 从糖蛋白上切除 N-连接糖链
 更多详细结构特异性请翻阅目录 257页

概述

Remove-iT PNGase F 是一种酰胺酶,切割糖蛋白上的 N-连接糖,切割的糖型有:高甘露糖、杂合和复杂寡糖,切割位点为:最内侧的 N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之间(1)。Remove-iT PNGase F 携带有几丁质结合域(CBD)标签,易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供,便于在 HPLC 和 MS 分析中取得最佳效果。

来源

从脑膜败血性杆菌(Flavobacterium meningo-septicum)中提取纯化。

反应条件

将糖蛋白于 1X DTT(40 mM)中 55℃ 温育 10 分钟使其变性。1X GlycoBuffer 2 反应缓冲液中 37℃ 温育 1 小时。热失活:75℃ 10 分钟。

随酶提供的试剂

10X DTT
10X GlycoBuffer 2 反应缓冲液

分子量

41,000 daltons。

质量保证

无糖苷外切酶污染,无糖苷内切酶F1、F2 或 F3 活性,无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 10 μl 反应体系中,37℃ 条件下,1 小时从 5 μg DTT 变性的 RNase B 中移除超过95% 的碳水化合物所需要的酶量。

浓度

225,000 units/ml。

注意事项

当使用包含 SDS 和 DTT 的 NEB 糖蛋白变性缓冲液对 RNase B 进行变性时,需要 500,000U/ml 高浓度 Remove-iT PNGase F。
 
当 Remove-iT PNGase F 在变性条件下使用时,需要在反应混合物中加入 NP-40,因为 SDS 抑制Remove-iT PNGase F 活性。目前还不清楚非离子变性剂抵消 SDS 对 Remove-iT PNGase F 抑制的机理。
 
去糖基化反应完成后,可以用几丁质磁珠去除Remove-iT PNGase F,且几丁质磁珠的用量与去除Remove-iT PNGase F 成正比线性关系。

参考文献