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Mighty TA-cloning Kit酶试剂盒Takara Clontech

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Mighty TA-cloning Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6028 Mighty TA-cloning Kit 20 Rxns ￥801
￥601 		Mighty TA-cloning Kit Mighty TA-cloning Kit Mighty TA-cloning Kit

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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Cloning – 修饰性PEG

 
 
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Mighty TA-cloning Kit
Mighty TA-cloning Kit  
Mighty TA-cloning Kit
 
 
■ 制品内容 (20 次量)
pMD20-T vector (50 ng/μl) 1 μg (20 μl)
Ligation Mighty Mix*1 50 μl × 2
Positive Control Insert*2 10 μl
   
*1: Ligation Mighty Mix与DNA Ligation Kit<Mighty Mix> (Code No.: 6023) 是同一种试剂。
*2: 3’端带有“A”突出端的DNA片段 (约200 bp)。 (以E.coli 基因组DNA为模板，使用TaKaRa Ex Taq 进行PCR反应得到的扩增产物。)(10 ng/μl)
 
■ 制品说明
使用Taq DNA聚合酶进行PCR反应，扩增获得的PCR产物3’端附有一个“A” 碱基。利用3’端附有“A” 碱基的PCR产物进行克隆时，与含有3’-T末端的载体通过T-A碱基互补配对原则进行克隆，此种方法被称为T-A克隆。
Mighty TA-cloning Kit是在短时间内快速地将PCR产物进行T-A克隆的试剂盒。连接反应使用DNA Ligation Kit<Mighty Mix>，操作简便，可在短时间内高效地进行连接反应。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 使用注意事项
1. Ligation Mighty Mix在冰上融解，轻轻混合后再使用。
2. 长片段PCR产物（2 kb以上）进行DNA克隆时，连接反应时间请延长至数小时。
3. 克隆时，根据插入片段的长度和方向，有时即使插入了DNA片段也会有不出现终止密码或读码框不改变的情况发生，在蓝白选择培养基上会形成淡蓝色菌落。出现这种现象时，建议进行菌落PCR确认插入片段。
4. 进行切胶回收纯化DNA片段时要避免UV照射时间过长。长时间照射，DNA会受到损伤，影响克隆效率。
5. PCR用质粒模板与克隆载体 (pMD20-T vector；具有Ampr) 有同样的选择标记基因时，为防止出现质粒模板自身的转化菌落，将PCR反应液凝胶电泳后回收目的片段，纯化后再进行克隆。
 
 

PCR产物纯化-Cloning Enhancer酶试剂盒Takara Clontech

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PCR产物纯化-Cloning Enhancer
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 639615 Cloning Enhancer 200 μl ￥3,883 PCR产物纯化-Cloning Enhancer PCR产物纯化-Cloning Enhancer PCR产物纯化-Cloning Enhancer
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Cloning – 修饰性PEG

 
Cloning Enhancer用于克隆前PCR产物的纯化，消除背景质粒DNA和PCR体系中杂质。Cloning Enhancer处理可大大增加重组克隆的数量。Cloning Enhancer与PCR反应液在同一tube进行反应，所以可降低胶纯化导致的紫外损伤或切口生成，无需单独的纯化流程，也就降低了纯化时PCR产物的损失。
 
产品特点
· 无需纯化，方便的PCR产物纯化方式。
· 单管反应，避免样品损失。
· 温和处理流程，不产生DNA损伤或切口。
· 与不纯化插入片段相比，处理后效率可提高5倍。
 
 
产品详情请点击：PCR产物纯化-Cloning Enhancer
 
 

pBackZero-T Vector Cloning Kit酶试剂盒Takara Clontech

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pBackZero-T Vector Cloning Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 3275 pBackZero-T Vector Cloning Kit 20 Rxns ￥631 pBackZero-T Vector Cloning Kit pBackZero-T Vector Cloning Kit pBackZero-T Vector Cloning Kit
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Cloning – 修饰性PEG

 
 
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pBackZero-T Vector Cloning Kit
pBackZero-T Vector Cloning Kit  
pBackZero-T Vector Cloning Kit
 
 
■ 制品内容
pBackZero-T Vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支
Control Insert 4 (50 ng/μl) 10 μl × 1 支
Solution I*1 75 μl × 2 支
Primer Bla M1 (20 μM)*2 50 μl × 1 支
Primer Bla RV (20 μM)*2 50 μl × 1 支
   
*1：使用时请于冰中融解。
*2：Primer Bla M1：5’- AAG CCC TCC CGT ATC GTA GTT ATC -3’ (24 nt)
    Primer Bla RV：5’- ACT CAC GTT AAG GGA TTT TGG TCA -3’ (24 nt)
 
■ 制品说明
pBackZero-T Vector是一种阳性克隆率非常高而背景很低的PCR产物克隆 (TA Cloning) 专用载体。本载体是由pUC19载体改建而成，它消除了pUC19载体上的LacZ基因及多克隆位点，并对β-lactamase (bla) 基因进行了特别的改造，再通过酶切反应，最后在两侧的3’端添加“T”而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3’末端添加一个“A”的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。
本载体对β-lactamase基因进行了特别的改造，使用时需在待插入的DNA片段的上、下游Primer的5’端加上TTTAA 5个碱基。如果需要进行定向克隆，只需在一条引物的5’端加上TTTAA 5个碱基，这样可以保障β-lactamase基因具有活性，菌落可以在Amp抗性平板上生长。而那些由于载体自连、插入非目的片段等原因造成的假阳性克隆不具有β-lactamase基因活性，不能在Amp抗性平板 (工作浓度100 μg/ml) 上生长。因此使用这种载体在Amp抗性平板上生长的菌落基本都是阳性克隆，背景降至很低，保证了非常高的阳性克隆率。使用本试剂盒中的Control Insert 4时，阳性克隆率可以达到99%以上。此外，本载体也无需使用IPTG/X-Gal进行蓝白筛选。值得注意的是由于本载体上消除了多克隆酶切位点，当PCR产物使用本载体进行克隆时，将无法使用载体上的限制酶切位点，需要事先在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。本制品中的高效连接液Solution I可以在短时间内(约30分钟)完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。本制品中的Control Insert 4 (500 bp) 可以用于Control反应。
 
   
■ 保存
-20℃。
 
■ 纯度
Control Insert 4经克隆后，有99%以上含有Insert DNA片段。
 
■ 用途
1. 进行TA克隆，克隆PCR产物。
2. 低背景需求的克隆。
3. 对克隆后的DNA进行测序。
4. 定向克隆。
 
■ pBackZero-T Vector的结构
pBackZero-T Vector Cloning Kit
 
■ 使用事项
1. PCR片段扩增用的2条Primer除了含有扩增目的片段用的序列外，还要在其5’端均加入TTTAA 5个碱基。当进行定向克隆时，可以选择其中1条Primer加入TTTAA 5个碱基。
2. Solution I请于冰中融解。
3. 克隆时使用的Insert DNA片段(PCR产物)建议进行切胶回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA(甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响TA克隆效率 。
4. 按照本实验操作进行连接后，直接进行转化时的连接液不要超过20 μl。当要转化的DNA量较大或准备进行电转化时，需对连接液进行乙醇沉淀，纯化DNA后再进行转化。进行乙醇沉淀时使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No. : 9094) 可以提高DNA的回收率。
5. 连接反应请在25℃以下进行，温度升高 (>26℃) 较难形成环状DNA。连接效率偏低时，可适当延长连接反应时间至数小时。
6. 本制品来源于pUC19载体，因此，适合pUC19载体的感受态细胞都可以使用，如：JM109等。
7. 由于本制品是利用β-lactamase缺失进行筛选，所以对筛选平板使用的氨苄青霉素 (Amp) 的质量要求较高，请使用高品质的氨苄青霉素 (Amp) ，工作浓度为100 μg/ml。不要使用配制时间过长的氨苄青霉素 (Amp) 或平板。
 
 

In-Fusion HD Cloning Plus酶试剂盒Takara Clontech

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In-Fusion HD Cloning Plus
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 638909 In-Fusion HD Cloning Plus 10 Rxns ￥3,788 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638910 In-Fusion HD Cloning Plus 50 Rxns ￥15,839 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638911 In-Fusion HD Cloning Plus 100 Rxns ￥27,272 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638920 In-Fusion HD Cloning Plus 96 Rxns ￥26,029 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638916 In-Fusion HD Cloning Plus CE 10 Rxns ￥4,232 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638917 In-Fusion HD Cloning Plus CE 50 Rxns ￥16,630 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638918 In-Fusion HD Cloning Plus CE 100 Rxns ￥26,058 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
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Cloning – 修饰性PEG

 
 
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In-Fusion HD Cloning Plus
In-Fusion HD Cloning Plus  
In-Fusion HD Cloning Plus
 
 
In-Fusion克隆选择
制品名称 Code No. 除In-Fusion酶外，试剂盒中附带的制品
纯化用试剂 纯化用Column 高效感受态 高保真PCR酶
Cloning Enhancer NucleoSpin Stellar Competent Cell CloneAmp HiFi PCR Premix
In-Fusion® HD Cloning Kit 639648/49/50 - - - -
In-Fusion® HD Cloning Kit w/Cloning Enhancer 639633/34/35 √ - - -
In-Fusion® HD Cloning Kit w/NucleoSpin 639639/40/41 - √ - -
In-Fusion® HD Cloning Kit w/Competent Cells 639642/43/44 - - √ -
In-Fusion® HD Cloning Plus 6338909/10/11/20 - √ √ √
In-Fusion® HD Cloning Plus CE 638916/17/18/19 √ - √ √
In-Fusion® HD Cloning System 639645/46/47/92 - √ √ -
In-Fusion® HD Cloning System CE 639636/37/38/93 √ - √ -
 
In-Fusion PCR Cloning Kits可以在15分钟反应内，将任一PCR片段或多个片段方向性地、无缝地克隆到任何线性载体上。无需对PCR片段进行其他的处理，例如限制酶切、连接、磷酸化或末端平滑化。 In-Fusion HD Cloning kits的效率可达95%。
 
In-Fusion PCR Cloning 是如何作用的
利用PCR产物和线性载体末端的15 bp重叠序列，In-Fusion酶可以高效准确地将PCR产物和线性载体融合在一起。可以通过设计引物来扩增得到15 bp重叠序列。该方法无需亚克隆即可将单片段或多片段克隆到单一载体。
 
In-Fusion HD Cloning Plus组分
所有In-Fusion HD Cloning Plus kits包含 In-Fusion HD enzyme premix和control实验的试剂。 In-Fusion HD Cloning Plus kits 还包括：
·CloneAmp HiFi High Fidelity PCR Premix
  CloneAmp HiFi PCR Premix 是方便的2× master mix，实现准确、高效、快速的DNA扩增。Premix
  中包含了dNTP和优化的buffer，PCR反应可以设置为快速反应，更便利地实现成功的克隆。
·Stellar Competent Cells
  Stellar Competent Cells属于E. coli HST08细胞系，具有大于5 × 108 cfu/μg的高转化效率，
  有助于 提高In-Fusion HD Cloning Plus kit的效率。
·Cloning Enhancer 或NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up
  1.Cloning Enhancer (CE) 是易用型的酶premix，消除背景质粒DNA和PCR残留物，在克隆前无需进
  行PCR产物纯化。 In-Fusion HD Cloning Plus CE kits是PCR生成单一产物时的理想选择。
  2.如果PCR生成多于一条带，可以选择NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up用于PCR纯化。
 
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In-Fusion
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