Bucculite XdU细胞增殖检测试剂盒*蓝色激光兼容**流式细胞术*

	货号	22323	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	6060
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

检测细胞增殖是评估细胞活力、细胞周期和遗传毒性的最可靠的方法之一。 该试剂盒采用的是检测细胞增殖的一种基本方法，它是在细胞生长的S期过程中，在存在胸腺嘧啶核苷的情况下检测DNA的合成。 Bucculite 流式细胞术XdU细胞增殖测定试剂盒使用XdU，该XdU在DNA合成过程中被掺入细胞DNA中。 固定细胞后，将掺入的XdU用iFluor 488叠氮化物标记。 在FITC通道中观察iFluor 488标记的DNA。 Bucculite 流式细胞术XdU细胞增殖检测试剂盒是抗BrdU抗体的检测和EdU点击化学检测的的完美替代品。 它的灵敏度非常高，可用于在单细胞水平上检测活性DNA的合成。

产品说明书

样品实验方案

概述

准备细胞
使用XdU工作溶液处理细胞3小时
固定细胞
透化细胞
用Bucculite 工作溶液处理细胞30分钟
在流式细胞仪中使用530/30 nm滤光片组观察荧光

溶液配制

1.储备溶液配制

1.1 XdU储备溶液（100X）
将XdU（组分A）溶于200 µL DMSO中制成XdU储备溶液。
注意：可以将剩余的XdU储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.2iFluor 488叠氮化物储备溶液（200 X）
将iFluor 488叠氮化物（组分B）溶于100 µL DMSO中，制成iFluor 488叠氮化物储备溶液。
注意：可以将剩余的iFluor 488叠氮化物储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.3XdU反应添加剂储备溶液（20X）
将XdU反应添加剂（组分E）溶于1 mL去离子水中，制成XdU反应添加剂储备溶液。
注意：剩余的XdU反应添加剂储备溶液可以在-20°C下保存。

2.工作溶液配制

2.1XdU工作溶液配制
在1 mL细胞培养基中加入10 µL 100X XdU储备溶液，制成XdU工作溶液。
注意：1 mL的工作溶液足以进行5次检测。
注意：此100X浓度是使用优化的XdU浓度在HeLa和Jurkat细胞中测试的。 生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。 我们建议检测一系列XdU浓度，以确定最佳浓度以及是否适合您的细胞等因素。

2.2Bucculite 工作溶液
按以下顺序混合并充分涡旋
①905 µL染色缓冲液（组分C）
②40 µL CuSO4（组分D）
③5 µL iFluor 488叠氮化物储备溶液
④50 µL XdU反应添加剂储备溶液
注意：1 mL的Bucculite 工作溶液足以进行5次检测。

操作步骤

1.用XdU标记细胞
考虑到细胞在200 µL细胞培养基中，请向细胞中加入200 µL XdU工作溶液。
在适合细胞类型的最佳条件下，将细胞孵育3小时。 XdU在细胞中的时间可以直接检测细胞DNA的合成。 孵育时间取决于细胞生长速率。

2.细胞固定
孵育后，除去培养基，并用PBS洗涤细胞一次。
注意：清洗步骤后，如果使用贴壁细胞，请使用ReadiUse 细胞分离缓冲液（#60010）分离它们。
向每个试管中加入200 µL的固定缓冲液（含3.7%甲醛的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育15-20分钟。
除去固定液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

3.细胞通透性处理
向每个试管中加入200 µL透化缓冲液（0.5％Triton®X-100的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育10-20分钟。
除去通透缓冲液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

4.细胞染色
在试管中加入200 µL Bucculite 工作溶液。 在室温避光下，将Bucculite 工作溶液在室温下孵育细胞30分钟。
除去每个管中的Bucculite 工作溶液。
用PBS洗涤细胞两次，洗涤后加入200 µL PBS。
在流式细胞仪中使用530/30 nm滤光片观察细胞中的荧光信号。

图示

图1.用Buccutite XdU细胞增殖检测试剂盒（Cat＃22323）检测到的S期Jurkat细胞的流式细胞仪中的反应。 将Jurkat细胞以50,000个细胞/孔/ 100μL的浓度接种在6孔黑色板上过夜。 按照说明书，将细胞在37℃下用XdU处理3小时，固定并透化。 然后将细胞在染色缓冲液中用iFluor 488叠氮化物染色30分钟，并用PBS洗涤3次。 使用FITC通道，通过NovoCyte流式细胞仪检测荧光响应。

iFluor 665琥珀酰亚胺酯

简要概述

产品基本信息

货号：1553

产品名称：iFluor 665琥珀酰亚胺酯

规格：10mg

储存条件：-15℃，避光干燥

保质期：12个月

物理化学光谱特性

分子量：974.20

溶剂：DMSO

Ex(nm):667

Em(nm):692

Abs(nm):661

产品介绍

AAT Bioquest的iFluor 染料针对标记蛋白质（特别是抗体）进行了优化。这些染料是明亮的，耐光的，并且对蛋白质的淬灭作用极小。它们可以被荧光仪器的主要激光线（例如350、405、488、532、555、633和647 nm）激发。 iFluor 665系列的光谱特性类似于AlexaFluor®660（AlexaFluor®是Invitrogen的商标）。 iFluor 665系列的荧光在pH值从3到11时不受pH值的影响。这些光谱特性使该新染料系列成为AlexaFluor®660的出色替代品。在相同条件下，iFluor 665在某些抗体上可提供更强的荧光信号。 iFluor 665 SE相当稳定，并且对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。

点击查看光谱

参考文献

Recognition of Invasive Prostate Cancer Using a GHRL Polypeptide Probe Targeting GHSR in a Mouse Model In Vivo.
Authors: Ye, Huamao and Yang, Yue and Chen, Rui and Shi, Xiaolei and Fang, Yu and Yang, Jun and Dong, Yuanzhen and Chen, Lili and Xia, Jianghua and Wang, Chao and Yang, Chenghua and Feng, Jun and Wang, Yang and Feng, Xiang and Lü, Chen
Journal: Current pharmaceutical design (2020): 1614-1621

A rapid sensitive, flow cytometry-based method for the detection of Plasmodium vivax-infected blood cells.
Authors: Roobsoong, Wanlapa and Maher, Steven P and Rachaphaew, Nattawan and Barnes, Samantha J and Williamson, Kim C and Sattabongkot, Jetsumon and Adams, John H
Journal: Malaria journal (2014): 55

Reengineering the optical absorption cross-section of photosynthetic reaction centers.
Authors: Dutta, Palash K and Lin, Su and Loskutov, Andrey and Levenberg, Symon and Jun, Daniel and Saer, Rafael and Beatty, J Thomas and Liu, Yan and Yan, Hao and Woodbury, Neal W
Journal: Journal of the American Chemical Society (2014): 4599-604

Comparison of a chimeric anti-carcinoembryonic antigen antibody conjugated with visible or near-infrared fluorescent dyes for imaging pancreatic cancer in orthotopic nude mouse models.
Authors: Maawy, Ali A and Hiroshima, Yukihiko and Kaushal, Sharmeela and Luiken, George A and Hoffman, Robert M and Bouvet, Michael
Journal: Journal of biomedical optics (2013): 126016

Nucleic acid sandwich hybridization assay with quantum dot-induced fluorescence resonance energy transfer for pathogen detection.
Authors: Chou, Cheng-Chung and Huang, Yi-Han
Journal: Sensors (Basel, Switzerland) (2012): 16660-72

Single-molecule dynamics of phytochrome-bound fluorophores probed by fluorescence correlation spectroscopy.
Authors: Miller, Abigail E and Fischer, Amanda J and Laurence, Ted and Hollars, Christopher W and Saykally, Richard J and Lagarias, J Clark and Huser, Thomas
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America (2006): 11136-41

A far-red fluorescent contrast agent to image epidermal growth factor receptor expression.
Authors: Hsu, Elizabeth R and Anslyn, Eric V and Dharmawardhane, Su and Alizadeh-Naderi, Reza and Aaron, Jesse S and Sokolov, Konstantin V and El-Naggar, Adel K and Gillenwater, Ann M and Richards-Kortum, Rebecca R
Journal: Photochemistry and photobiology (2004): 272-9

DNP-PEG4 NHS酯 CAS 858126-78-0

	货号	2023	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	5 mg	价格	1164
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量	528.47	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：2023

产品名称：DNP-PEG4琥珀酰亚胺酯

CAS：858126-78-0

规格：5mg

储存条件：-15℃，避光干燥

保质期：12个月

物理化学光谱特性

分子量：528.47

溶剂：DMSO

产品介绍

与常用的DNP-X SE（＃2021）相比，DNP-PEG4酸具有更好的水溶性。它是可被抗DNP抗体识别的探针的胺反应性构建基块。它也可以用作与Trp或Tyr配对的出色的胺反应性FRET淬灭剂。它的末端NHS酯基很容易与伯胺反应形成稳定的酰胺键。亲水性PEG接头的增加使得与生物分子缀合的DNP基团的数目增加，而不会引起沉淀。

参考文献

Nano-Snowflower of Gold Nanoparticles-Ruthenium Metallopolymer-Carbon Nanotubes Binding Anti-DNP IgE Antibody.
Authors: Li, Huayang and Wu, Jie and Melnyczuk, John M and Olubi, Omotunde and Lewis, Lauchon I and Cao, Yang and Nagappan, Peri and Khan, Shafiq A and Ingram, Conrad W and Harruna, Issifu I
Journal: Journal of nanoscience and nanotechnology (2015): 5733-40

Peptide mimics of hapten DNP: the effect of affinity of anti-DNP monoclonal antibodies for the selection of phage-displayed mimotopes.
Authors: Kalaycioglu, Atila T and Russell, Peter H and Howard, Colin R
Journal: Journal of immunological methods (2011): 36-42

Generation of heterogeneous rabbit anti-DNP antibodies by gene conversion and hypermutation of rearranged VL and VH genes during clonal expansion of B cells in splenic germinal centers.
Authors: Sehgal, D and Schiaffella, E and Anderson, A O and Mage, R G
Journal: European journal of immunology (2000): 3634-44

Determination of the binding of ligands containing the N-2,4-dinitrophenyl group to bivalent monoclonal rat anti-DNP antibody using affinity capillary electrophoresis.
Authors: Mammen, M and Gomez, F A and Whitesides, G M
Journal: Analytical chemistry (1995): 3526-35

Fast solid support detection of human papillomavirus in in vitro amplified DNA using a DNP-anti DNP monoclonal antibody couple.
Authors: Baccard-Longère, M and Alpha-Bazin, B and Chypre, C and Sauvaigo, S and Téoule, R and Bernard, P and Seigneurin, J M
Journal: Journal of virological methods (1994): 29-38

[Effects of Celosia argentea and Cucurbita moschata extracts on anti-DNP IgE antibody production in mice].
Authors: Imaoka, K and Ushijima, H and Inouye, S and Takahashi, T and Kojima, Y
Journal: Arerugi = [Allergy] (1994): 652-9

[Effects of Perilla frutescens extract on anti-DNP IgE antibody production in mice].
Authors: Imaoka, K and Inouye, S and Takahashi, T and Kojima, Y
Journal: Arerugi = [Allergy] (1993): 74-80

Effect of anti-DNP IgG1- and IgG2a-secreting hybridomas in vivo on the development of an anti-DNP IgE antibody response in mice.
Authors: Hagen, M and Morrison, B and Robbinson, D and Strejan, G H
Journal: International archives of allergy and immunology (1992): 146-53

Mechanism of allergic cross-reactions–I. Multispecific binding of ligands to a mouse monoclonal anti-DNP IgE antibody.
Authors: Varga, J M and Kalchschmid, G and Klein, G F and Fritsch, P
Journal: Molecular immunology (1991): 641-54

Mechanism of allergic cross-reactions–II. Cross-stimulation, by chemically unrelated ligands, of rat basophilic leukemia cells sensitized with an anti-DNP IgE antibody.
Authors: Varga, J M and Kalchschmid, G and Klein, G F and Fritsch, P
Journal: Molecular immunology (1991): 655-9

Bucculite XdU细胞增殖检测试剂盒*红色激光兼容**流式细胞术*

	货号	22325	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	6060
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

检测细胞增殖是评估细胞活力、细胞周期和遗传毒性的最可靠的方法之一。 该试剂盒采用的是检测细胞增殖的一种基本方法，它是在细胞生长的S期过程中，在存在胸腺嘧啶核苷的情况下检测DNA的合成。 Bucculite 流式细胞术XdU细胞增殖测定试剂盒使用XdU，该XdU在DNA合成过程中被掺入细胞DNA中。 固定细胞后，将掺入的XdU用iFluor 647叠氮化物标记。 在APC通道中观察iFluor 647标记的DNA。 Bucculite 流式细胞术XdU细胞增殖检测试剂盒是抗BrdU抗体的检测和EdU点击化学检测的的完美替代品。 它的灵敏度非常高，可用于在单细胞水平上检测活性DNA的合成。

产品说明书

样品实验方案

概述

准备细胞
使用XdU工作溶液处理细胞3小时
固定细胞
透化细胞
用Bucculite 工作溶液处理细胞30分钟
在流式细胞仪中使用660/20 nm滤光片组观察荧光

溶液配制

1.储备溶液配制

1.1 XdU储备溶液（100X）
将XdU（组分A）溶于200 µL DMSO中制成XdU储备溶液。
注意：可以将剩余的XdU储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.2iFluor 647叠氮化物储备溶液（200 X）
将iFluor 647叠氮化物（组分B）溶于100 µL DMSO中，制成iFluor 647叠氮化物储备溶液。
注意：可以将剩余的iFluor 647叠氮化物储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.3XdU反应添加剂储备溶液（20X）
将XdU反应添加剂（组分E）溶于1 mL去离子水中，制成XdU反应添加剂储备溶液。
注意：剩余的XdU反应添加剂储备溶液可以在-20°C下保存。

2.工作溶液配制

2.1XdU工作溶液配制
在1 mL细胞培养基中加入10 µL 100X XdU储备溶液，制成XdU工作溶液。
注意：1 mL的工作溶液足以进行5次检测。
注意：此100X浓度是使用优化的XdU浓度在HeLa和Jurkat细胞中测试的。 生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。 我们建议检测一系列XdU浓度，以确定最佳浓度以及是否适合您的细胞等因素。

2.2Bucculite 工作溶液
按以下顺序混合并充分涡旋
①905 µL染色缓冲液（组分C）
②40 µL CuSO4（组分D）
③5 µL iFluor 647叠氮化物储备溶液
④50 µL XdU反应添加剂储备溶液
注意：1 mL的Bucculite 工作溶液足以进行5次检测。

操作步骤

1.用XdU标记细胞
考虑到细胞在200 µL细胞培养基中，请向细胞中加入200 µL XdU工作溶液。
在适合细胞类型的最佳条件下，将细胞孵育3小时。 XdU在细胞中的时间可以直接检测细胞DNA的合成。 孵育时间取决于细胞生长速率。

2.细胞固定
孵育后，除去培养基，并用PBS洗涤细胞一次。
注意：清洗步骤后，如果使用贴壁细胞，请使用ReadiUse 细胞分离缓冲液（#60010）分离它们。
向每个试管中加入200 µL的固定缓冲液（含3.7%甲醛的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育15-20分钟。
除去固定液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

3.细胞通透性处理
向每个试管中加入200 µL透化缓冲液（0.5％Triton®X-100的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育10-20分钟。
除去通透缓冲液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

4.细胞染色
在试管中加入200 µL Bucculite 工作溶液。 在室温避光下，将Bucculite 工作溶液在室温下孵育细胞30分钟。
除去每个管中的Bucculite 工作溶液。
用PBS洗涤细胞两次，洗涤后加入200 µL PBS。
在流式细胞仪中使用660/20 nm滤光片观察细胞中的荧光信号。

图示

图1.用Buccutite XdU细胞增殖检测试剂盒（Cat＃22325）检测到的S期Jurkat细胞的流式细胞仪中的反应。 将Jurkat细胞以50,000个细胞/孔/ 100μL的浓度接种在6孔黑色板上过夜。 按照说明书，将细胞在37℃下用XdU处理3小时，固定并透化。 然后将细胞在染色缓冲液中用iFluor 647叠氮化物染色30分钟，并用PBS洗涤3次。 使用APC通道，通过NovoCyte流式细胞仪检测荧光响应。

Cell Meter Beta-Arrestin蛋白质易位GPCR信号检测试剂盒

	货号	36390	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	9180
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

所有G蛋白偶联受体（GPCR）在通过配体结合激活后，都会通过一条共同途径迅速发生脱敏作用。 β-arrestin（一种细胞质蛋白）与激活的受体的结合使GPCR信号失活，并启动了受体向细胞内的易位，在此细胞中配体被去除，受体被循环回到细胞膜。通过将荧光标记（例如GFP）附着到β-arrestin，可以检测受体arrestin复合物的位置。由于脱敏仅发生在激活的受体上，因此检测β-arrestin的易位和随后的受体再循环提供了检测GPCR靶标激活的可靠方法。 Cell Meter Beta-Arrestin蛋白易位GPCR信号试剂盒提供了功能强大的功能分析，可通过荧光成像筛选目标化合物针对已知或孤立GPCR靶标的活性。靶向GPCR的激活诱导荧光向细胞膜和内吞囊泡的移位。

产品说明书

样品实验方案

概述

准备细胞进行转染
准备Transfectamine 5000-DNA混合物
将Transfectamine 5000-DNA混合物添加到细胞培养物中，并孵育过夜
转染后24-30小时将转染的细胞转移到96孔板中，并将培养物孵育过夜
在荧光显微镜下分析由GPCR激活引起的转运

细胞准备

细胞密度在转染时它们将达到约60-70％的融合度。
转染前用新鲜的生长培养基替换。
注意：例如，对于6孔板，每孔替换为2 mL培养基，对于10 cm板，则替换为6 mL培养基。

储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

β-arrestin-GFPDNA储备溶液
向小瓶β-arrestin-GFPDNA（组分A）中加入10 µL ddH2O，充分混合至终浓度为1 µg / µL。

操作步骤

1.将3 µg DNA（例如1.5 µg Beta-arrestin-GFP DNA储备液和1.5 µg您准备的GPCR DNA）与200 µL无血清培养基混合。
2.向混合物中加入9 µL Transfectamine 5000（组分B）。
3.充分混合并在室温下孵育20分钟。
注意：Transfectamine 5000和DNA的比例需要针对不同的细胞系进行优化，通常，在我们的测试中，Transfectamine 5000转染试剂（µL）与DNA（µg）的比例应为3-5 µL：1ug。

表1. 6孔板和10 cm板的样本表

转染和转运方案
1.将Transfectamine 5000 -DNA混合物添加到培养板中，并孵育过夜。
注意事项：最早在转染后16小时即可检测到重组蛋白。转染后72〜96小时可观察到最大表达水平。
2.转染后24-30小时将转染的细胞转移到96孔板中，并孵育过夜。
使用FITC滤光片（Ex / Em = 488/530 nm）在荧光显微镜下检测受体激活诱导的β-arrestin易位。

图示

图1. HeLa细胞中β-arrestin的易位。 HeLa细胞用β-arrestin-GFP和加压素受体2（V2R）瞬时转染。 HeLa细胞在6孔板中培养，并融合至〜60％。用9 µL Transfectamine 5000转染等量的β-arrestin-GFP（1.5 µg）和V2R质粒（1.5 µg）。转染后约30小时，将细胞转移到96孔板中。转染后约48小时，将加压素（1 µM）加入细胞中以诱导β-arrestin-GFP易位。使用FITC通道在荧光显微镜下加压素处理之前和之后2小时拍摄图像。

参考文献

Screening cellular feature measurements for image-based assay development.
Authors: Logan, David J and Carpenter, Anne E
Journal: Journal of biomolecular screening (2010): 840-6

Kappa opioid receptor screen with the Tango beta-arrestin recruitment technology and characterization of hits with second-messenger assays.
Authors: Doucette, Christopher and Vedvik, Kevin and Koepnick, Elizabeth and Bergsma, Aaron and Thomson, Brian and Turek-Etienne, Tammy C
Journal: Journal of biomolecular screening (2009): 381-94

Multiplexed assays by high-content imaging for assessment of GPCR activity.
Authors: Ross, D A and Lee, S and Reiser, V and Xue, J and Alves, K and Vaidya, S and Kreamer, A and Mull, R and Hudak, E and Hare, T and Detmers, P A and Lingham, R and Ferrer, M and Strulovici, B and Santini, F
Journal: Journal of biomolecular screening (2008): 449-55

Comparison of G-protein coupled receptor desensitization-related beta-arrestin redistribution using confocal and non-confocal imaging.
Authors: Haasen, Dorothea and Wolff, Michael and Valler, Martin J and Heilker, Ralf
Journal: Combinatorial chemistry & high throughput screening (2006): 37-47

High-content screening of known G protein-coupled receptors by arrestin translocation.
Authors: Hudson, Christine C and Oakley, Robert H and Sjaastad, Michael D and Loomis, Carson R
Journal: Methods in enzymology (2006): 63-78

High-throughput confocal microscopy for beta-arrestin-green fluorescent protein translocation G protein-coupled receptor assays using the Evotec Opera.
Authors: Garippa, Ralph J and Hoffman, Ann F and Gradl, Gabriele and Kirsch, Achim
Journal: Methods in enzymology (2006): 99-120

The ligand-independent translocation assay: an enabling technology for screening orphan G protein-coupled receptors by arrestin recruitment.
Authors: Oakley, Robert H and Hudson, Christine C and Sjaastad, Michael D and Loomis, Carson R
Journal: Methods in enzymology (2006): 50-63

Development and validation of algorithms for measuring G-protein coupled receptor activation in cells using the LSC-based imaging cytometer platform.
Authors: Ozawa, Kazuo and Hudson, Christine C and Wille, Kirsten R and Karaki, Sachiko and Oakley, Robert H
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2005): 69-76

Quantitative cell-based high-content screening for vasopressin receptor agonists using transfluor technology.
Authors: Ghosh, Richik N and DeBiasio, Richard and Hudson, Christine C and Ramer, Everett R and Cowan, Conrad L and Oakley, Robert H
Journal: Journal of biomolecular screening (2005): 476-84

The cellular distribution of fluorescently labeled arrestins provides a robust, sensitive, and universal assay for screening G protein-coupled receptors.
Authors: Oakley, Robert H and Hudson, Christine C and Cruickshank, Rachael D and Meyers, Diane M and Payne, Richard E and Rhem, Shay M and Loomis, Carson R
Journal: Assay and drug development technologies (2002): 21-30

Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒*绿色荧光*

	货号	22326	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	6060
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

检测细胞增殖是评估细胞活力、细胞周期和遗传毒性的最可靠方法之一。检测细胞增殖的一种基本方法是在细胞生长的S期过程中，在存在胸腺嘧啶核苷的情况下测量DNA合成。Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒使用XdU，该XdU在DNA合成过程中被掺入细胞DNA中。固定细胞后，将掺入的XdU用iFluor 488叠氮化物标记。在FITC观察荧光标记的DNA。Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒是抗BrdU抗体的检测和EdU点击化学检测的完美替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

样品实验方案

概述

准备细胞
使用XdU工作溶液处理细胞3小时
固定细胞
透化细胞
用Bucculite 工作溶液处理细胞30分钟
使用FITC滤波片组在荧光显微镜下观察

准备细胞

1.对于贴壁细胞，过夜生长的平板细胞在96孔板中为10,000至40,000个细胞/孔/100μL，在384孔板中为2,500至10,000个细胞/孔/20μL

2.对于非贴壁细胞，离心培养细胞，然后以1-2 X 10⁶细胞/ mL（对于96孔板为10mL）悬浮细胞颗粒。

溶液配制

1.储备溶液配制

1.1 XdU储备溶液（100X）
将XdU（组分A）溶于200 µL DMSO中制成XdU储备溶液。
注意：可以将剩余的XdU储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.2iFluor 488叠氮化物储备溶液（200 X）
将iFluor 488叠氮化物（组分B）溶于100 µL DMSO中，制成iFluor 488叠氮化物储备溶液。
注意：可以将剩余的iFluor 488叠氮化物储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.3XdU反应添加剂储备溶液（20X）
将XdU反应添加剂（组分E）溶于1 mL去离子水中，制成XdU反应添加剂储备溶液。
注意：剩余的XdU反应添加剂储备溶液可以在-20°C下保存。

2.工作溶液配制

2.1XdU工作溶液配制
在1 mL细胞培养基中加入10 µL 100X XdU储备溶液，制成XdU工作溶液。
注意：1 mL的工作溶液足以进行5次检测。
注意：此100X浓度是使用优化的XdU浓度在HeLa和Jurkat细胞中测试的。 生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。 我们建议检测一系列XdU浓度，以确定最佳浓度以及是否适合您的细胞等因素。

2.2Bucculite 工作溶液
按以下顺序混合并充分涡旋
①905 µL染色缓冲液（组分C）
②40 µL CuSO4（组分D）
③5 µL iFluor 488叠氮化物储备溶液
④50 µL XdU反应添加剂储备溶液
注意：1 mL的Bucculite 工作溶液足以进行5次检测。

操作步骤

1.用XdU标记细胞
将等体积的XdU工作溶液添加到细胞中。
在最佳条件下，将细胞孵育3小时。 XdU在细胞中的时间可以直接检测细胞DNA的合成。 孵育时间取决于细胞生长速率。

2.细胞固定
孵育后，除去培养基，并用PBS洗涤细胞一次。
向每个试管中加入100 µL的固定缓冲液（含3.7%甲醛的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育15-20分钟。
除去固定液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

3.细胞通透性处理
向每个试管中加入100 µL透化缓冲液（0.5％Triton®X-100的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育10-20分钟。
除去通透缓冲液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

4.细胞染色
在试管中加入100 µL Bucculite 工作溶液。 在室温避光下，将Bucculite 工作溶液在室温下孵育细胞30分钟。
除去每个管中的Bucculite 工作溶液。
用PBS洗涤细胞两次，洗涤后加入200 µL PBS。
在荧光显微镜中使用FITC滤光片观察细胞中的荧光信号。

图示

图1.使用Buccutite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒（Cat＃22326）检测到的S期HeLa细胞图像。

Cell Meter Beta-Arrestin蛋白质易位GPCR信号检测试剂盒

	货号	36391	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	11628
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

所有G蛋白偶联受体（GPCR）在通过配体结合激活后，都会通过一条共同途径迅速发生脱敏作用。 β-arrestin（一种细胞质蛋白）与激活的受体的结合使GPCR信号失活，并启动了受体向细胞内的易位，在此细胞中配体被去除，受体被循环回到细胞膜。通过将荧光标记（例如GFP）附着到β-arrestin，可以检测受体arrestin复合物的位置。由于脱敏仅发生在激活的受体上，因此检测β-arrestin的转运和随后的受体再循环提供了检测GPCR靶标激活的可靠方法。 Cell Meter Beta-Arrestin蛋白易位GPCR信号试剂盒提供了功能强大的功能分析，可通过荧光成像筛选目标化合物针对已知或孤立GPCR靶标的活性。靶向GPCR的激活诱导荧光向细胞膜和内吞囊泡的移位。

产品说明书

样品实验方案

概述

准备细胞进行转染
准备Transfectamine 5000-DNA混合物
将Transfectamine 5000-DNA混合物添加到细胞培养物中，并孵育过夜
转染后24-30小时将转染的细胞转移到96孔板中，并将培养物孵育过夜
在荧光显微镜下分析由GPCR激活引起的转运

细胞准备

细胞密度在转染时它们将达到约60-70％的融合度。
转染前用新鲜的生长培养基替换。
注意：例如，对于6孔板，每孔替换为2 mL培养基，对于10 cm板，则替换为6 mL培养基。

储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

β-arrestin-GFPDNA储备溶液
向小瓶β-arrestin-GFPDNA（组分A）中加入10 µL ddH2O，充分混合至终浓度为1 µg / µL。

操作步骤

1.将3 µg DNA（例如1.5 µg Beta-arrestin-GFP DNA储备液和1.5 µg您准备的GPCR DNA）与200 µL无血清培养基混合。
2.向混合物中加入9 µL Transfectamine 5000（组分B）。
3.充分混合并在室温下孵育20分钟。
注意：Transfectamine 5000和DNA的比例需要针对不同的细胞系进行优化，通常，在我们的测试中，Transfectamine 5000转染试剂（µL）与DNA（µg）的比例应为3-5 µL：1ug。

表1. 6孔板和10 cm板的样本表

转染和转运方案
1.将Transfectamine 5000 -DNA混合物添加到培养板中，并孵育过夜。
注意事项：最早在转染后16小时即可检测到重组蛋白。转染后72〜96小时可观察到最大表达水平。
2.转染后24-30小时将转染的细胞转移到96孔板中，并孵育过夜。
使用FITC滤光片（Ex / Em = 488/530 nm）在荧光显微镜下检测受体激活诱导的β-arrestin易位。

图示

图1. HeLa细胞中β-arrestin的易位。 HeLa细胞用β-arrestin-GFP和加压素受体2（V2R）瞬时转染。 HeLa细胞在6孔板中培养，并融合至〜60％。用9 µL Transfectamine 5000转染等量的β-arrestin-GFP（1.5 µg）和V2R质粒（1.5 µg）。转染后约30小时，将细胞转移到96孔板中。转染后约48小时，将加压素（1 µM）加入细胞中以诱导β-arrestin-GFP易位。使用FITC通道在荧光显微镜下加压素处理之前和之后2小时拍摄图像。

参考文献

Screening cellular feature measurements for image-based assay development.
Authors: Logan, David J and Carpenter, Anne E
Journal: Journal of biomolecular screening (2010): 840-6

Kappa opioid receptor screen with the Tango beta-arrestin recruitment technology and characterization of hits with second-messenger assays.
Authors: Doucette, Christopher and Vedvik, Kevin and Koepnick, Elizabeth and Bergsma, Aaron and Thomson, Brian and Turek-Etienne, Tammy C
Journal: Journal of biomolecular screening (2009): 381-94

Multiplexed assays by high-content imaging for assessment of GPCR activity.
Authors: Ross, D A and Lee, S and Reiser, V and Xue, J and Alves, K and Vaidya, S and Kreamer, A and Mull, R and Hudak, E and Hare, T and Detmers, P A and Lingham, R and Ferrer, M and Strulovici, B and Santini, F
Journal: Journal of biomolecular screening (2008): 449-55

Comparison of G-protein coupled receptor desensitization-related beta-arrestin redistribution using confocal and non-confocal imaging.
Authors: Haasen, Dorothea and Wolff, Michael and Valler, Martin J and Heilker, Ralf
Journal: Combinatorial chemistry & high throughput screening (2006): 37-47

High-content screening of known G protein-coupled receptors by arrestin translocation.
Authors: Hudson, Christine C and Oakley, Robert H and Sjaastad, Michael D and Loomis, Carson R
Journal: Methods in enzymology (2006): 63-78

High-throughput confocal microscopy for beta-arrestin-green fluorescent protein translocation G protein-coupled receptor assays using the Evotec Opera.
Authors: Garippa, Ralph J and Hoffman, Ann F and Gradl, Gabriele and Kirsch, Achim
Journal: Methods in enzymology (2006): 99-120

The ligand-independent translocation assay: an enabling technology for screening orphan G protein-coupled receptors by arrestin recruitment.
Authors: Oakley, Robert H and Hudson, Christine C and Sjaastad, Michael D and Loomis, Carson R
Journal: Methods in enzymology (2006): 50-63

Development and validation of algorithms for measuring G-protein coupled receptor activation in cells using the LSC-based imaging cytometer platform.
Authors: Ozawa, Kazuo and Hudson, Christine C and Wille, Kirsten R and Karaki, Sachiko and Oakley, Robert H
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2005): 69-76

Quantitative cell-based high-content screening for vasopressin receptor agonists using transfluor technology.
Authors: Ghosh, Richik N and DeBiasio, Richard and Hudson, Christine C and Ramer, Everett R and Cowan, Conrad L and Oakley, Robert H
Journal: Journal of biomolecular screening (2005): 476-84

The cellular distribution of fluorescently labeled arrestins provides a robust, sensitive, and universal assay for screening G protein-coupled receptors.
Authors: Oakley, Robert H and Hudson, Christine C and Cruickshank, Rachael D and Meyers, Diane M and Payne, Richard E and Rhem, Shay M and Loomis, Carson R
Journal: Assay and drug development technologies (2002): 21-30

Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒*红色荧光*

简要概述

检测细胞增殖是评估细胞活力、细胞周期和遗传毒性的最可靠方法之一。检测细胞增殖的一种基本方法是在细胞生长的S期过程中，在存在胸腺嘧啶核苷的情况下测量DNA合成。Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒使用XdU，该XdU在DNA合成过程中被掺入细胞DNA中。固定细胞后，将掺入的XdU用iFluor 555叠氮化物标记。在Cy3/TRITC观察荧光标记的DNA。Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒是抗BrdU抗体的检测和EdU点击化学检测的完美替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

样品实验方案

概述

准备细胞
使用XdU工作溶液处理细胞3小时
固定细胞
透化细胞
用Bucculite 工作溶液处理细胞30分钟
使用Cy3/TRITC滤波片组在荧光显微镜下观察

准备细胞

1.对于贴壁细胞，过夜生长的平板细胞在96孔板中为10,000至40,000个细胞/孔/100μL，在384孔板中为2,500至10,000个细胞/孔/20μL

2.对于非贴壁细胞，离心培养细胞，然后以1-2 X 10⁶细胞/ mL（对于96孔板为10mL）悬浮细胞颗粒。

溶液配制

1.储备溶液配制

1.1 XdU储备溶液（100X）
将XdU（组分A）溶于200 µL DMSO中制成XdU储备溶液。
注意：可以将剩余的XdU储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.2iFluor 555叠氮化物储备溶液（200 X）
将iFluor 555叠氮化物（组分B）溶于100 µL DMSO中，制成iFluor 555叠氮化物储备溶液。
注意：可以将剩余的iFluor 555叠氮化物储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.3XdU反应添加剂储备溶液（20X）
将XdU反应添加剂（组分E）溶于1 mL去离子水中，制成XdU反应添加剂储备溶液。
注意：剩余的XdU反应添加剂储备溶液可以在-20°C下保存。

2.工作溶液配制

2.1XdU工作溶液配制
在1 mL细胞培养基中加入10 µL 100X XdU储备溶液，制成XdU工作溶液。
注意：1 mL的工作溶液足以进行5次检测。
注意：此100X浓度是使用优化的XdU浓度在HeLa和Jurkat细胞中测试的。 生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。 我们建议检测一系列XdU浓度，以确定最佳浓度以及是否适合您的细胞等因素。

2.2Bucculite 工作溶液
按以下顺序混合并充分涡旋
①905 µL染色缓冲液（组分C）
②40 µL CuSO4（组分D）
③5 µL iFluor 555叠氮化物储备溶液
④50 µL XdU反应添加剂储备溶液
注意：1 mL的Bucculite 工作溶液足以进行5次检测。

操作步骤

1.用XdU标记细胞
将等体积的XdU工作溶液添加到细胞中。
在最佳条件下，将细胞孵育3小时。 XdU在细胞中的时间可以直接检测细胞DNA的合成。 孵育时间取决于细胞生长速率。

2.细胞固定
孵育后，除去培养基，并用PBS洗涤细胞一次。
向每个试管中加入100 µL的固定缓冲液（含3.7%甲醛的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育15-20分钟。
除去固定液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

3.细胞通透性处理
向每个试管中加入100 µL透化缓冲液（0.5％Triton®X-100的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育10-20分钟。
除去通透缓冲液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

4.细胞染色
在试管中加入100 µL Bucculite 工作溶液。 在室温避光下，将Bucculite 工作溶液在室温下孵育细胞30分钟。
除去每个管中的Bucculite 工作溶液。
用PBS洗涤细胞两次，洗涤后加入200 µL PBS。
在荧光显微镜中使用Cy3/TRITC滤光片观察细胞中的荧光信号。

FAM-xtra 亚磷酰胺

	货号	6037	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	50 umoles	价格	1164
	Ex (nm)	493	Em (nm)	517
	分子量	879.94	溶剂	MeCN
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：6037

产品名称：FAM-xtra 亚磷酰胺

规格：50 umoles

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：879.94

溶剂：MeCN

产品介绍

6-FAM亚磷酰胺可能是最流行的荧光构建基块，已广泛用于通过荧光素荧光团有效标记5’端的寡核苷酸。标准裂解和氢氧化铵脱保护用于释放荧光素标记的寡核苷酸。尽管6-FAM已普遍用于开发各种qPCR探针，但其荧光受到两个作用限制：1.高度依赖pH值；2.光漂白迅速。目前我们已开发出FAM-xtra 亚磷酰胺解决了这两个局限性，同时完整保留了6-FAM亚磷酰胺的所有优点。 FAM-xtra亚磷酰胺可在相同操作条件下与6-FAM亚磷酰胺完全一样​​使用，而无需进行任何更改。由FAM-xtra亚磷酰胺制成的寡核苷酸具有许多优点：1.FAM-xtra标记的寡核苷酸具有与6-FAM标记的寡核苷酸相同的光谱。 2.FAM-xtra标记的寡核苷酸比相应的FAM-标记的寡核苷酸明亮得多。 3.FAM-xtra标记的寡核苷酸比相应的FAM-标记的寡核苷酸具有更高的光稳定性。4.与相应的FAM标记的寡核苷酸相比，FAM-xtra标记的寡核苷酸的荧光对pH的敏感度低得多。在生理条件下，FAM-xtra标记的寡核苷酸的荧光基本上与pH无关，这使得FAM-xtra标记的寡核苷酸的qPCR探针更加稳定。

参考文献

Development of an Innovative Intradermal siRNA Delivery System Using a Combination of a Functional Stearylated Cytoplasm-Responsive Peptide and a Tight Junction-Opening Peptide.
Authors: Ibaraki, Hisako and Kanazawa, Takanori and Takashima, Yuuki and Okada, Hiroaki and Seta, Yasuo
Journal: Molecules (Basel, Switzerland) (2016)

Non-nucleoside phosphoramidites of xanthene dyes (FAM, JOE, and TAMRA) for oligonucleotide labeling.
Authors: Kvach, Maksim V and Tsybulsky, Dmitry A and Shmanai, Vadim V and Prokhorenko, Igor A and Stepanova, Irina A and Korshun, Vladimir A
Journal: Current protocols in nucleic acid chemistry (2013): Unit 4.55

Practical synthesis of isomerically pure 5- and 6-carboxytetramethylrhodamines, useful dyes for DNA probes.
Authors: Kvach, Maksim V and Stepanova, Irina A and Prokhorenko, Igor A and Stupak, Aleksander P and Bolibrukh, Dmitry A and Korshun, Vladimir A and Shmanai, Vadim V
Journal: Bioconjugate chemistry (2009): 1673-82

Synthesis and cellular uptake of fluorescently labeled multivalent hyaluronan disaccharide conjugates of oligonucleotide phosphorothioates.
Authors: Karskela, Marika and Virta, Pasi and Malinen, Melina and Urtti, Arto and Lönnberg, Harri
Journal: Bioconjugate chemistry (2008): 2549-58

Synthesis of HyBeacons and dual-labelled probes containing 2′-fluorescent groups for use in genetic analysis.
Authors: Dobson, Neil and McDowell, David G and French, David J and Brown, Lynda J and Mellor, John M and Brown, Tom
Journal: Chemical communications (Cambridge, England) (2003): 1234-5

Amplified fragment length polymorphism (AFLP) protocol for genotyping the malarial parasite Plasmodium falciparum.
Authors: Rubio, J M and Berzosa, P J and Benito, A
Journal: Parasitology (2001): 331-6

Recovery of an oligonucleotide using silver ions immobilized onto paramagnetic particles.
Authors: Ramírez-Vick, J E and García, A A and Lee, J
Journal: Preparative biochemistry & biotechnology (1998): 243-60

Fluorescent dye phosphoramidite labelling of oligonucleotides.
Authors: Theisen, P and McCollum, C and Andrus, A
Journal: Nucleic acids symposium series (1992): 99-100

Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒*深红色荧光*

	货号	22328	存储条件	Multiple
	规格	200 Tests	价格	6060
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

检测细胞增殖是评估细胞活力、细胞周期和遗传毒性的最可靠方法之一。检测细胞增殖的一种基本方法是在细胞生长的S期过程中，在存在胸腺嘧啶核苷的情况下测量DNA合成。Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒使用XdU，该XdU在DNA合成过程中被掺入细胞DNA中。固定细胞后，将掺入的XdU用iFluor 647叠氮化物标记。在Cy5观察荧光标记的DNA。Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒是抗BrdU抗体的检测和EdU点击化学检测的完美替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

样品实验方案

概述

准备细胞
使用XdU工作溶液处理细胞3小时
固定细胞
透化细胞
用Bucculite 工作溶液处理细胞30分钟
使用Cy5滤波片组在荧光显微镜下观察

准备细胞

1.对于贴壁细胞，过夜生长的平板细胞在96孔板中为10,000至40,000个细胞/孔/100μL，在384孔板中为2,500至10,000个细胞/孔/20μL

2.对于非贴壁细胞，离心培养细胞，然后以1-2 X 10⁶细胞/ mL（对于96孔板为10mL）悬浮细胞颗粒。

溶液配制

1.储备溶液配制

1.1 XdU储备溶液（100X）
将XdU（组分A）溶于200 µL DMSO中制成XdU储备溶液。
注意：可以将剩余的XdU储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.2iFluor 647叠氮化物储备溶液（200 X）
将iFluor 647叠氮化物（组分B）溶于100 µL DMSO中，制成iFluor 647叠氮化物储备溶液。
注意：可以将剩余的iFluor 647叠氮化物储备溶液以较小的等分试样在-20°C下存储。
注意：避免光线直射，并避免重复的冻融循环。

1.3XdU反应添加剂储备溶液（20X）
将XdU反应添加剂（组分E）溶于1 mL去离子水中，制成XdU反应添加剂储备溶液。
注意：剩余的XdU反应添加剂储备溶液可以在-20°C下保存。

2.工作溶液配制

2.1XdU工作溶液配制
在1 mL细胞培养基中加入10 µL 100X XdU储备溶液，制成XdU工作溶液。
注意：1 mL的工作溶液足以进行5次检测。
注意：此100X浓度是使用优化的XdU浓度在HeLa和Jurkat细胞中测试的。 生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。 我们建议检测一系列XdU浓度，以确定最佳浓度以及是否适合您的细胞等因素。

2.2Bucculite 工作溶液
按以下顺序混合并充分涡旋
①905 µL染色缓冲液（组分C）
②40 µL CuSO4（组分D）
③5 µL iFluor 647叠氮化物储备溶液
④50 µL XdU反应添加剂储备溶液
注意：1 mL的Bucculite 工作溶液足以进行5次检测。

操作步骤

1.用XdU标记细胞
将等体积的XdU工作溶液添加到细胞中。
在最佳条件下，将细胞孵育3小时。 XdU在细胞中的时间可以直接检测细胞DNA的合成。 孵育时间取决于细胞生长速率。

2.细胞固定
孵育后，除去培养基，并用PBS洗涤细胞一次。
向每个试管中加入100 µL的固定缓冲液（含3.7%甲醛的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育15-20分钟。
除去固定液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

3.细胞通透性处理
向每个试管中加入100 µL透化缓冲液（0.5％Triton®X-100的PBS溶液，未提供），并在室温下孵育10-20分钟。
除去通透缓冲液，并用PBS清洗每个试管中的细胞两次。

4.细胞染色
在试管中加入100 µL Bucculite 工作溶液。 在室温避光下，将Bucculite 工作溶液在室温下孵育细胞30分钟。
除去每个管中的Bucculite 工作溶液。
用PBS洗涤细胞两次，洗涤后加入200 µL PBS。
在荧光显微镜中使用Cy5滤光片观察细胞中的荧光信号。