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| 货号 | CAS号 | 编号 | 包装 | 参数 | 库存 | 货期 | 价格 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 101174 | JPJ76 | 1 个 | 规格:130x85x11mm,中间:90mT,边:180mT | 0 | 停产 | 咨询客服 | |
| 101175 | JPJ76 | 1 个 | 规格:130x85x17mm,中间120mT,边:200mT | 0 | 停产 | 咨询客服 |
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7-AAD 是一种非渗透性的核酸荧光染料。该染料不能透过活细胞的细胞膜，但可穿透膜损伤细胞如晚期凋亡细胞或者坏死细胞的细胞膜并与其内的 DNA 结合，可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞，广泛用于流式细胞仪。7-AAD 与 DNA 结合后可发出强烈的荧光，其荧光特性与 PI 相似，可被 488 nm 氩离子激光激发，但其发射光谱较 PI 窄，且发射波长更长，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是 PI 的最佳替代品，可与多种 488 激发光激发的荧光染料联合使用，如 FITC，PE 等。
| 产品名称 | 7-AAD，7240-37-1 |
|---|---|
| 中文名称 | 7-氨基放线菌素 |
| 英文名称 | 7-Aminoactinomycin D |
| CAS | 7240-37-1 |
| 分子式 | C62H87N13O16 |
| 分子量 | 1270.43 |
| 存储条件 | -20°干燥避光 |
| Ex/Em(nm) | 546/647 |
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 |
货号 | 20100 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 25 Tests | 价格 | 3924 | |
| Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 517 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
我们的Cell Meter 活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞，半胱天冬酶抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合。胱天蛋白酶3/7的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。已经证明胱天蛋白酶3/7对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）具有底物选择性。该试剂盒使用TF3-DEVD-FMK作为半胱天冬酶3/7活性的荧光指示剂。TF3-DEVD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的胱天蛋白酶3/7。一旦与胱天蛋白酶3/7结合，荧光试剂保留在细胞内。结合抑制caspase 3/7，但不会阻止细胞凋亡的进行。
有多种参数可用于检测细胞凋亡。这种Cell Meter 活细胞半胱天冬酶3/7活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中胱天蛋白酶3/7的活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的caspase 3/7活性，或用于筛选caspase 3/7抑制剂。TF3-DEVD-FMK，红色标记试剂，允许通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶3/7。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。
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适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| 参数 | 见表1 |
| 荧光显微镜 | |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 通道： | 见表1 |
| 荧光酶标仪 | |
| 推荐孔板： | 黑色孔板 |
| 通道： | 见表2 |
表1:用于流式细胞仪和荧光显微镜的荧光强度检测
| 流式细胞仪 | 荧光显微镜 | |
| FAM-DEVD-FMK | FL1 通道 | FITC 通道 |
| Propidium Iodide | FL2 通道 | TRITC 通道 |
| Hoechst Dye | 紫色激光 | DAPI 通道 |
表2:荧光酶标仪的荧光强度检测
| 激发 | 发射 | cutoff | |
| FAM-DEVD-FMK | FL1 通道 | FITC 通道 | 515nm |
| Propidium Iodide | FL2 通道 | TRITC 通道 | |
| Hoechst Dye | 紫色激光 | DAPI 通道 |
产品说明书
分离细胞的检测方案
概述
用测试化合物制备细胞，密度为5×105至2×106个细胞/ mL
将TF3-DEVD-FMK以1：150的比例加入细胞溶液中
在室温下孵育1小时
沉淀细胞，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞
在Ex / Em = 550 / 595nm处分析细胞
注：使用前将所有部件在室温下解冻。
操作方法
1.根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度，但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：
1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。
2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。
3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。
4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。
2.通过向TF3-DEVD-FMK（组分A）的小瓶中加入50μLDMSO制备150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液。 将150×TF3-DEVD-FMK以1：150的比例加入细胞溶液中，并将细胞在37℃，5％CO2培养箱中孵育1小时。
注1：对于TF3-DEVD-FMK标记，细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。
注2：对于粘附细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用TF3-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。
注3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。
3.将细胞以约200g旋转5分钟，并用1mL洗涤缓冲液（组分B）洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。
注1：TF3-DEVD-FMK是荧光的，因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。
注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样，用于步骤5。
4.如果需要，用DNA染色标记细胞（例如用于死细胞的Nuclear Green DCS1，或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst）。
5.通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 550/595 nm处检测荧光强度（对于Nuclear Green DCS1，Ex / Em = 490/525 nm，对于Hoechst染料，Ex / Em = 350/461 nm）
5.1对于流式细胞仪，使用Ex / Em = 550/595 nm（用于Nuclear Green DCS1染色的FL1通道）的通道监测荧光强度。
5.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。 将100μL细胞悬浮液置于96孔黑色微量滴定板的每个孔中。
注意：如果需要平衡细胞浓度，调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。 如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失，则此调整步骤是可选的。
5.3使用TRITC通道（用于Nuclear Green DCS1染色的FITC通道，用于Hoechst染色的DAPI通道）在荧光显微镜下观察细胞。
5.4使用荧光酶标仪，使用Ex / Em = 550/595 nm（在570 nm处截止）底部读取模式监测荧光强度。
参考文献
An inner activation gate controls TMEM16F phospholipid scrambling
Authors: Trieu Le, Zhiguang Jia, Son C Le, Yang Zhang, Jianhan Chen, Huanghe Yang
Journal: Nature communications (2019): 1846
Drosophila Subdued is a moonlighting transmembrane protein 16 (TMEM16) that transports ions and phospholipids
Authors: Trieu Le, Son C Le, Huanghe Yang
Journal: Journal of Biological Chemistry (2019): jbc–AC118
Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58
Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12
Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407
相关产品
| 产品名称 | 货号 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 红色荧光 | Cat#20101 |
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 |
货号 | 20101 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 25 Tests | 价格 | 3924 | |
| Ex (nm) | 554 | Em (nm) | 578 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
我们的Cell Meter 活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞，半胱天冬酶抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合。胱天蛋白酶3/7的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。已经证明胱天蛋白酶3/7对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）具有底物选择性。该试剂盒使用TF3-DEVD-FMK作为半胱天冬酶3/7活性的荧光指示剂。TF3-DEVD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的胱天蛋白酶3/7。一旦与胱天蛋白酶3/7结合，荧光试剂保留在细胞内。结合抑制caspase 3/7，但不会阻止细胞凋亡的进行。
有多种参数可用于监测细胞凋亡。这种Cell Meter 活细胞半胱天冬酶3/7活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中胱天蛋白酶3/7的活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的caspase 3/7活性，或用于筛选caspase 3/7抑制剂。TF3-DEVD-FMK，红色标记试剂，允许通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶3/7。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。
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适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| 激发： | 550nm |
| 发射: | 595nm |
| 通道： | FL1通道 |
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | TRITC通道 |
| 发射： | TRITC通道 |
| 通道： | 黑色透明 |
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 550nm |
| 发射： | 595nm |
| cutoff: | 570nm |
| 通道： | 黑色透明 |
产品说明书
分离细胞的检测方案
概述
用测试化合物制备细胞，密度为5×105至2×106个细胞/ mL
将TF3-DEVD-FMK以1：150的比例加入细胞溶液中
在室温下孵育1小时
沉淀细胞，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞
在Ex / Em = 550 / 595nm处分析细胞
注：使用前将所有部件在室温下解冻。
操作方法
1.根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度，但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：
1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。
2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。
3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。
4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。
2.通过向TF3-DEVD-FMK（组分A）的小瓶中加入50μLDMSO制备150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液。 将150×TF3-DEVD-FMK以1：150的比例加入细胞溶液中，并将细胞在37℃，5％CO2培养箱中孵育1小时。
注1：对于TF3-DEVD-FMK标记，细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。
注2：对于粘附细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用TF3-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。
注3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。
3.将细胞以约200g旋转5分钟，并用1mL洗涤缓冲液（组分B）洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。
注1：TF3-DEVD-FMK是荧光的，因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。
注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样，用于步骤5。
4.如果需要，用DNA染色标记细胞（例如用于死细胞的Nuclear Green DCS1，或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst）。
5.通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 550/595 nm处检测荧光强度（对于Nuclear Green DCS1，Ex / Em = 490/525 nm，对于Hoechst染料，Ex / Em = 350/461 nm）
5.1对于流式细胞仪，使用Ex / Em = 550/595 nm（用于Nuclear Green DCS1染色的FL1通道）的通道监测荧光强度。
5.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。 将100μL细胞悬浮液置于96孔黑色微量滴定板的每个孔中。
注意：如果需要平衡细胞浓度，调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。 如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失，则此调整步骤是可选的。
5.3使用TRITC通道（用于Nuclear Green DCS1染色的FITC通道，用于Hoechst染色的DAPI通道）在荧光显微镜下观察细胞。
5.4使用荧光酶标仪，使用Ex / Em = 550/595 nm（在570 nm处截止）底部读取模式监测荧光强度。
参考文献
An inner activation gate controls TMEM16F phospholipid scrambling
Authors: Trieu Le, Zhiguang Jia, Son C Le, Yang Zhang, Jianhan Chen, Huanghe Yang
Journal: Nature communications (2019): 1846
Drosophila Subdued is a moonlighting transmembrane protein 16 (TMEM16) that transports ions and phospholipids
Authors: Trieu Le, Son C Le, Huanghe Yang
Journal: Journal of Biological Chemistry (2019): jbc–AC118
Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58
Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12
Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407
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| 产品名称 | 货号 |
| Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 绿色荧光 | Cat#20100 |
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
| 货号 | 21235 | 存储条件 | 在2-8度冷藏保存 |
| 规格 | 100 Tests | 价格 | 2604 |
| Ex (nm) | Em (nm) | ||
| 分子量 | 溶剂 | ||
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
细胞内pH（pHi）在许多细胞事件中起着重要的调节作用，包括细胞体积调节，细胞代谢，钙调节，受体介导的信号转导，离子转运，内吞作用和其他细胞过程。胞浆中的细胞内pH通常为6.8〜7.4，酸性细胞器中的pH为4.5〜6.0。细胞内pH变化具有显着的生理学作用，例如，细胞内信使例如Ca 2+和cAMP的pH依赖性浓度影响细胞信号传导。最近的几篇报道表明，pH失调正在成为癌细胞的标志。 Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒提供了一系列带有尼日尔霉素的pH校准缓冲液（pH 4.5〜8.0），在100–150 mM K +的存在下，它们可通过外部pH调节细胞内pH。当与pH指示剂（例如BCFL，AM或BCECF，AM）结合使用时，Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒可创建用于确定细胞内pH的标准曲线。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | Texas Red |
| 发射： | Texas Red |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 440，500nm |
| 发射： | 530nm |
| cutoff: | 515nm |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.带有pH指示剂的染色细胞（例如：BCFL，AM）
2.用HH缓冲液洗涤细胞
3.准备细胞内pH校准缓冲液
4.向细胞添加细胞内pH校准缓冲液
5.在37°C孵育10分钟
6.使用适当的Ex / Em过滤器分析细胞
溶液配制
1.储备溶液的制备
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. Nigericin储备溶液（10 mM）：
将276 µL DMSO（组分J）添加到小瓶尼日尔霉素（组分I）中，制成10 mM Nigericin储备溶液。
2.工作溶液的制备
将1 µL 10mM Nigericin储备溶液添加到1 mL标准pH缓冲液（组分A至组分H）中，制成细胞内pH校准缓冲液。
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样品示例及操作
这是使用BCFL，AM pH指示剂校准细胞内pH的样品实验方案。
1.用BCFL，AM染色细胞：
1.1在DMSO溶液中制备5 mM BCFL，AM（Cat＃21190）。
1.2在HH缓冲液+ 0.02％PF127（Cat＃20053）中稀释至5 µM。
1.3从细胞中去除生长培养基。
1.4加入100 µL BCFL，AM染色液。
1.5在37°C下孵育30分钟。
1.6去除BCFL，AM染色溶液，并用HH Buffer洗涤一次。
1.7清空每个孔。
2.制作细胞内pH标准曲线：
2.1向细胞中添加100 µL细胞内pH校准缓冲液。
2.2在37°C下孵育5-10分钟。
2.3使用适当的Ex / Em过滤器分析细胞。 例如：BCFL，AM：Ex = 440、500nm，Em = 530nm。
参考文献
PHD2 is a regulator for glycolytic reprogramming in macrophages
Authors: Annemarie Guentsch, Angelika Beneke, Lija Swain, Katja Farhat, Shunmugam Nagarajan, Ben Wielockx, Kaamini Raithatha, Jan Dudek, Peter Rehling, Anke Zieseniss
Journal: Molecular and Cellular Biology (2016): MCB–00236
Design, calibration and application of broad-range optical nanosensors for determining intracellular pH
Authors: R. V. Sondergaard
Journal: Nat Protoc (2014): 2841-58
Manipulation of intracellular pH by electroporation: an alternative method for fast calibration of pH in living cells
Authors: J. Vecer
Journal: Anal Biochem (2004): 348-50
Flow cytometric calibration of intracellular pH measurements in viable cells using mixtures of weak acids and bases
Authors: S. Chow
Journal: Cytometry (1996): 360-7
Calibration methods and avoidance of errors in measurement of intracellular pH (pHcyt) using the indicator bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein (BCECF) in human platelets
Authors: P. A. Valant
Journal: J Fluoresc (1992): 191-206
A novel method for absolute calibration of intracellular pH indicators
Authors: D. A. Eisner
Journal: Pflugers Arch (1989): 553-8
Intracellular calibration of a pH-sensitive dye in isolated, perfused salamander proximal tubules
Authors: J. R. Chaillet
Journal: J Gen Physiol (1985): 765-94
Umbelliferone as an Intracellular pH-sensitive fluorescent indicator and blood-brain barrier probe: instrumentation, calibration, and analysis
Authors: T. M. Sundt
Journal: J Neurophysiol (1980): 60-75