Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒 货号13840-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒

Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒

Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒    货号13840 货号 13840 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 4584
Ex (nm) 575 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测草酰乙酸的试剂盒,草酰乙酸是柠檬酸循环的重要组成部分,它与乙酰辅酶A反应生成柠檬酸盐。它还涉及糖异生,尿素循环,乙醛酸循环,氨基酸合成和脂肪酸合成。草酰乙酸的缺乏限制了糖原异生和尿素循环功能,并且可以导致能量产生减少。草酰乙酸也可用作血液谷氨酸清除剂,在创伤性脑损伤后提供神经保护,表现为海马神经元损失减少和神经功能改善。Amplite 比色草酰乙酸检测试剂盒提供了一种灵敏的检测方法,用于定量生物样品中的草酰乙酸。草酰乙酸转化为丙酮酸,通过酶偶联反应产生过氧化氢。用吸光度酶标仪在575nm处用Amplite Red监测过氧化氢的产生。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 575nm
推荐孔板: 透明底板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备测试样品(50μL)和连续稀释的草酰乙酸标准品(50μL)

加入等体积的测定混合物(50μL)

在室温下孵育30分钟至1小时

监测575nm处的吸光度强度

注意:在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备连续稀释的草酰乙酸标准品和测试样品:

1.1将100μLDdH2O加入到草酰乙酸盐标准小瓶(组分E)中以制备100mM草酰乙酸标准溶液。

1.2制备草酰乙酸标准稀释液:将10μL100mM草酰乙酸盐(来自步骤1.1)加入990μL测定缓冲液(组分C)中,得到1mM草酰乙酸溶液。 将320μL的1mM草酰乙酸标准溶液加入680μL测定缓冲液中以制备320μM草酰乙酸溶液。 进行1:2连续稀释,得到160,80,40,20,10,5μM连续稀释的草酰乙酸标准品。

1.3根据说明书中的表1,将50μL含草酰乙酸的样品和连续稀释的草酰乙酸标准品加入透明底96孔微量培养板中。

 

2.准备草酰乙酸测定混合物:

2.1Make Amplite 红色底物原液(200X):将50μLDMSO(组分F)加入Amplite Red底物(组分A)中,制成200X Amplite Red底物原液。

2.2制备草酰乙酸脱羧酶(OAC)储备溶液(100X):将50μLddH2O加入草酰乙酸脱羧酶(组分D)中以制备100×草酰乙酸脱羧酶原液。

2.3制备测定混合物:将5mL测定缓冲液(组分C)加入一个酶混合瓶(组分B)中充分混合。 将50μLOAC储备溶液(来自步骤2.2)和25μL200XAmplite Red储备溶液(来自步骤2.1)转移到瓶中并充分混合。

注意1:分析混合物不稳定,及时使用,避免直接暴露在光线下。

注意2:将未使用的200X Amplite Red原液储存在-20℃,避免光照和反复冻融循环。

 

3.运行草酰乙酸测定:

3.1将50μL测定混合物(来自步骤2.3)添加到草酰乙酸标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤1.3),以使总草酰乙酸测定体积为100μL/孔。

注意1:对于384孔板,每孔加入25μL样品,25μLAssay混合液。

注意2:在pH 6.5至7.0下进行草酰乙酸测定。

3.2在室温下孵育反应混合物30分钟至1小时。

3.3使用575 nm的吸光度读板仪检测吸光度的增加。

 

参考文献

Enzymatic assay for D-aspartic acid using D-aspartate oxidase and oxaloacetate decarboxylase
Authors: Kato S, Ikuta T, Hemmi H, Takahashi S, Kera Y, Yoshimura T.
Journal: Biosci Biotechnol Biochem (2012): 2150

Assay of blood and tissue oxaloacetate and alpha-ketoglutarate by isotope dilution gas chromatography-mass spectrometry
Authors: Laplante A, Comte B, Des Rosiers C.
Journal: Anal Biochem (1995): 580

Effect of oxaloacetate and phosphorylation on ATP-citrate lyase activity
Authors: Pentyala SN, Benjamin WB.
Journal: Biochemistry (1995): 10961

Novel oxaloacetate effect on mitochondrial Ca2+ movement
Authors: Leikin YN, Zharova TV, Tjulina OV.
Journal: FEBS Lett (1993): 35

A sensitive multienzymatic assay for the measurement of pyruvate, dihydroxyacetone phosphate, oxaloacetate, and acetoacetate in clear extracts from biological samples
Authors: Arias-Mendoza F, Pina E.
Journal: Prep Biochem (1991): 211

Flow-injection analysis of amino acids and their metabolites by immobilized vitamin B6-dependent enzymes. Sensitive determination of L-aspartate, L-glutamate, 2-oxoglutarate, and oxaloacetate
Authors: Kurkijarvi K, Vierijoki T, Korpela T.
Journal: Ann N Y Acad Sci (1990): 394

Pyruvate dehydrogenase activity in osmotically shocked rat brain mitochondria: stimulation by oxaloacetate
Authors: Haas RH, Thompson G, Morris B, Conright K, Andrews T.
Journal: J Neurochem (1988): 673

Activity of maize leaf phosphoenolpyruvate carboxylase in relation to tautomerization and nonenzymatic decarboxylation of oxaloacetate
Authors: Walker GH, Ku MS, Edwards GE.
Journal: Arch Biochem Biophys (1986): 489

Kinetic mechanism of Escherichia coli isocitrate dehydrogenase and its inhibition by glyoxylate and oxaloacetate
Authors: Nimmo HG.
Journal: Biochem J (1986): 317

The interaction of dithiothreitol and acetyl coenzyme A in a radiochemical assay for rat brain ATP:citrate oxaloacetate lyase
Authors: Simpson J.
Journal: J Neurochem (1981): 100

 

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产品名称 货号
Amplite 比色法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 Cat#11400
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说明书
Amplite 比色法草酰乙酸检测试剂盒.pdf

Amplite 荧光法草酰乙酸检测试剂盒 红色荧光 货号13841-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光法草酰乙酸检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法草酰乙酸检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法草酰乙酸检测试剂盒 红色荧光    货号13841 货号 13841 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 4584
Ex (nm) 571 Em (nm) 585
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法草酰乙酸检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测草酰乙酸的试剂盒,草酰乙酸是柠檬酸循环的重要组成部分,它与乙酰辅酶A反应生成柠檬酸盐。它还涉及糖异生,尿素循环,乙醛酸循环,氨基酸合成和脂肪酸合成。草酰乙酸的缺乏限制了糖原异生和尿素循环功能,并且可以导致能量产生减少。草酰乙酸也可用作血液谷氨酸清除剂,在创伤性脑损伤后提供神经保护,表现为海马神经元损失减少和神经功能改善。Amplite™荧光草酰乙酸检测试剂盒为生物样品中的草酰乙酸定量提供了灵敏的检测方法。草酰乙酸转化为丙酮酸,通过酶偶联反应产生过氧化氢。通过荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590nm下用Amplite™Red监测过氧化氢的产生。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法草酰乙酸检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备测试样品(50μL)和连续稀释的草酰乙酸标准品(50μL)

加入等体积的测定混合物(50μL)

在室温下孵育

监测荧光强度在Ex / Em = 540/590 nm

注意:在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备连续稀释的草酰乙酸标准品和测试样品:

1.1将100μLDdH2O加入草酰乙酸标准品(组分E)中,制成100mM草酰乙酸标准溶液。

1.2制备草酰乙酸标准稀释液:将10μL100mM草酰乙酸盐(来自步骤1.1)加入990μL测定缓冲液(组分C)中,得到1mM草酰乙酸溶液。 将100μL的1mM草酰乙酸标准溶液加入900μL测定缓冲液中以制备100μM草酰乙酸溶液。进行1:3连续稀释,得到约30,10,3,1,0.3和0.1μM连续稀释的草酰乙酸标准品。

1.3根据说明书中的表1,将50μL含草酰乙酸的样品和连续稀释的草酰乙酸盐标准品加入到固体黑色96孔微量培养板中。

 

2.准备草酰乙酸测定混合物:

2.1制作Amplite 红色底物原液(200X):将50μLDMSO(组分F)加入Amplite Red底物(组分A)中,制成200X Amplite Red底物原液。

2.2制备草酰乙酸脱羧酶(OAC)储备溶液(100X):将50μLddH 2 O加入草酰乙酸脱羧酶(组分D)中以制备100μL草酰乙酸脱羧酶原液。

2.3制备测定混合物:将5mL测定缓冲液(组分C)加入一个酶混合瓶(组分B)中充分混合。 将50μLOAC储备溶液(来自步骤2.2)和25μL200X Amplite Red储备溶液(来自步骤2.1)转移到瓶中并充分混合。

注意1:分析混合物不稳定,及时使用,避免直接暴露在光线下。

注意2:将未使用的200X Amplite Red原液储存在-20℃,避免光照和反复冻融循环。

 

3.运行草酰乙酸测定:

3.1将50μL测定混合物(来自步骤2.3)添加到草酰乙酸标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤1.3),以使总草酰乙酸测定体积为100μL/孔。

注1:对于384孔板,每孔加入25μL样品,25μLAssay混合液。

注2:在pH 6.5至7.0下进行草酰乙酸测定。

3.2在室温下孵育反应混合物30分钟至1小时。

3.3使用荧光板读数器在Ex / Em = 540 / 590nm(截止:570nm)监测荧光增加。

 

参考文献

Enzymatic assay for D-aspartic acid using D-aspartate oxidase and oxaloacetate decarboxylase
Authors: Kato S, Ikuta T, Hemmi H, Takahashi S, Kera Y, Yoshimura T.
Journal: Biosci Biotechnol Biochem (2012): 2150

Assay of blood and tissue oxaloacetate and alpha-ketoglutarate by isotope dilution gas chromatography-mass spectrometry
Authors: Laplante A, Comte B, Des Rosiers C.
Journal: Anal Biochem (1995): 580

Effect of oxaloacetate and phosphorylation on ATP-citrate lyase activity
Authors: Pentyala SN, Benjamin WB.
Journal: Biochemistry (1995): 10961

Novel oxaloacetate effect on mitochondrial Ca2+ movement
Authors: Leikin YN, Zharova TV, Tjulina OV.
Journal: FEBS Lett (1993): 35

A sensitive multienzymatic assay for the measurement of pyruvate, dihydroxyacetone phosphate, oxaloacetate, and acetoacetate in clear extracts from biological samples
Authors: Arias-Mendoza F, Pina E.
Journal: Prep Biochem (1991): 211

Flow-injection analysis of amino acids and their metabolites by immobilized vitamin B6-dependent enzymes. Sensitive determination of L-aspartate, L-glutamate, 2-oxoglutarate, and oxaloacetate
Authors: Kurkijarvi K, Vierijoki T, Korpela T.
Journal: Ann N Y Acad Sci (1990): 394

Pyruvate dehydrogenase activity in osmotically shocked rat brain mitochondria: stimulation by oxaloacetate
Authors: Haas RH, Thompson G, Morris B, Conright K, Andrews T.
Journal: J Neurochem (1988): 673

Activity of maize leaf phosphoenolpyruvate carboxylase in relation to tautomerization and nonenzymatic decarboxylation of oxaloacetate
Authors: Walker GH, Ku MS, Edwards GE.
Journal: Arch Biochem Biophys (1986): 489

Kinetic mechanism of Escherichia coli isocitrate dehydrogenase and its inhibition by glyoxylate and oxaloacetate
Authors: Nimmo HG.
Journal: Biochem J (1986): 317

The interaction of dithiothreitol and acetyl coenzyme A in a radiochemical assay for rat brain ATP:citrate oxaloacetate lyase
Authors: Simpson J.
Journal: J Neurochem (1981): 100

 

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