Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒 货号36550-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒    货号36550 货号 36550 存储条件 Multiple
规格 1 Plate 价格 2604
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

钾(K+)离子通道在调节基本生物过程(包括心率,激素和神经递质分泌,水和电解质平衡)中起重要作用。钾离子通道已被认为是包括心律不齐,疼痛,糖尿病,神经功能障碍等在内的疾病适应症的药物靶标。Tl +通过K+通道的渗透性已被广泛用于测定K+通道。表达目的K+通道的细胞(例如hERG,Kv1.3,Kir2.1,KATP)预先装有Tl+敏感染料。该染料是非荧光的,并且对细胞膜是可渗透的。进入细胞内部后,非荧光AM酯染料会被内源性酯酶裂解为留在细胞内部的带负电荷的染料。将含有低剂量Tl+刺激缓冲液添加到细胞中时,Tl +会流过K+通道并与Tl+敏感染料结合,从而产生荧光信号。该信号与K+通道的活动成正比。如果将拮抗剂或拮抗剂添加至细胞,则荧光信号分别降低或升高,以反映K+通道的抑制或刺激活性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒。

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式 底读模式
其他仪器
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加Tl-520 AM染料加载溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)
  3. 在37°C孵育1小时
  4. 加入激动剂/拮抗剂并在37°C下孵育30分钟
  5. 加入Tl2SO4 / K2SO4刺激溶液(96孔板为50 µL /孔,384孔板为12.5 µL /孔)
  6. 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. TI-520 AM储备溶液:将20 µL(#36550)或DMSO(#36551和#36552)的DMSO加到TI-520 AM(组分A)的小瓶中,并充分混合。 注意:未使用的TI-520 AM储备溶液可以等分并存储在<-20℃下。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液(1X):将1 mL的10XPluronic®F127 Plus(组分B)添加到9 mL的HHBS缓冲液(组分C)中并充分混合。 注意:10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus(组分B)。避光并避免重复的冻融循环。

3.无氯缓冲液(1X):在8 mL的ddH2O中加入2 mL的无氯缓冲液(5X)(组分D),并充分混合。

4. Tl2SO4溶液(未提供,Sigma Cat#208191):将Tl2SO4溶于超纯水中至终浓度80 mM。 注意:Tl2SO4有毒。 采取必要的预防措施,以防止吸入和皮肤接触。

 

工作溶液配制

1. TI-520 AM染料加载溶液:将20 µL TI-520 AM储备溶液(500X)加入10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。

2.刺激溶液(5X):在1X无氯化物缓冲液中用Tl2SO4稀释配体(用于非电压门控钾通道)或K2SO4(用于电压门控钾通道)。

表1.应针对每个靶标优化参考(HEK293-KCNH2细胞中的电压门控hERG通道),Tl2SO4和K2SO4(电压门控钾通道)或配体(非电压门控钾通道)的浓度及细胞类型。

组分

容积

5X 浓度

最终浓度

无氯缓冲液(5X)

2 mL

 

 

K2SO4 (250 mM)

1 mL

25 mM

5 mM

TI2SO4 (80mM)

0.5 mL

4 mM

0.8 mM

ddH2O

5.5 mL

 

 

总计:

10 mL

 

 

 

实验步骤

1.将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的TI-520 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时,然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意:如果测定需要37°C,请立即进行实验,而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS准备K+通道拮抗剂或激动剂。

4.在细胞培养箱中用拮抗剂(用于抑制研究)将板孵育30分钟。

5.用FLIPR,FDSS或Flexstation加50X /孔(对于96孔板)或12.5μL/孔(对于384孔板)的5X刺激缓冲液。 使用Ex / Em = 490/525 nm的滤光片组进行实验。 每1-2秒读取板3分钟。

 

图示

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒    货号36550

图1.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了对hERG通道的剂量依赖性抑制。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 向细胞中加入10 µL阿司咪唑,并在37°C下孵育30分钟。 通过FlexStation将50 µL含0.5 mM Tl2SO4和2.5 mM K2SO4的刺激溶液注入每个孔中,并在激发/发射= 490 / 525nm的情况下每秒钟读取3分钟。 IC50 = 0.46 µM。

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒    货号36550

图2.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了K2SO4剂量依赖性hERG通道活性。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 通过FlexStation将终浓度为1 mM,0.5 mM,0.25 mM或0 mM的Tl2SO4和不同浓度的含K2SO4的刺激溶液注入每个孔中,并在激发/发射= 490 /下每1-2秒读取平板3分钟。 525nm。

 

 

说明书
Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒.pdf

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒 货号36551-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒    货号36551 货号 36551 存储条件 Multiple
规格 10 Plates 价格 5976
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

钾(K+)离子通道在调节基本生物过程(包括心率,激素和神经递质分泌,水和电解质平衡)中起重要作用。钾离子通道已被认为是包括心律不齐,疼痛,糖尿病,神经功能障碍等在内的疾病适应症的药物靶标。Tl +通过K+通道的渗透性已被广泛用于测定K+通道。表达目的K+通道的细胞(例如hERG,Kv1.3,Kir2.1,KATP)预先装有Tl+敏感染料。该染料是非荧光的,并且对细胞膜是可渗透的。进入细胞内部后,非荧光AM酯染料会被内源性酯酶裂解为留在细胞内部的带负电荷的染料。将含有低剂量Tl+刺激缓冲液添加到细胞中时,Tl +会流过K+通道并与Tl+敏感染料结合,从而产生荧光信号。该信号与K+通道的活动成正比。如果将拮抗剂或拮抗剂添加至细胞,则荧光信号分别降低或升高,以反映K+通道的抑制或刺激活性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒。

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式 底读模式
其他仪器
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加Tl-520 AM染料加载溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)
  3. 在37°C孵育1小时
  4. 加入激动剂/拮抗剂并在37°C下孵育30分钟
  5. 加入Tl2SO4 / K2SO4刺激溶液(96孔板为50 µL /孔,384孔板为12.5 µL /孔)
  6. 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. TI-520 AM储备溶液:将20 µL(#36550)或DMSO(#36551和#36552)的DMSO加到TI-520 AM(组分A)的小瓶中,并充分混合。 注意:未使用的TI-520 AM储备溶液可以等分并存储在<-20℃下。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液(1X):将1 mL的10XPluronic®F127 Plus(组分B)添加到9 mL的HHBS缓冲液(组分C)中并充分混合。 注意:10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus(组分B)。避光并避免重复的冻融循环。

3.无氯缓冲液(1X):在8 mL的ddH2O中加入2 mL的无氯缓冲液(5X)(组分D),并充分混合。

4. Tl2SO4溶液(未提供,Sigma Cat#208191):将Tl2SO4溶于超纯水中至终浓度80 mM。 注意:Tl2SO4有毒。 采取必要的预防措施,以防止吸入和皮肤接触。

 

工作溶液配制

1. TI-520 AM染料加载溶液:将20 µL TI-520 AM储备溶液(500X)加入10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。

2.刺激溶液(5X):在1X无氯化物缓冲液中用Tl2SO4稀释配体(用于非电压门控钾通道)或K2SO4(用于电压门控钾通道)。

表1.应针对每个靶标优化参考(HEK293-KCNH2细胞中的电压门控hERG通道),Tl2SO4和K2SO4(电压门控钾通道)或配体(非电压门控钾通道)的浓度及细胞类型。

组分

容积

5X 浓度

最终浓度

无氯缓冲液(5X)

2 mL

 

 

K2SO4 (250 mM)

1 mL

25 mM

5 mM

TI2SO4 (80mM)

0.5 mL

4 mM

0.8 mM

ddH2O

5.5 mL

 

 

总计:

10 mL

 

 

 

实验步骤

1.将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的TI-520 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时,然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意:如果测定需要37°C,请立即进行实验,而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS准备K+通道拮抗剂或激动剂。

4.在细胞培养箱中用拮抗剂(用于抑制研究)将板孵育30分钟。

5.用FLIPR,FDSS或Flexstation加50X /孔(对于96孔板)或12.5μL/孔(对于384孔板)的5X刺激缓冲液。 使用Ex / Em = 490/525 nm的滤光片组进行实验。 每1-2秒读取板3分钟。

 

图示

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒    货号36551

图1.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了对hERG通道的剂量依赖性抑制。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 向细胞中加入10 µL阿司咪唑,并在37°C下孵育30分钟。 通过FlexStation将50 µL含0.5 mM Tl2SO4和2.5 mM K2SO4的刺激溶液注入每个孔中,并在激发/发射= 490 / 525nm的情况下每秒钟读取3分钟。 IC50 = 0.46 µM。

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒    货号36551

图2.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了K2SO4剂量依赖性hERG通道活性。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 通过FlexStation将终浓度为1 mM,0.5 mM,0.25 mM或0 mM的Tl2SO4和不同浓度的含K2SO4的刺激溶液注入每个孔中,并在激发/发射= 490 /下每1-2秒读取平板3分钟。 525nm。

 

 

说明书
Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒.pdf

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒 货号36552-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒    货号36552 货号 36552 存储条件 Multiple
规格 100 Plates 价格 45684
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

钾(K+)离子通道在调节基本生物过程(包括心率,激素和神经递质分泌,水和电解质平衡)中起重要作用。钾离子通道已被认为是包括心律不齐,疼痛,糖尿病,神经功能障碍等在内的疾病适应症的药物靶标。Tl +通过K+通道的渗透性已被广泛用于测定K+通道。表达目的K+通道的细胞(例如hERG,Kv1.3,Kir2.1,KATP)预先装有Tl+敏感染料。该染料是非荧光的,并且对细胞膜是可渗透的。进入细胞内部后,非荧光AM酯染料会被内源性酯酶裂解为留在细胞内部的带负电荷的染料。将含有低剂量Tl+刺激缓冲液添加到细胞中时,Tl +会流过K+通道并与Tl+敏感染料结合,从而产生荧光信号。该信号与K+通道的活动成正比。如果将拮抗剂或拮抗剂添加至细胞,则荧光信号分别降低或升高,以反映K+通道的抑制或刺激活性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒。

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式 底读模式
其他仪器
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加Tl-520 AM染料加载溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)
  3. 在37°C孵育1小时
  4. 加入激动剂/拮抗剂并在37°C下孵育30分钟
  5. 加入Tl2SO4 / K2SO4刺激溶液(96孔板为50 µL /孔,384孔板为12.5 µL /孔)
  6. 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. TI-520 AM储备溶液:将20 µL(#36550)或DMSO(#36551和#36552)的DMSO加到TI-520 AM(组分A)的小瓶中,并充分混合。 注意:未使用的TI-520 AM储备溶液可以等分并存储在<-20℃下。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液(1X):将1 mL的10XPluronic®F127 Plus(组分B)添加到9 mL的HHBS缓冲液(组分C)中并充分混合。 注意:10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus(组分B)。避光并避免重复的冻融循环。

3.无氯缓冲液(1X):在8 mL的ddH2O中加入2 mL的无氯缓冲液(5X)(组分D),并充分混合。

4. Tl2SO4溶液(未提供,Sigma Cat#208191):将Tl2SO4溶于超纯水中至终浓度80 mM。 注意:Tl2SO4有毒。 采取必要的预防措施,以防止吸入和皮肤接触。

 

工作溶液配制

1. TI-520 AM染料加载溶液:将20 µL TI-520 AM储备溶液(500X)加入10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。

2.刺激溶液(5X):在1X无氯化物缓冲液中用Tl2SO4稀释配体(用于非电压门控钾通道)或K2SO4(用于电压门控钾通道)。

表1.应针对每个靶标优化参考(HEK293-KCNH2细胞中的电压门控hERG通道),Tl2SO4和K2SO4(电压门控钾通道)或配体(非电压门控钾通道)的浓度及细胞类型。

组分

容积

5X 浓度

最终浓度

无氯缓冲液(5X)

2 mL

 

 

K2SO4 (250 mM)

1 mL

25 mM

5 mM

TI2SO4 (80mM)

0.5 mL

4 mM

0.8 mM

ddH2O

5.5 mL

 

 

总计:

10 mL

 

 

 

实验步骤

1.将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的TI-520 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时,然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意:如果测定需要37°C,请立即进行实验,而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS准备K+通道拮抗剂或激动剂。

4.在细胞培养箱中用拮抗剂(用于抑制研究)将板孵育30分钟。

5.用FLIPR,FDSS或Flexstation加50X /孔(对于96孔板)或12.5μL/孔(对于384孔板)的5X刺激缓冲液。 使用Ex / Em = 490/525 nm的滤光片组进行实验。 每1-2秒读取板3分钟。

 

图示

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒    货号36552

图1.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了对hERG通道的剂量依赖性抑制。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 向细胞中加入10 µL阿司咪唑,并在37°C下孵育30分钟。 通过FlexStation将50 µL含0.5 mM Tl2SO4和2.5 mM K2SO4的刺激溶液注入每个孔中,并在激发/发射= 490 / 525nm的情况下每秒钟读取3分钟。 IC50 = 0.46 µM。

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒    货号36552

图2.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了K2SO4剂量依赖性hERG通道活性。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 通过FlexStation将终浓度为1 mM,0.5 mM,0.25 mM或0 mM的Tl2SO4和不同浓度的含K2SO4的刺激溶液注入每个孔中,并在激发/发射= 490 /下每1-2秒读取平板3分钟。 525nm。

 

 

说明书
Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒.pdf