产品基本信息

货号：48058

产品名称：iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L)

规格：200ug

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~150000

浓度：1mg/ml

外观：绿色固体

溶剂：水

激发波长(nm)：822

发射波长(nm)：850

应用：流式细胞术 (FACS)、ELISA、HC、蛋白质印迹

产品介绍

AAT Bioquest 的 iFluor 染料针对标记蛋白质，尤其是抗体进行了优化。 这些染料是明亮的、光稳定的，并且对蛋白质的淬灭作用最小。 它们可以被荧光仪器的主要激光线（例如，350、405、488、532-561、633-647 和 808 nm）很好地激发。 iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L) 偶联物的荧光激发和发射最大值分别为 ~822 nm 和 ~850 nm。 这些独特的光谱特性使 iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L) 偶联物成为各种 NIR 成像应用的理想选择，包括蛋白质印迹、ELISA、蛋白质阵列、组织切片成像和体内成像。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L)。 

点击查看光谱

染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL，再加入1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：不纯抗体、牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体不会被很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得极佳标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得极佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B），及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

3.确定最佳染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定最佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）。

3.6检测上述4种结合物，确定最佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的最佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

图示

图1. HeLa细胞先用小鼠抗微管蛋白染色，再用iFluor™ 647山羊抗小鼠IgG（H + L）（红色）染色； 细胞核用DAPI（蓝色）染色。

图2. HeLa细胞分别与小鼠抗微管蛋白和AAT的iFluor™ 647山羊抗小鼠IgG偶联物（红色，左）或AlexaFluor®647山羊抗小鼠IgG（红色，右）一起孵育。 细胞核用Hoechst 33342（蓝色，目录号17530）染色。

图3.将HeLa细胞与小鼠抗微管蛋白和生物素山羊抗小鼠IgG一起孵育，然后分别与AAT的iFluor™647-链霉亲和素缀合物（红色，左）或链霉亲和素与AlexaFluor®647（红色，右）缀合。

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

相关产品

产品基本信息

货号：48059

产品名称：iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L)

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~150000

浓度：1mg/ml

外观：绿色固体

溶剂：水

激发波长(nm)：822

发射波长(nm)：850

应用：流式细胞术 (FACS)、ELISA、HC、蛋白质印迹

产品介绍

AAT Bioquest 的 iFluor 染料针对标记蛋白质，尤其是抗体进行了优化。 这些染料是明亮的、光稳定的，并且对蛋白质的淬灭作用最小。 它们可以被荧光仪器的主要激光线（例如，350、405、488、532-561、633-647 和 808 nm）很好地激发。 iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L) 偶联物的荧光激发和发射最大值分别为 ~822 nm 和 ~850 nm。 这些独特的光谱特性使 iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L) 偶联物成为各种 NIR 成像应用的理想选择，包括蛋白质印迹、ELISA、蛋白质阵列、组织切片成像和体内成像。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L)。 

点击查看光谱

染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL，再加入1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：不纯抗体、牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体不会被很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得极佳标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得极佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B），及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

3.确定最佳染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定最佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）。

3.6检测上述4种结合物，确定最佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的最佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

图示

图1.人淋巴细胞上的APC-iFluor™700（红色）和APC-AlexaFluor®700（蓝色）抗人CD8的流式细胞仪分析。 将全血用APC-iFluor™700或APC-AlexaFluor®700抗人CD8染色，然后与用APC-iFluor™700和APC-AlexaFluor®700小鼠IgG对照染色的全血进行比较。 流式细胞仪在ACEA流式细胞仪系统上进行。

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

相关产品

产品基本信息

货号：48060

产品名称：iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L)*交叉吸附*

规格：200ug

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~150000

浓度：1mg/ml

外观：绿色固体

溶剂：水

激发波长(nm)：822

发射波长(nm)：850

应用：流式细胞术 (FACS)、ELISA、HC、蛋白质印迹

产品介绍

AAT Bioquest 的 iFluor 染料针对标记蛋白质，尤其是抗体进行了优化。 这些染料是明亮的、光稳定的，并且对蛋白质的淬灭作用最小。 它们可以被荧光仪器的主要激光线（例如，350、405、488、532-561、633-647 和 808 nm）很好地激发。 iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L) 偶联物的荧光激发和发射最大值分别为 ~822 nm 和 ~850 nm。 这些独特的光谱特性使 iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L) 偶联物成为各种 NIR 成像应用的理想选择，包括蛋白质印迹、ELISA、蛋白质阵列、组织切片成像和体内成像。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L)。 

点击查看光谱

染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL，再加入1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：不纯抗体、牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体不会被很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得极佳标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得极佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B），及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

3.确定最佳染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定最佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）。

3.6检测上述4种结合物，确定最佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的最佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

图示

图1.人淋巴细胞上的APC-iFluor™700（红色）和APC-AlexaFluor®700（蓝色）抗人CD8的流式细胞仪分析。 将全血用APC-iFluor™700或APC-AlexaFluor®700抗人CD8染色，然后与用APC-iFluor™700和APC-AlexaFluor®700小鼠IgG对照染色的全血进行比较。 流式细胞仪在ACEA流式细胞仪系统上进行。

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

相关产品

产品基本信息

货号：48061

产品名称：iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L)*交叉吸附*

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~150000

浓度：1mg/ml

外观：绿色固体

溶剂：水

激发波长(nm)：822

发射波长(nm)：850

应用：流式细胞术 (FACS)、ELISA、HC、蛋白质印迹

产品介绍

AAT Bioquest 的 iFluor 染料针对标记蛋白质，尤其是抗体进行了优化。 这些染料是明亮的、光稳定的，并且对蛋白质的淬灭作用最小。 它们可以被荧光仪器的主要激光线（例如，350、405、488、532-561、633-647 和 808 nm）很好地激发。 iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L) 偶联物的荧光激发和发射最大值分别为 ~822 nm 和 ~850 nm。 这些独特的光谱特性使 iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L) 偶联物成为各种 NIR 成像应用的理想选择，包括蛋白质印迹、ELISA、蛋白质阵列、组织切片成像和体内成像。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 820 山羊抗兔 IgG (H+L)。 

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iFluor 790琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，iFluor 染料是一系列优秀的荧光标记染料，可以覆盖整个可见光谱。所有iFluor 染料都具有优异的水溶性。它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。iFluor 染料也具有比经典荧光标记染料更好的标记性能，如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7。一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。它们是用于标记蛋白质和核酸而不包含性能的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。

琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的极佳试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1）溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2）反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3）反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和甘氨酸）和硫醇化合物的缓冲液。广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。 4）反应温度：大多数缀合在室温下进行。然而，特定标记反应可能需要升高或降低的温度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 790琥珀酰亚胺酯。 

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• 锦囊：iFluor 系列染料大集合

染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：不纯抗体、牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体不会被很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得极佳标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得极佳标记效率，建议极终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B）。 及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

3.确定极佳染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定极佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）（见说明书）。

3.6运行上述4种结合物的功能测试，确定极佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的极佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 – 蛋白质缀合物的级分。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥

参考文献

Nanovesicle delivery to the liver via retinol binding protein and platelet-derived growth factor receptors: how targeting ligands affect biodistribution
Authors: Ching-Yun Hsu, Chun-Han Chen, Ibrahim A Aljuffali, You-Shan Dai, Jia-You Fang
Journal: Nanomedicine (2017)

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产品基本信息

货号：48062

产品名称：iFluor 840 山羊抗兔 IgG (H+L)

规格：200ug

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~150000

浓度：1mg/ml

外观：深棕色固体

溶剂：水

激发波长(nm)：836

发射波长(nm)：879

应用：流式细胞术 (FACS)、ELISA、HC、蛋白质印迹

产品介绍

AAT Bioquest 的 iFluor 染料针对标记蛋白质，尤其是抗体进行了优化。 这些染料是明亮的、光稳定的，并且对蛋白质的淬灭作用最小。 它们可以被荧光仪器的主要激光线（例如，350、405、488、532-561、633-647 和 808 nm）很好地激发。 iFluor 840 山羊抗兔 IgG (H+L) 偶联物的荧光激发和发射最大值分别为 ~836 nm 和 ~879 nm。 这些独特的光谱特性使 iFluor 840 山羊抗兔 IgG (H+L) 偶联物成为各种 NIR 成像应用的理想选择，包括蛋白质印迹、ELISA、蛋白质阵列、组织切片成像和体内成像。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 840 山羊抗兔 IgG (H+L)。 

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iFluor 790琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，iFluor 染料是一系列优秀的荧光标记染料，可以覆盖整个可见光谱。所有iFluor 染料都具有优异的水溶性。它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。iFluor 染料也具有比经典荧光标记染料更好的标记性能，如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7。一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。它们是用于标记蛋白质和核酸而不包含性能的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。

琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的极佳试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1）溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2）反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3）反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和甘氨酸）和硫醇化合物的缓冲液。广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。 4）反应温度：大多数缀合在室温下进行。然而，特定标记反应可能需要升高或降低的温度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 790琥珀酰亚胺酯。 

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染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：不纯抗体、牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体不会被很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得极佳标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得极佳标记效率，建议极终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B）。 及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

3.确定极佳染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定极佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）（见说明书）。

3.6运行上述4种结合物的功能测试，确定极佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的极佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 – 蛋白质缀合物的级分。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥

参考文献

Nanovesicle delivery to the liver via retinol binding protein and platelet-derived growth factor receptors: how targeting ligands affect biodistribution
Authors: Ching-Yun Hsu, Chun-Han Chen, Ibrahim A Aljuffali, You-Shan Dai, Jia-You Fang
Journal: Nanomedicine (2017)

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