Annexin V-AF594标记 货号20096-AAT Bioquest荧光染料

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Annexin V-AF594标记

Annexin V-AF594标记

货号 20096 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 tests 价格 2604
Ex (nm) 590 Em (nm) 618
分子量 ~36000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Annexin V-AF594标记是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针,膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物,属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸(PS),其通常保持在细胞膜的内叶(细胞质侧)。 在细胞凋亡中,PS被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示,并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具,旨在通过测量磷脂酰丝氨酸的易位来监测细胞凋亡。

膜联蛋白V结合物在Ca2+存在下与凋亡细胞表面上的PS结合,它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。 因此,我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用,以区分死细胞和凋亡细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Annexin V-AF594标记探针。 

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 561nm激光
发射: 610/20nm滤波片
通道: PE-Texas Red通道
荧光显微镜  
推荐孔板: 黑色透明
通道: Pacific Blue通道

产品说明书

分析方案

概述

用测试化合物(200μL/样品)制备细胞

添加Annexin V结合物测定溶液

室温孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

 

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞:

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl2,pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中(来自步骤1.1)。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选:在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭,用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟,避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)以增加体积(参见下面的步骤1.8)。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度(参见下面的步骤2或3)。

 

2.使用流式细胞仪分析:

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意:粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而,Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人(见参考文献1和2)。

 

3.使用荧光显微镜分析:

3.1移取步骤1.6的细胞悬液,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意:对于粘附细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育(步骤1.6)后,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,并将膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后,细胞也可以在2%甲醛中固定,并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞

 

参考文献

White light-induced cell apoptosis by a conjugated polyelectrolyte through singlet oxygen generation
Authors: Jiamei Liang, Pan Wu, Chunyan Tan, Yuyang Jiang
Journal: RSC advances (2018): 9218–9222

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)

Detecting Apoptosis, Autophagy, and Necrosis
Authors: Jack Coleman, Rui Liu, Kathy Wang, Arun Kumar
Journal: (2016): 77–92

 

相关产品

产品名称 货号
Annexin V-mFluor Violet 540标记 Cat#20082
Annexin V-mFluor Violet 450标记 Cat#20080
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说明书
Annexin V-AF594标记.pdf

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 405nm激发 货号22828-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 405nm激发

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 405nm激发

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 405nm激发     货号22828 货号 22828 存储条件 避免光照, 在2-8度冷藏保存
规格 100 Tests 价格 2604
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡的试剂盒,我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸(PS)的转运来监测细胞凋亡。在凋亡中,PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标,可以在观察到形态变化之前进行检测。该试剂盒使用与PS特异性结合的荧光膜联蛋白V。已经证明膜联蛋白V缀合物选择性结合PS,使用带有Pacific Blue滤波片的流式细胞仪,对该特定的测定试剂盒进行了优化,以监测细胞凋亡。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒。 

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 405nm激光
发射: 450/40nm滤波片
通道: Pacific Blue通道
荧光显微镜  
激发: DAPI滤波片
发射: DAPI滤波片
推荐孔板: 黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物(200μL/样品)制备细胞
2.添加Annexin V-mFluor Violet 450检测溶液
3.在室温下孵育30-60分钟
4.使用具有Ex / Em = 405 / 450nm滤光器组的流式细胞仪或具有Violet滤光器的荧光显微镜分析细胞

 

操作步骤

使用膜联蛋白V-mFluor Violet 450制备和孵育细胞:

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

2.离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液(组分B)中。

4.将2μL膜联蛋白V-mFluor Violet 450(组分A)加入细胞中。

5.可选:将2μL100X碘化丙啶(组分C)加入细胞中,用于坏死细胞。

6.在室温下孵育30至60分钟,避光。

7.在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,添加300μL分析缓冲液(组分B)以增加体积。

8.使用具有Ex / Em = 405 / 450nm滤光片组的流式细胞仪或具有Violet滤光片的荧光显微镜监测荧光强度。

 

使用流式细胞仪分析:

1.使用流式细胞仪在Ex / Em = 405 / 450nm处定量膜联蛋白V-mFluor Violet 450结合。 当碘化丙啶加入细胞时,使用FL2通道测量细胞活力。 注意:粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而,Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。

 

使用荧光显微镜分析:

1.孵育后移取细胞悬液,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后用测定缓冲液重悬细胞。

2.将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。 注意:对于粘附细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。 与V-mFluor Violet 450孵育后,用测定缓冲液冲洗1-2次,并将化验缓冲液加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并可视化细胞。 在与V-mFluor Violet 450一起温育后,细胞也可以固定在2%甲醛中,并在显微镜下观察。

3.使用Violet通道在荧光显微镜下用V-mFluor Violet 450分析凋亡细胞。 当碘化丙啶加入细胞时,使用TRITC通道测量细胞活力。 质膜上的蓝色染色表明V-mFluor Violet 450与细胞表面上的PS结合。

 

数据分析

        在活的非凋亡细胞中,膜联蛋白V-mFluor Violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡,其通常为所有细胞的2-6%。 在凋亡细胞中,膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸结合,磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上,导致染色强度增加。

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 405nm激发     货号22828

图1.在Jurkat细胞中检测膜联蛋白V-mFluor Violet 450和磷脂酰丝氨酸的结合活性。 将Jurkat细胞在37℃,5%CO2培养箱中在没有(蓝色)或1μM星形孢菌素(红色)的情况下处理5小时,然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分钟。 使用FACSCalibur(Becton Dickinson)流式细胞仪,使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下测量膜联蛋白V-mFluor Violet 450的荧光强度。

 

参考文献

In situ polymerizable hydrogel incorporated with specific pathogen-free porcine platelet-rich plasma for the reconstruction of the corneal endothelium
Authors: Yung-Kai Lin, Ruchi Sharma, Hsu Ma, Wen-Shyan Chen, Chao-Ling Yao
Journal: Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers (2017)

Novel regulations of MEF2-A, MEF2-D, and CACNA1S in the functional incompetence of adipose-derived mesenchymal stem cells by induced indoxyl sulfate in chronic kidney disease
Authors: Duyen Thi Do, Nam Nhut Phan, Chih-Yang Wang, Zhengda Sun, Yen-Chang Lin
Journal: Cytotechnology (2016): 2589–2604

Shear stress-induced alteration of epithelial organization in human renal tubular cells
Authors: Damien Maggiorani, Romain Dissard, Marcy Belloy, Jean-Sébastien Saulnier-Blache, Audrey Casemayou, Laure Ducasse, Sandra Grès, Julie Bellière, Cécile Caubet, Jean-Loup Bascands
Journal: PloS one (2015): e0131416

Targeting a G-protein-coupled receptor overexpressed in endocrine tumors by magnetic nanoparticles to induce cell death
Authors: Claire Sanchez, Darine El Hajj Diab, Vincent Connord, Pascal Clerc, Etienne Meunier, Bernard Pipy, Bruno Payré, Reasmey P Tan, Michel Gougeon, Julian Carrey
Journal: Acs Nano (2014): 1350–1363

 

相关产品

产品名称 货号
Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 橙色荧光 405nm激发 Cat#22830
Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 405nm激发 Cat#22829
Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合流式细胞检测 Cat#22824

说明书
Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 405nm激发 .pdf

钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 钾盐 货号20400-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 钾盐

钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 钾盐

钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 钾盐    货号20400 货号 20400 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 1944
Ex (nm) 495 Em (nm) 528
分子量 681.77 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息
产品编号:20400
产品名称:钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 钾盐
规格:10×50 ug
保质期:收到后12个月

化学和光谱特性
分子量:681.77
溶剂:水
激发波长:494
发射波长:516

 

产品介绍

钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,不受细胞渗透的Mag-Fluo-4是Fluo-4的类似物,Md离子的Kd为4.7 mM,Ca离子的Kd为22 µM,使其可用作细胞内Mg离子指示剂以及低剂量的Mg离子指示剂。亲和钙离子指示剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 钾盐。 

点击查看光谱

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

参考文献

Real-time intra-store confocal Ca2+ imaging in isolated mouse cardiomyocytes
Authors: Fernandez-Tenorio M, Niggli E.
Journal: Cell Calcium. (2016)

Redistribution of subcellular calcium and its effect on apoptosis in primary cultures of rat proximal tubular cells exposed to lead
Authors: Wang H, Wang ZK, Jiao P, Zhou XP, Yang DB, Wang ZY, Wang L.
Journal: Toxicology (2015): 137

Role of Mitofusin-2 in mitochondrial localization and calcium uptake in skeletal muscle
Authors: Ainbinder A, Boncompagni S, Protasi F, Dirksen RT.
Journal: Cell Calcium (2015): 14

EGF stimulates Mg(2+) influx in mammary epithelial cells
Authors: Trapani V, Arduini D, Luongo F, Wolf FI.
Journal: Biochem Biophys Res Commun (2014): 572

Tetanic Ca2+ transient differences between slow- and fast-twitch mouse skeletal muscle fibres: a comprehensive experimental approach
Authors: Calderon JC, Bolanos P, Caputo C.
Journal: J Muscle Res Cell Motil (2014): 279

TRPC1 is involved in Ca(2)(+) influx and cytotoxicity following Pb(2)(+) exposure in human embryonic kidney cells
Authors: Zhang H, Li W, Xue Y, Zou F.
Journal: Toxicol Lett (2014): 52

High-throughput functional assays of IP3-evoked Ca2+ release
Authors: Tovey SC, Taylor CW.
Journal: Cold Spring Harb Protoc (2013): 930

Measurement and simulation of myoplasmic calcium transients in mouse slow-twitch muscle fibres
Authors: Hollingworth S, Kim MM, Baylor SM.
Journal: J Physiol (2012): 575

Presence of store-operated Ca2+ entry in C57BL/6J mouse ventricular myocytes and its suppression by sevoflurane
Authors: Kojima A, Kitagawa H, Omatsu-Kanbe M, Matsuura H, Nosaka S.
Journal: Br J Anaesth (2012): 352

Sevoflurane protects ventricular myocytes from Ca2+ paradox-mediated Ca2+ overload by blocking the activation of transient receptor potential canonical channels
Authors: Kojima A, Kitagawa H, Omatsu-Kanbe M, Matsuura H, Nosaka S.
Journal: Anesthesiology (2011): 509

说明书
钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 钾盐.pdf

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 405nm激发 货号22829-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 405nm激发

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 405nm激发

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 405nm激发     货号22829 货号 22829 存储条件 避免光照, 在2-8度冷藏保存
规格 100 Tests 价格 2604
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。 有多种参数可用于检测细胞活力。 该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸(PS)的转运来检测细胞凋亡。 在细胞凋亡中,PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标,可以在观察形态变化之前进行检测。该试剂盒使用与PS特异性结合的荧光膜联蛋白V。 已经证明膜联蛋白V缀合物选择性结合PS。 使用带有525/40发射滤光片组的405激光器的流式细胞仪,对该特定的测定试剂盒进行了优化,以检测细胞凋亡。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒。

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 405nm激光
发射: 525/40nm滤波片
通道: AmCyan通道
荧光显微镜  
激发: 紫色滤波片
发射: 紫色滤波片
推荐孔板: 黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用测试化合物制备细胞(200 µL /样品)
  2. 添加膜联蛋白V-mFluor Violet 500分析溶液
  3. 在室温下孵育30-60分钟
  4. 使用带有525/40 nm滤光片(AmCyan通道)的流式细胞仪或带有紫色滤光片组的荧光显微镜分析细胞

 

实验步骤

1.用膜联蛋白V-mFluor Violet 500制备和孵育细胞:

1.1用测试化合物处理细胞一段时间(对于用星形孢菌素处理过的Jurkat细胞,需要4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.2离心细胞以获得1-5×105细胞/管。

1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液(组分B)中。

1.4在细胞中加入2 µL Annexin V-mFluor Violet 500(组分A)。

1.5可选:向坏死的细胞中加入2 µL 100X碘化丙啶(组分C)。

1.6避光保存,于室温下孵育30至60分钟。

1.7在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,添加300 µL分析缓冲液(组分B)以增加体积。

1.8使用带有525/40 nm滤光片的流式细胞仪(AmCyan通道)或带有紫色滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。

2.通过使用流式细胞仪进行分析:

2.1使用带有525/40 nm滤光片的流式细胞仪(AmCyan通道)定量膜联蛋白V-mFluor Violet 500结合。 将碘化丙啶加入细胞后,使用610/20 nm滤光片(PE-德克萨斯红通道)测量细胞活力。 注意:对贴壁细胞的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经过常规测试,因为在细胞分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤。 

3.通过使用荧光显微镜进行分析:

3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后用测定缓冲液重悬细胞。

3.2将细胞添加到载玻片盖玻片的载玻片上。注意:对于贴壁细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。与膜联蛋白V-mFluor Violet 500一起孵育后,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后将测定缓冲液加到盖玻片上。将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。与膜联蛋白V-mFluor Violet 500孵育后,还可以将细胞固定在2%甲醛中,并在显微镜下观察。

3.3使用紫罗兰滤光片组在荧光显微镜下用膜联蛋白V-mFluor Violet 500分析凋亡细胞。当碘化丙锭添加到细胞中时,使用TRITC通道测量细胞活力。质膜上的绿色染色表明膜联蛋白V-mFluor Violet 500与细胞表面的PS结合。

 

参考文献

In situ polymerizable hydrogel incorporated with specific pathogen-free porcine platelet-rich plasma for the reconstruction of the corneal endothelium
Authors: Lin, Yung-Kai and Sharma, Ruchi and Ma, Hsu and Chen, Wen-Shyan and Yao, Chao-Ling
Journal: Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers (2017)

Novel regulations of MEF2-A, MEF2-D, and CACNA1S in the functional incompetence of adipose-derived mesenchymal stem cells by induced indoxyl sulfate in chronic kidney disease
Authors: Do, Duyen Thi and Phan, Nam Nhut and Wang, Chih-Yang and Sun, Zhengda and Lin, Yen-Chang
Journal: Cytotechnology (2016): 2589–2604

Shear stress-induced alteration of epithelial organization in human renal tubular cells
Authors: Maggiorani, Damien and Dissard, Romain and Belloy, Marcy and Saulnier-Blache, Jean-Sébastien and Casemayou, Audrey and Ducasse, Laure and Grès, S and ra and Bellière, Julie and Caubet, Cécile and Basc and s, Jean-Loup and others
Journal: PloS one (2015): e0131416

Targeting a G-protein-coupled receptor overexpressed in endocrine tumors by magnetic nanoparticles to induce cell death
Authors: Sanchez, Claire and El Hajj Diab, Darine and Connord, Vincent and Clerc, Pascal and Meunier, Etienne and Pipy, Bernard and Payré, Bruno and Tan, Reasmey P and Gougeon, Michel and Carrey, Julian and others
Journal: Acs Nano (2014): 1350–1363

Glycogen synthase kinase-3 and Omi/HtrA2 induce annexin A2 cleavage followed by cell cycle inhibition and apoptosis
Authors: Wang CY, Lin YS, Su WC, Chen CL, Lin CF.
Journal: Mol Biol Cell (2009): 4153

Gold fluorescent annexin A5 as a novel apoptosis detection tool
Authors: Kurschus FC, Pal PP, Baumler P, Jenne DE, Wiltschi B, Budisa N.
Journal: Cytometry A (2009): 626

Detection of apoptosis induced by new type gosling viral enteritis virus in vitro through fluorescein annexin V-FITC/PI double labeling
Authors: Chen S, Cheng AC, Wang MS, Peng X.
Journal: World J Gastroenterol (2008): 2174

Evaluation of annexin V and Calcein-AM as markers of mononuclear cell apoptosis during human immunodeficiency virus infection
Authors: Palma PF, Baggio GL, Spada C, Silva RD, Ferreira SI, Treitinger A.
Journal: Braz J Infect Dis (2008): 108

Measurement of annexin V uptake and lactadherin labeling for the quantification of apoptosis in adherent Tca8113 and ACC-2 cells
Authors: Hu T, Shi J, Jiao X, Zhou J, Yin X.
Journal: Braz J Med Biol Res (2008): 750

Rhodamine B isothiocyanate doped silica-coated fluorescent nanoparticles (RBITC-DSFNPs)-based bioprobes conjugated to Annexin V for apoptosis detection and imaging
Authors: Shi H, He X, Wang K, Yuan Y, Deng K, Chen J, Tan W.
Journal: Nanomedicine (2007): 266

说明书
Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 405nm激发 .pdf

钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 AM 货号20401-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 AM

钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 AM

钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 AM    货号20401 货号 20401 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 1944
Ex (nm) 495 Em (nm) 528
分子量 817.65 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

关键参数

仪器:荧光酶标仪
Ex:490
Em:525
Cutoff:515
推荐纯黑色孔板

 

仪器:荧光显微镜
通道:FITC
推荐黑色透明底孔板

 

仪器:流式细胞仪
通道:FITC

 

钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,细胞渗透性Mag-Fluo-4 AM是Fluo-4 AM的类似物,Mg离子的Kd为4.7 mM,Ca离子的Kd为22μM,因此可用作细胞内Mg离子指示剂以及 低亲和力Ca离子指示剂。 这种低亲和力荧光Ca离子指示剂已被用于准确跟踪骨骼肌中空间平均游离Ca离子瞬态的动力学。 Mag-fluo-4产生关于骨骼肌中空间平均游离Ca离子瞬态的可靠动力学信息。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 AM。 

点击查看光谱

钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 AM加载到活细胞中的方案(点击查看)

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Mag-Fluo-4 AM储备液
2.1使用的Mag-Fluo-4 AM量:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg Mag-Fluo-4AM与611.51μL无水DMSO混合。

 

3.使用10μMMag-Fluo-4 AM 2在HHBS中制备2X工作溶液
3.1最终孔内浓度的Mag-Fluo-4 AM:5μM
3.2在合适的容器中混合16μL的Mag-Fluo-4AM。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL
注意:对于大多数细胞系,我们建议Mag-Fluo-4 AM的最终浓度为4至5μM

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的最终浓度调节至5μM的Mag-Fluo-4 AM

 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育30-60分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入HHBS或您选择的缓冲液,直至体积为4 mL
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。

 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 494/516 nm运行实验。

 

参考文献

Real-time intra-store confocal Ca2+ imaging in isolated mouse cardiomyocytes
Authors: Fernandez-Tenorio M, Niggli E.
Journal: Cell Calcium. (2016)

Redistribution of subcellular calcium and its effect on apoptosis in primary cultures of rat proximal tubular cells exposed to lead
Authors: Wang H, Wang ZK, Jiao P, Zhou XP, Yang DB, Wang ZY, Wang L.
Journal: Toxicology (2015): 137

Role of Mitofusin-2 in mitochondrial localization and calcium uptake in skeletal muscle
Authors: Ainbinder A, Boncompagni S, Protasi F, Dirksen RT.
Journal: Cell Calcium (2015): 14

EGF stimulates Mg(2+) influx in mammary epithelial cells
Authors: Trapani V, Arduini D, Luongo F, Wolf FI.
Journal: Biochem Biophys Res Commun (2014): 572

Tetanic Ca2+ transient differences between slow- and fast-twitch mouse skeletal muscle fibres: a comprehensive experimental approach
Authors: Calderon JC, Bolanos P, Caputo C.
Journal: J Muscle Res Cell Motil (2014): 279

TRPC1 is involved in Ca(2)(+) influx and cytotoxicity following Pb(2)(+) exposure in human embryonic kidney cells
Authors: Zhang H, Li W, Xue Y, Zou F.
Journal: Toxicol Lett (2014): 52

High-throughput functional assays of IP3-evoked Ca2+ release
Authors: Tovey SC, Taylor CW.
Journal: Cold Spring Harb Protoc (2013): 930

Measurement and simulation of myoplasmic calcium transients in mouse slow-twitch muscle fibres
Authors: Hollingworth S, Kim MM, Baylor SM.
Journal: J Physiol (2012): 575

Presence of store-operated Ca2+ entry in C57BL/6J mouse ventricular myocytes and its suppression by sevoflurane
Authors: Kojima A, Kitagawa H, Omatsu-Kanbe M, Matsuura H, Nosaka S.
Journal: Br J Anaesth (2012): 352

Sevoflurane protects ventricular myocytes from Ca2+ paradox-mediated Ca2+ overload by blocking the activation of transient receptor potential canonical channels
Authors: Kojima A, Kitagawa H, Omatsu-Kanbe M, Matsuura H, Nosaka S.
Journal: Anesthesiology (2011): 509

说明书
钙离子荧光探针Mag-Fluo-4 AM.pdf

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光 货号22840-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光    货号22840 货号 22840 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 3264
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光是美国AAT Bioquest研发的用于细胞凋亡和坏死检测的试剂盒,该特定试剂盒旨在同时检测细胞凋亡,坏死和健康。细胞凋亡是一种自主细胞拆解的活跃程序化过程,可避免引发炎症。在细胞凋亡中,磷脂酰丝氨酸(PS)被转移到质膜的外部小叶。作为细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指标,可以在观察到形态变化之前检测细胞表面上磷脂酰丝氨酸的出现。该试剂盒中使用的PS传感器在与膜PS结合后具有绿色荧光(Ex / Em = 490 / 525nm)。坏死已被描述为由于环境扰动导致的被动,意外细胞死亡,其中炎性细胞内容物不受控制地释放。如通过膜不可渗透的7-AAD(Ex / Em = 546 / 647nm)标记细胞核的能力所证明的,质膜完整性的丧失代表了证明晚期细胞凋亡和坏死的直接方法。此外,该试剂盒还提供活细胞质标记染料,CytoCalcein Violet 450(Ex / Em = 405/450 nm),用于标记活细胞的细胞质。该试剂盒经过优化,可用流式细胞仪或荧光显微镜同时检测细胞凋亡(绿色),坏死(绿色和/或红色)和健康细胞(蓝色)。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的细胞凋亡和坏死检测试剂盒。

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 405nm,488nm激光
发射: 450/40 nm, 530/30 nm, 670/14 nm滤波片
通道: Pacific Blue, FITC, PE-Cy5通道
荧光显微镜  
激发: DAPI, FITC, Texas Red滤波片
发射: DAPI, FITC, Texas Red滤波片
推荐孔板: 黑色透明

产品说明书

样品分析方案

概述

用测试化合物(200μL/样品)制备细胞

添加Apopxin Green测定溶液

在室温下孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

在Ex / Em = 490 / 525nm(细胞凋亡),550 / 650nm(坏死)和405 / 450nm(健康细胞)

 

操作步骤

1.用Apopxin Green制备和孵育细胞:

1.1用测试化合物将细胞维持一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.2离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

1.3将细胞重悬于200μL测定缓冲液(组分B)中。

1.4将2μLApopxin Green(组分A)加入细胞中。

可选1:将1μL的200X 7-AAD(组分C)加入细胞中用于坏死细胞。

可选2:将100μLDMSO加入到CytoCalcein Violet 450(组分D)的小瓶中,得到200X CytoCalcein Violet 450原液,然后向细胞中加入1μL进行健康细胞染色。

1.5在室温下孵育30至60分钟(避光)。

1.6在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μL测定缓冲液(组分B)以增加体积(参见下面的步骤1.7)。

1.7使用流式细胞仪或荧光显微镜观察Ex / Em = 490 / 525nm处荧光强度的细胞凋亡,550 / 650nm处坏死,以及405/450nm处的健康细胞(参见下面的步骤2或3)。

 

2.使用流式细胞仪分析细胞:

使用FL1通道(Ex / Em = 490/525 nm)定量Apopxin Green结合,并在添加7-AAD时使用FL3通道(Ex / Em = 490/650 nm)测量细胞活力,和/或 当将CytoCalcein Violet 450加入细胞中时,使用Ex / Em = 405 / 450nm。

注意:Apopxin 与贴壁细胞结合的流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而,Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人(见参考文献1和2)。

 

3.使用荧光显微镜分析细胞:

3.1从步骤1.5中移取细胞悬液,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后用测定缓冲液重悬细胞。将细胞添加到载玻片盖玻片或黑色墙壁/透明底96孔微孔板的载玻片上。

注意:对于贴壁细胞,建议直接在盖玻片(或黑墙/透明底96孔微孔板)上培养细胞。与Apopxin Green孵育(步骤1.5)后,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后将测定缓冲液加回到盖玻片(或黑色壁/透明底96孔微孔板)中。在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。在与Apopxin Green温育后,细胞也可以固定在2%甲醛中,并在显微镜下观察。

3.2使用FITC通道在荧光显微镜下用Apopxin Green分析凋亡细胞。当添加7-AAD时使用德克萨斯红色通道测量细胞活力,和当将CytoCalcein Violet 450添加到细胞中时测量/或紫色通道。质膜上的绿色染色表明Apopxin Green与细胞表面的PS结合。

 

数据分析

        在活的非凋亡细胞中,Apopxin Green检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡,其通常为所有细胞的2-6%。在凋亡细胞中,Apopxin Green与磷脂酰丝氨酸结合,磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上,导致染色强度增加。

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光    货号22840

图1.在Jurkat细胞中检测Apopxin Green与磷脂酰丝氨酸的结合活性。 A.在37℃,5%CO 2培养箱中不用(A.蓝色)或用1μM星形孢菌素(A.Red)处理Jurkat细胞5小时,然后加载Apopxin Green 30分钟。使用FL1通道,用FACSCalibur(Becton Dickinson,San Jose,CA)流式细胞仪测量Apopxin Green的荧光强度。 B和C:荧光图像显示活细胞(蓝色,CytoCalcein Violet 450染色),细胞凋亡(绿色,Apopxin Green染色)和Jurkat细胞坏死(红色,7-AAD染色指示)用1μM星形孢菌素处理3小时。用Olympus荧光显微镜分别通过Violet,FITC和TRITC通道拍摄细胞的荧光图像。如上所示,合并来自相同细胞群的每个通道的各个图像。 B:非诱导对照细胞; C:星形孢菌素诱导的细胞的三重染色。

 

参考文献

Anthocyanin-rich blackcurrant extract inhibits proliferation of the MCF10A healthy human breast epithelial cell line through induction of G0/G1 arrest and apoptosis
Authors: Naoki Nanashima, Kayo Horie, Mitsuru Chiba, Manabu Nakano, Hayato Maeda, Toshiya Nakamura
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 6134–6141

Clusterin signals via ApoER2/VLDLR and induces meiosis of male germ cells
Authors: Muhammad Assad Riaz, Angelika Stammler, Mareike Borgers, Lutz Konrad
Journal: American Journal of Translational Research (2017): 1266

Detecting Apoptosis, Autophagy, and Necrosis
Authors: Jack Coleman, Rui Liu, Kathy Wang, Arun Kumar
Journal: Apoptosis Methods in Toxicology (2016): 77–92

 

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Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光 Cat#22843

说明书
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钙离子荧光探针Cal-500 , 钾盐 货号20410-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Cal-500 , 钾盐

钙离子荧光探针Cal-500 , 钾盐

货号 20410 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 2604
Ex (nm) 388 Em (nm) 482
分子量 850.05 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Cal-500 , 钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630提供最强大的均匀荧光测定工具,用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂(如Fluo-3 AM,Fluo-4 AM和Rhod-2 AM)相比,这些钙敏感染料明显更亮,并提供更高的信噪比,大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内,Cal520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割,产生带负电荷的荧光Calbryte 染料,留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时,该受体表示细胞内钙的释放,这显着增加了Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM, Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的最强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中,不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外,Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为完美的钙指示剂,可与绿色荧光蛋白(GFP)细胞系进行多色检测。 此外,Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化,可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发,并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化,可在555 nm激发,并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化,可在594 nm激发,并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯类

1.操作步骤

        Calbryte AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。 DMSO储备溶液可以在-20℃下储存(干燥)并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定三个月。 以下是我们推荐的将Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南,实际应根据您的特定需求进行修改。

a)在无水DMSO中制备2至5mM Calbryte 520AM,Calbryte 590AM或Calbryte 630AM酯的储备溶液。

b)将Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。 在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(0.04%Pluronic®F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。 细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯的水溶性。 各种Pluronic®F-127可从金畔购买。

c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)添加到染料工作溶液中(最终浓度为0.5-1 mM)

注意:各种ReadiUse 丙磺舒(包括水溶性钠盐和稳定溶液)均可从金畔购买。

d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。

e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟,然后将板在室温下再孵育15分钟。

f)用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂(如1 mM丙磺舒)的缓冲液替换染料工作溶液,以去除多余的探针。

g)对于Calbryte 520 AM,在Ex / Em = 490 / 525nm处进行钙测试,对于Calbryte 590 AM,使用540/590nm进行钙测试,对于Calbryte 630 AM,使用610/640nm进行钙测试。

 

2.测量细胞内钙响应

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

3.结论

        由于Ca 2+在生物学中的重要性,已经建立了许多用于分析细胞和/或亚细胞Ca 2+活性机制的技术/方法。 尽管用于分析Ca 2+活性的每种方法都具有优于其他方法的某些优点,但每种方法也存在缺点。 凭借上述出色的性能,我们相信Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630钙检测试剂为各种生物系统中的细胞内钙分析和监测提供了新的强大工具。

        正如可能预测的那样,Ca2 +分析中许多研究人员的兴趣从细胞水平转移到亚细胞水平。 已经发现Ca2 +在整个细胞中均匀分布,并且在多种细胞(例如,卵母细胞,心肌细胞,肝细胞和外分泌细胞)中观察到Ca2 +的细胞内异质性(例如Ca2+ waves and Ca2+ sparks)。 随着20世纪80年代共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)和2000年代先进的酶标仪(如FLIPR,FDSS和NOVOStar专用于细胞内Ca2 +检测)的出现,细胞内Ca2 +的测量显着加速。 共聚焦激光扫描显微镜和最近的多光子显微镜除了测量其浓度外,还允许在亚细胞水平上对细胞内Ca 2+信号传导进行精确的空间和时间分析。

 

参考文献

Behavioral role of the reciprocal inhibition between a pair of Mauthner cells during fast escapes in zebrafish
Authors: Takashi Shimazaki, Masashi Tanimoto, Yoichi Oda, Shin-ichi Higashijima
Journal: Journal of Neuroscience (2019): 1182–1194

Deep Two-Photon Imaging In Vivo with a Red-Shifted Calcium Indicator
Authors: Antje Birkner, Arthur Konnerth
Journal: (2019): 15–26

In Vivo Functional Mapping of a Cortical Column at Single-Neuron Resolution
Authors: Carsten H Tischbirek, Takahiro Noda, Manabu Tohmi, Antje Birkner, Israel Nelken, Arthur Konnerth
Journal: Cell reports (2019): 1319–1326

Multiplex imaging of quantal glutamate release and presynaptic Ca2+ at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: bioRxiv (2019): 336891

Multiplex imaging relates quantal glutamate release to presynaptic Ca 2+ homeostasis at multiple synapses in situ
Authors: Thomas P Jensen, Kaiyu Zheng, Nicholas Cole, Jonathan S Marvin, Loren L Looger, Dmitri A Rusakov
Journal: Nature Communications (2019): 1414

A 3D human triculture system modeling neurodegeneration and neuroinflammation in Alzheimer’s disease
Authors: Joseph Park, Isaac Wetzel, Ian Marriott, Didier Dréau, Carla D’Avanzo, Doo Yeon Kim, Rudolph E Tanzi, Hansang Cho
Journal: Nature neuroscience (2018): 941

Concepts of All-Optical Physiology
Authors: Jan Doering, Ting Fu, Isabelle Arnoux, Albrecht Stroh
Journal: (2018): 153–174

Optical probes for neurobiological sensing and imaging
Authors: Eric H Kim, Gregory Chin, Guoxin Rong, Kira E Poskanzer, Heather A Clark
Journal: Accounts of chemical research (2018): 1023–1032

Optogenetic Control of Voltage-Gated Calcium Channels
Authors: Guolin Ma, Jindou Liu, Yuepeng Ke, Xin Liu, Minyong Li, Fen Wang, Gang Han, Yun Huang, Youjun Wang, Yubin Zhou
Journal: Angewandte Chemie International Edition (2018): 7019–7022

α V β 3 Integrin regulates astrocyte reactivity
Authors: Raúl Lagos-Cabré, Alvaro Alvarez, Milene Kong, Francesca Burgos-Bravo, Areli Cárdenas, Edgardo Rojas-Mancilla, Ramón Pérez-Nunez, Rodrigo Herrera-Molina, Fabiola Rojas, Pascal Schneider
Journal: Journal of Neuroinflammation (2017): 194

 

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Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测 货号22841-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测     货号22841 货号 22841 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 2604
Ex (nm) 503 Em (nm) 527
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞周期的试剂盒,Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具,包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。在正常细胞中,DNA密度的改变与细胞生长、分化、休眠等细胞功能相关。细胞周期通过许多不同的细胞周期调控因子相互作用来调节。这些调控因子的激活因子,可以与DNA结合,开启或关闭那些能引起细胞分裂的蛋白质合成。在这个调控级联反应中,任何一步的错误都会引起细胞非正常地增殖,这是一种潜在的病理状态,例如肿瘤的形成。活细胞研究的潜在应用是对细胞DNA含量的测定和细胞周期进行检测,为了对细胞的生长模式的变化进行检测,对细胞凋亡进行监测,对肿瘤细胞活动和抑制剂基因机制进行研究。Cell Meter荧光法细胞周期检测试剂盒 *绿色荧光 适合于流式细胞检测* 是设计用来检测细胞周期进程和增殖的,在活细胞、经通透性处理的细胞和固定化细胞中使用我们独特的Nuclear Green CCS1对细胞周期进程和增殖进行监测。在所给样品的不同细胞中,有G0/G1, S 和G2/M 期以及细胞凋亡之前的亚-G1期等,可以通过流式细胞仪检测。经过Nuclear Green CC1染色的细胞可以通过流式细胞仪在Ex/Em = 490 nm/520 nm(FL1 通道)进行检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒。

点击查看光谱 

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激光
发射: 530/30nm滤波片
通道: FITC通道

产品说明书

样品实验方案

简要概述

用测试化合物制备细胞,密度为5×105至1×106个细胞/ mL
将2.5μL200XNuclear Green CCS1加入0.5 mL细胞溶液中
在37°C,5%CO2培养箱中孵育30-60分钟
使用FL1通道用流式细胞仪分析细胞((Ex / Em = 490/525 nm)

 

操作步骤

1.对于每个样品,将细胞制备在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中,密度为5×105至1×106个细胞/ mL。注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段所需的时间以诱导细胞凋亡或其他细胞周期功能。

3.将2.5μL的200X Nuclear Green CCS1(组分A)加入处理过的细胞中。

4.将细胞在37°C,5%CO2培养箱中孵育30至60分钟。注意:对于粘附细胞,用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在与Nuclear Green CCS1孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。由于Nuclear Green CCS1是细胞可渗透的,因此不必在DNA染色之前固定细胞。

5.可选:将细胞以1000 rpm离心4分钟,然后将细胞重新悬浮于0.5 mL测定缓冲液(组分B)或您选择的缓冲液中。

6.使用具有FL1通道的流式细胞仪(Ex / Em = 490 / 525nm)监测荧光强度。

 

数据分析

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测     货号22841

图1生长和诺考达唑处理的Jurkat细胞中的DNA谱。 Jurkat细胞在37℃,5%CO2培养箱中不用(A)或用100ng / ml诺考达唑(B)处理24小时,然后用Nuclear Green CCS1染色30分钟。 使用具有FITC通道的ACEA NovoCyte流式细胞仪测量Nuclear Green CCS1的荧光强度。 在生长Jurkat细胞(A)中,用Nuclear Green CCS1染色的核显示出G1,S和G2期。 在Nocodazole处理G2阻滞细胞(B)后,G2细胞频率急剧增加,G1期,S期频率明显下降。

 

参考文献

Cell cycle synchronization of Escherichia coli using the stringent response, with fluorescence labeling assays for DNA content and replication
Authors: Ferullo DJ, Cooper DL, Moore HR, Lovett ST.
Journal: Methods (2009): 8

DNA replication, cell cycle progression and the targeted gene repair reaction
Authors: Engstrom JU, Kmiec EB.
Journal: Cell Cycle (2008): 1402

Morin inhibits the growth of human leukemia HL-60 cells via cell cycle arrest and induction of apoptosis through mitochondria dependent pathway
Authors: Kuo HM, Chang LS, Lin YL, Lu HF, Yang JS, Lee JH, Chung JG.
Journal: Anticancer Res (2007): 395

Direct control of cell cycle gene expression by proto-oncogene product ACTR, and its autoregulation underlies its transforming activity
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Journal: Mol Cell Biol (2006): 3810

Cell cycle markers for live cell analyses
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Dynamic relocalization of hOGG1 during the cell cycle is disrupted in cells harbouring the hOGG1-Cys326 polymorphic variant
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Dynamics of relative chromosome position during the cell cycle
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Journal: Mol Biol Cell (2005): 769

Cell cycle regulation of the murine 8-oxoguanine DNA glycosylase (mOGG1): mOGG1 associates with microtubules during interphase and mitosis
Authors: Conlon KA, Zharkov DO, Berrios M.
Journal: DNA Repair (Amst) (2004): 1601

Description of a flow cytometry approach based on SYBR-14 staining for the assessment of DNA content, cell cycle analysis, and sorting of living normal and neoplastic cells
Authors: Nunez R, Garay N, Villafane C, Bruno A, Lindgren V.
Journal: Exp Mol Pathol (2004): 29

Differential roles of STAT1alpha and STAT1beta in fludarabine-induced cell cycle arrest and apoptosis in human B cells
Authors: Baran-Marszak F, Feuillard J, Najjar I, Le Clorennec C, Bechet JM, Dusanter-Fourt I, Bornkamm GW, Raphael M, Fagard R.
Journal: Blood (2004): 2475

 

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钙离子荧光探针Cal-500 AM 货号20412-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Cal-500 AM

钙离子荧光探针Cal-500 AM

钙离子荧光探针Cal-500  AM    货号20412 货号 20412 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 2604
Ex (nm) 388 Em (nm) 482
分子量 1019.92 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

Cal-520 ,Cal-590 和Cal-630 提供最强大的均匀荧光测定工具,用于检测细胞内钙动员。它们是荧光钙敏感染料,与现有的钙指示剂(如Fluo-3 AM,Fluo-4 AM和Rhod-2 AM)相比,具有显着改善的信噪比和细胞内保留。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM。一旦进入细胞内,Cal 520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM的亲脂性阻断基团被细胞内酯酶切割,产生带负电荷的荧光染料,留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时,该受体表示细胞内钙的释放,这显着增加了Cal-520 ,Cal-590 或Cal-630 的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM成为测量细胞钙的理想指标。高信噪比和更好的细胞内保留使Cal-520 ,Cal-590 或Cal-630 钙测定成为评估GPCR和钙通道靶标以及筛选其激动剂和拮抗剂的有力工具。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外,Cal-520 ,Cal-590 和Cal-630 主要定位于细胞溶胶中,不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外,Cal-590 和Cal-630 的长Ex / Em波长使这些染料成为完美的钙指示剂,与绿色荧光蛋白(GFP)细胞系的多色检测兼容。 此外,Cal-520 ,Cal-590 或Cal-630 钙测定经过优化,可与大多数现有荧光仪器兼容。 Cal-520在488 nm处可以很好地激发,并与FITC滤光片组一起使用。 Cal-590经过优化,可在555 nm激发,并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Cal-590经过优化,可在594 nm激发,并与TexasRed®滤光片组配合使用。光谱和钙结合特性总结如下(参见说明书中的表1)。

点击查看光谱

点击查看实验方案

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器


荧光显微镜  
激发: DAPI
发射: DAPI
推荐孔板: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 400nm
发射: 500nm
cutoff: 470nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式: 底读模式

产品说明书

使用Cal-520 AM,Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ,Cal-590 或Cal-630 AM酯:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b)在实验当天,将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(0.04%Pluronic®F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)加入染料工作溶液中(最终浓度为0.5-1 mM)以减少渗漏去酯化指标。

d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。

e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟,然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意:孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f)用HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如1mM丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以去除多余的探针。

g)在Ex / Em = 490 / 525nm(对于Cal-520 AM),540 / 5000nm(对于Cal-590 AM)或600 / 640nm(对于Cal-630 AM)进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应:

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

说明书
钙离子荧光探针Cal-500 AM.pdf

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测 货号22842-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测     货号22842 货号 22842 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 2604
Ex (nm) 537 Em (nm) 618
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞活力和增殖的工具。有多种参数可用于监测细胞活力和增殖。在正常细胞中,DNA密度根据细胞的生长,分裂,静止执行其正常功能而变化。细胞周期的进程受各种细胞周期调节因子之间复杂的相互作用控制。这些调节剂激活转录因子,该转录因子与DNA结合并开启或关闭导致细胞分裂的蛋白质的产生。这种调节级联中的任何失误都会导致异常细胞增殖,这是许多病理状况(例如肿瘤形成)的基础。活细胞研究的潜在应用是确定细胞DNA含量和细胞周期分布,以检测生长模式的变化,检测凋亡,评估肿瘤细胞的行为和抑制基因的机制。该特定试剂盒旨在使用Nuclear Red CCS1(固定细胞中的细胞周期染色剂)检测细胞周期进程和增殖。染料穿过透化的膜并插入细胞DNA中。试剂盒中提供的RNase降解RNA后,Nuclear Red CCS1的信号强度与DNA含量成正比。可以使用流式细胞仪(FL2通道)检测给定样品中处于G0 / G1,S和G2 / M期的细胞百分比,以及处于凋亡之前的sub-G1期的细胞百分比。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒。

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激光
发射: 610/20nm滤波片
通道: PE-Texas Red通道

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用5×105至1×106cell/ mL的密度制备含测试化合物的细胞
  2. 用70%乙醇固定细胞
  3. 将0.5 µL 100X Nuclear Red CCS1和5 µL RNase A加入0.5 mL细胞溶液中
  4. 在室温下孵育30-60分钟
  5. 使用带有FL2通道的流式细胞仪分析细胞

 

实验步骤

1.用测试化合物处理细胞,以诱导凋亡或其他细胞周期功能。

2.对于每个样品,用0.5 mL PBS制备细胞,密度为5×105至1×106细胞/ mL。

2.1对于贴壁细胞:将细胞用胰蛋白酶消化,悬浮在10%FBS培养基中,离心(1000 rpm,5分钟),然后将沉淀重悬于PBS中。

2.2对于悬浮细胞:将细胞离心(1000 rpm,5分钟),并将沉淀物悬浮在PBS(1 mL)中。 注意:应单独评估每种细胞系,以确定诱导凋亡的最佳细胞密度。

3.用70%乙醇固定细胞:

3.1将0.5 mL细胞悬液吸移至1.2 mL无水乙醇中(最终浓度约为70%)。

3.2在冰上孵育细胞至少2小时(或在-20°C过夜)。在染色之前,细胞可以在-20°C下保存2年。注意:在用单克隆抗体染色细胞表面抗原后,通常将乙醇用于固定,而在用单克隆抗体染色细胞内抗原后,通常将甲醇用于固定。在此过程中,将固定并分析整个细胞。由于仍然存在整个细胞团,因此通常包括使用RNase来消除任何双链RNA。尽管已经对整个细胞进行了分析,但尝试检测与DNA结合的某些细胞内抗原的尝试可能会失败,因为蛋白质会从透化的细胞中漏出(例如绿色荧光蛋白)。在这些情况下,在酒精固定之前,用PBS中的1%低聚甲醛进行短暂的预固定(在4-6°C下10分钟),将有助于将蛋白质保留在细胞中。

4.用Nuclear Red CCS1染色细胞:

4.1以1000 rpm的速度沉淀细胞5分钟,并用冷PBS至少洗涤一次。

4.2将沉淀物悬浮在0.5 mL测定缓冲液(组分C)中。

4.3加入5 µL 100X Nuclear Red CCS1(组分A)和5 µL 100X RNase A(组分B)。

4.4在室温下孵育细胞30至60分钟。 注意:适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.5可选:将细胞以1000 rpm离心5分钟,然后将细胞重悬于0.5 mL检测缓冲液(组分B)或自备缓冲液中。

4.6使用FL2通道(Ex / Em = 490/620 nm),通过流式细胞仪检测荧光强度。 

 

参考文献 

Cell cycle synchronization of Escherichia coli using the stringent response, with fluorescence labeling assays for DNA content and replication
Authors: Ferullo DJ, Cooper DL, Moore HR, Lovett ST.
Journal: Methods (2009): 8

DNA replication, cell cycle progression and the targeted gene repair reaction
Authors: Engstrom JU, Kmiec EB.
Journal: Cell Cycle (2008): 1402

Morin inhibits the growth of human leukemia HL-60 cells via cell cycle arrest and induction of apoptosis through mitochondria dependent pathway
Authors: Kuo HM, Chang LS, Lin YL, Lu HF, Yang JS, Lee JH, Chung JG.
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Direct control of cell cycle gene expression by proto-oncogene product ACTR, and its autoregulation underlies its transforming activity
Authors: Louie MC, Revenko AS, Zou JX, Yao J, Chen HW.
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Cell cycle markers for live cell analyses
Authors: Easwaran HP, Leonhardt H, Cardoso MC.
Journal: Cell Cycle (2005): 453

Dynamic relocalization of hOGG1 during the cell cycle is disrupted in cells harbouring the hOGG1-Cys326 polymorphic variant
Authors: Luna L, Rolseth V, Hildrestr and GA, Otterlei M, Dantzer F, Bjoras M, Seeberg E.
Journal: Nucleic Acids Res (2005): 1813

Dynamics of relative chromosome position during the cell cycle
Authors: Essers J, van Cappellen WA, Theil AF, van Drunen E, Jaspers NG, Hoeijmakers JH, Wyman C, Vermeulen W, Kanaar R.
Journal: Mol Biol Cell (2005): 769

Cell cycle regulation of the murine 8-oxoguanine DNA glycosylase (mOGG1): mOGG1 associates with microtubules during interphase and mitosis
Authors: Conlon KA, Zharkov DO, Berrios M.
Journal: DNA Repair (Amst) (2004): 1601

Description of a flow cytometry approach based on SYBR-14 staining for the assessment of DNA content, cell cycle analysis, and sorting of living normal and neoplastic cells
Authors: Nunez R, Garay N, Villafane C, Bruno A, Lindgren V.
Journal: Exp Mol Pathol (2004): 29

Differential roles of STAT1alpha and STAT1beta in fludarabine-induced cell cycle arrest and apoptosis in human B cells
Authors: Baran-Marszak F, Feuillard J, Najjar I, Le Clorennec C, Bechet JM, Dusanter-Fourt I, Bornkamm GW, Raphael M, Fagard R.
Journal: Blood (2004): 2475

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