Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒

	货号	12520	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 plates	价格	39060
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因检测的试剂盒。β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因。最好的多功能常见报告基因是来自于北美的萤火虫Photinus pyralis的荧光素酶。此酶蛋白的活性不需要进行蛋白质翻译后修饰获得。它在活细胞中高浓度积累不会造成细胞毒性，可以在原核和真核细胞中使用。在ATP、镁离子和氧存在的条件下，萤火虫荧光素酶催化荧光素氧化形成生物荧光。Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒利用与荧光强度相关的公式来定量检测活细胞和细胞抽提物中的荧光素酶。在荧光素酶的催化下，我们的试剂/试剂盒会产生具有强烈荧光的荧光产物。本试剂盒提供所有的必需组分，并且经过优化处理，我们还提供可以用于HTS（高通量筛选）实验方案。本试剂盒具有非常好的灵敏度，可以用于对灵敏度有要求的分析。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒。 

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞（样品）（96孔板是100 µL /孔，384孔板是25 µL /孔）
2.添加等量的萤光素酶工作溶液
3.在室温下孵育10-20分钟
4.检测560 nm处的荧光强度

溶液制备 

1.工作溶液配制

将全部反应缓冲液（组分B）转移到荧光素酶（组分A）的瓶中，并充分混合以制成荧光素酶工作溶液。

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样品操作及分析

1.进行荧光素酶检测：

1.1通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）来用检测化合物处理细胞（或样品）。 对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在5％CO₂培养箱中于37°C孵育一段时间（通常为4小时至过夜）。

1.3每孔荧光素酶工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

1.4避光在室温下孵育平板10-20分钟。

1.5用酶标仪检测荧光强度。

2.建立标准的萤光素酶校准曲线：注意：如果需要计算样品中萤光素酶的绝对量，则应与上述测定法一起生成萤光素酶标准曲线。

2.1使用不含萤光素酶的样品（作为对照）来检测背景发光，在含0.1％BSA的PBS缓冲液中进行一系列萤光素酶稀释液。 注意：通常萤光素酶的浓度从1 pg / mL到1 ng / mL是合适的。

2.2将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的稀释的荧光素酶溶液添加到一个空板中。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的荧光素酶工作溶液。

2.4在避光的条件下，将反应混合物在室温下孵育10-20分钟。

2.5用标准酶标仪记录荧光强度。

2.6生成荧光素酶标准曲线。

参考文献

LncRNA TUBA4B functions as a competitive endogenous RNA to inhibit gastric cancer progression by elevating PTEN via sponging miR-214 and miR-216a/b
Authors: Jianbo Guo, Yan Li, He Duan, Lu Yuan
Journal: Cancer Cell International (2019): 156

Identification of compounds that modulate retinol signaling using a cell-based qHTS assay
Authors: Yanling Chen, Srilatha Sakamuru, Ruili Huang, David H Reese, Menghang Xia
Journal: Toxicology in Vitro (2016): 287–296

Microwave ablation-assisted liver gene transfection in rats
Authors: Ruoyu Jiang, Lingkai Meng, Longhao Sun, Xianghui He, Xiaoyu Liang, Jie Zhang, Zhixiang Zhang
Journal: International Journal of Hyperthermia (2016): 666–672

Activation of relaxin family receptor 1 from different mammalian species by relaxin peptide and small-molecule agonist ML290
Authors: Zaohua Huang, Courtney Myhr, Ross AD Bathgate, Brian A Ho, Amaya Bueno, Xin Hu, Jingbo Xiao, Noel Southall, Elena Barnaeva, Irina U Agoulnik
Journal: Frontiers in endocrinology (2015)

Neuroprotective effect of schizandrin A on oxygen and glucose deprivation/reperfusion-induced cell injury in primary culture of rat cortical neurons
Authors: Cai-Ping Wang, Gui-Cai Li, Yun-Wei Shi, Xiao-Chuan Zhang, Jian-Long Li, Zhi-Wei Wang, Fei Ding, Xin-Miao Liang
Journal: Journal of physiology and biochemistry (2014): 735–747

Discovery of ML367, inhibitor of ATAD5 stabilization
Authors: Jason M Rohde, Ganesha Rai, Yong Jun Choi, Srilatha Sakamuru, Jennifer T Fox, Ruili Huang, Menghang Xia, Kyungjae Myung, Matthew B Boxer, David J Maloney
Journal: (2013)

钙离子荧光探针Cal-590 钾盐

	货号	20519	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	6564
	Ex (nm)	574	Em (nm)	588
	分子量	1123.03	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Cal-590 钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合钙的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离钙浓度的变化。 Rhod-2最常用于红色荧光钙指示剂中。然而，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且具有非常小的细胞钙响应。 Cal-590 已被开发用于改善Rhod-2细胞负载和钙响应，同时保持Rhod-2的光谱波长，使其与TRITC /Cy3®过滤片组兼容。在CHO和HEK细胞中，Cal-590 AM具有比Rhod-2 AM更敏感的细胞钙响应。 Cal-590的光谱与FITC，AlexaFluor®488和GFP的光谱完全分离，使其成为用GFP细胞系或FITC / AlexaFluor®488标记抗体复合细胞内检测的理想钙探针。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal-590 钾盐。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca²⁺缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca²⁺水平。

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

相关产品

Amplite 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒

简要概述

Amplite 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于β-内酰胺酶活性检测的试剂盒，β-内酰胺酶是能够水解β-内酰胺的大家族酶。β-内酰胺环是所有β-内酰胺抗生素中的常见成分，包括青霉素衍生物，头孢菌素，单环内酰胺和碳青霉烯类。通过水解，β-内酰胺酶使β-内酰胺环打开，从而使分子的抗菌性能失活。临床和非临床环境中的细菌通过合成β-内酰胺酶变得越来越对β-内酰胺抗生素产生抗性。为了克服这种抗性，β-内酰胺抗生素通常与β-内酰胺酶抑制剂如克拉维酸一起给予。因此，检测β-内酰胺酶活性对于评估β-内酰胺抗生素以及预防抗生素抗性至关重要。AAT Bioquest的比色β-内酰胺酶活性测定试剂盒提供灵敏的比色测定，用于测量生物样品中的β-内酰胺酶活性。使用Nitrocefin检测β-内酰胺酶活性，其在β-内酰胺酶水解后由黄色变为红色。可以使用吸光度酶标仪通过测量波长490nm至380nm的OD比来进行测定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的β-内酰胺酶活性检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板实验示例

概述

准备β-内酰胺酶测定混合物（50μL）

加入β-内酰胺酶标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30-60分钟

在OD比率为490 / 380nm时监测吸光度增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

操作方案

1.制备β-内酰胺酶标准储备液：

将100μLddH2O加入到β-内酰胺酶标准品（组分C）的小瓶中以制备50mU /mLβ-内酰胺酶标准储备溶液。

注意：未使用的β-内酰胺酶标准储备液应分成一次性等分试样并储存在-20oC。

2.准备β-内酰胺酶标准品的连续稀释液：

2.1将10μLβ-内酰胺酶标准储备液（50 mU / mL，步骤1）加入990 L 1×PBS缓冲液中，生成500μU/mLβ-内酰胺酶标准溶液。

注意：稀释的β-内酰胺酶标准溶液不稳定，应及时使用。

2.2取200μL500μU/mLβ-内酰胺酶标准溶液，在PBS中进行1：2连续稀释，得到约250,125,62.5,31.3,15.6,7.8和0μU/ mL系列稀释的β-内酰胺酶标准品。

2.3如说明书中的表1和2中所述，将含有β-内酰胺酶标准品和含β-内酰胺酶的测试样品的系列稀释液加入到96孔透明底部微量培养板中。

3.准备β-内酰胺酶测定混合物：

将50μL硝基呋喃储备溶液（组分A）加入5mL组分B中，充分混合，制成β-内酰胺酶测定混合物（组分A + B）。

注意：这种β-内酰胺酶测定混合物足以用于一个96孔板。 β-内酰胺酶测定混合物不稳定，每次使用都要新鲜。

4.运行β-内酰胺酶测定：

4.1将50μLβ-内酰胺酶测定混合物（来自步骤3）添加到β-内酰胺酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤2.3），使总体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLβ-内酰胺酶测定混合物。

4.2在室温下孵育反应30-60分钟，避光。

4.3使用吸光度读板仪检测OD比为490/380 nm时的吸光度增加。

参考文献

A nitrocefin-based amperometric assay for the rapid quantification of extended-spectrum beta-lactamase-producing Escherichia coli in wastewaters
Authors: Chantemesse B, Betelli L, Solanas S, Vienney F, Bollache L, Hartmann A, Rochelet M.
Journal: Water Res (2017): 375

Amperometric detection of extended-spectrum beta-lactamase activity: application to the characterization of resistant E. coli strains
Authors: Rochelet M, Solanas S, Betelli L, Neuwirth C, Vienney F, Hartmann A.
Journal: Analyst (2015): 3551

Complete (1)H, (1)(5)N, and (1)(3)C resonance assignments of Bacillus cereus metallo-beta-lactamase and its complex with the inhibitor R-thiomandelic acid
Authors: Karsisiotis AI, Damblon C, Roberts GC.
Journal: Biomol NMR Assign (2014): 313

An altered zinc-binding site confers resistance to a covalent inactivator of New Delhi metallo-beta-lactamase-1 (NDM-1) discovered by high-throughput screening
Authors: Thomas PW, Spicer T, Cammarata M, Brodbelt JS, Hodder P, Fast W.
Journal: Bioorg Med Chem (2013): 3138

Evaluation of phenotypic tests for the detection of AmpC beta-lactamase in clinical isolates of Escherichia coli
Authors: Handa D, Pandey A, Asthana AK, Rawat A, Handa S, Thakuria B.
Journal: Indian J Pathol Microbiol (2013): 135

Horizontal Transfer of Antimicrobial Resistance by Extended-Spectrum beta Lactamase-Producing Enterobacteriaceae
Authors: Vaidya VK.
Journal: J Lab Physicians (2011): 37

Prevalence of bla (CTX M) extended spectrum beta lactamase gene in enterobacteriaceae from critical care patients
Authors: Priyadharsini RI, Kavitha A, Rajan R, Mathavi S, Rajesh KR.
Journal: J Lab Physicians (2011): 80

Virtual screening of AmpC/beta-lactamase as target for antimicrobial resistance in Pseudomonas aeruginosa
Authors: Farmer R, Gautam B, Singh S, Yadav PK, Jain PA.
Journal: Bioinformation (2010): 290

A sensitive coupled HPLC/electrospray mass spectrometry assay for SPM-1 metallo-beta-lactamase inhibitors
Authors: Sanchez PA, Toney JH, Thomas JD, Berger JM.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2009): 170

Fine mapping of the sequence requirements for binding of beta-lactamase inhibitory protein (BLIP) to TEM-1 beta-lactamase using a genetic screen for BLIP function
Authors: Yuan J, Huang W, Chow DC, Palzkill T.
Journal: J Mol Biol (2009): 401

钙离子荧光探针Fluo-5F, AM

	货号	20560	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	10×50 ug	价格	2604
	Ex (nm)	494	Em (nm)	516
	分子量	1100.91	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：20560

产品名称：钙离子荧光探针Fluo-5F, AM

规格：10×50 ug

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：1100.91

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：494

发射波长(nm)：516

产品介绍

钙离子荧光探针Fluo-5F, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Fluo-5F是Fluo-4的类似物，具有较低的钙结合亲和力（Kd =〜2.3 uM），使其适合检测1 µM至1 mM的细胞内钙水平，该水平会饱和Fluo-4的响应。通过将溶解的指示剂直接添加到含有培养细胞的培养皿中，可以在细胞中加载Fluo-5F AM酯。它与氩离子激光源在488 nm处激发兼容，使Fluo-5F可用于共聚焦显微镜，流式细胞仪和微孔板筛选应用。它的激发和发射波长分别为494和516 nm。钙结合后，其荧光强度增加> 100倍。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Fluo-5F, AM。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

相关产品

一氧化氮NO荧光探针 DAQ CAS 1758-68-5

	货号	15220	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	25 mg	价格	1272
	Ex (nm)	352	Em (nm)	580
	分子量	238.24	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：15220

产品名称：一氧化氮NO荧光探针 DAQ

CAS：1758-68-5

规格：25mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：238.24

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：352

发射波长（nm）：580

产品介绍

一氧化氮NO荧光探针 DAQ是美国AAT Bioquest生产的检测一氧化氮的试剂，NO作为一个推定的神经元的递质，如果直接对NO进行检测，可以最清楚的了解神经元的死亡情况。1,2-二氨基蒽醌(DAQ)是一种红色的荧光探针，可以直接用来检测NO，其产物在活细胞和动物中。(DAQ)神经毒性非常小，它不会影响正常的诱发电场电位振幅，也不会影响长时程增强(LTP)感应；与对照相比。DAQ用于直接捕获生物体内神经退行性性变释放的NO。这种非荧光的1,2-二氨基蒽醌注入大鼠的眼睛，这些大鼠由于视觉神经损伤而导致神经节细胞退行性退化。DAQ和NO的反应产物是一个具有红色荧光的三唑。这种基于DAQ对NO进行分析的方法使用非常地便捷，并且可以用于体内和体外许多生命系统。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的一氧化氮NO荧光探针 DAQ。 

参考文献

Floral transition and nitric oxide emission during flower development in Arabidopsis thaliana is affected in nitrate reductase-deficient plants
Authors: Seligman K, Saviani EE, Oliveira HC, Pinto-Maglio CA, Salgado I.
Journal: Plant Cell Physiol (2008): 1112

Spectroscopic studies of 1,2-diaminoanthraquinone (DAQ) as a fluorescent probe for the imaging of nitric oxide in living cells
Authors: Galindo F, Kabir N, Gavrilovic J, Russell DA.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2008): 126

Microbial transformation of amino- and hydroxyanthraquinones by Beauveria bassiana ATCC 7159
Authors: Zhan J, Gunatilaka AA.
Journal: J Nat Prod (2006): 1525

Neuromuscular contacts induce nitric oxide signals in skeletal myotubes in vitro
Authors: Puttmann B, Gerlach EM, Kruger M, Blottner D.
Journal: Neurosignals (2005): 85

Nitric oxide modulates low-Mg2+-induced epileptiform activity in rat hippocampal-entorhinal cortex slices
Authors: Schuchmann S, Albrecht D, Heinemann U, von Bohlen und Halbach O.
Journal: Neurobiol Dis (2002): 96

Spatial nitric oxide imaging using 1,2-diaminoanthraquinone to investigate the involvement of nitric oxide in long-term potentiation in rat brain slices
Authors: von Bohlen und Halbach O, Albrecht D, Heinemann U, Schuchmann S.
Journal: Neuroimage (2002): 633

钙离子荧光探针Fluo-5F, 五钾盐

简要概述

钙离子荧光探针Fluo-5F, 五钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Fluo-5F是Fluo-4的类似物，具有较低的钙结合亲和力（Kd = ~2.3uM），使其适用于检测1μM至1 mM范围内的细胞内钙水平，这将使Fluo-4的反应饱和。。 可以使用贴片移液管或显微注射将细胞物理加载细胞不渗透的Fluo-5F。 更常见的是，通过将溶解的指示剂直接加入含有培养细胞的培养皿中，可以将Fluo-5F AM酯（＃20560）直接加载到活细胞中。 它与氩离子激光源在488 nm激发相容，使Fluo-5F可用于共聚焦显微镜，流式细胞仪和微孔板筛选应用。 它的激发和发射波长分别为494和516 nm。 钙结合后，其荧光强度增加> 100倍。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Fluo-5F, 五钾盐。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用钙指示剂AM酯类

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM 酯的水溶性。 

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终浓度为1）对于丙磺舒而言为-2.5mM，对于磺胺吡喃酮为0.1-0.25mM，以减少脱酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

f） 用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验。

2.测量细胞内钙响应：

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育^ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到最终指示的浓度。

使用钙指示剂盐

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K _d，使用以下等式：

[Ca] = K _d [F – F _min ] / F _max – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，F _min 是不存在钙时的荧光，F _max是钙饱和探针的荧光。解离常数（K _d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca ²⁺结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的K _d值。 通过将加载的细胞暴露于受控的Ca来进行原位校准 在离子载体存在下的²⁺缓冲液，例如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露 于细胞外培养基的受控Ca ²⁺水平。表1列出了一些钙试剂的K _d值供您参考。

使用钙指示剂结合物

        与游离离子指示剂相比，这些相同指示剂的葡聚糖缀合物表现出减少的区室化和低得多的染料渗漏率。由于葡聚糖的分子量，净电荷，标记程度和染料的性质可能影响实验，因此建议研究人员查阅主要文献以获得特定应用的信息。

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

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Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒 红色荧光

	货号	15255	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	571	Em (nm)	584
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测赖氨酸氧化酶的试剂盒。赖氨酰氧化酶是一种细胞外酶，其催化从胶原蛋白和弹性蛋白前体中的赖氨酸残基形成醛。 这些醛具有高反应性，并与其他赖氨酰氧化酶衍生的醛残基或未修饰的赖氨酸残基发生自发的化学反应。 化学反应导致胶原蛋白和弹性蛋白的交联，这对于稳定胶原纤维和成熟弹性蛋白的完整性和弹性是必需的。 生物样品中赖氨酰氧化酶的活性传统上通过使用放射性同位素标记的胶原蛋白或弹性蛋白底物的氚释放终点测定来评估。

Amplite 荧光Lysyl氧化酶检测试剂盒提供灵敏的荧光检测，用于检测赖氨酰氧化酶的活性。 它利用专有的LOX底物，在HRP偶联反应中使用我们的Amplite ADHP底物释放过氧化氢。 该方法允许检测亚ng / mL赖氨酰氧化酶，并且比目前可用的测定灵敏得多。 它消除了某些生物样品中发生的干扰，可以很容易地用于检测细胞提取物或溶液中的赖氨酰氧化酶活性。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒。

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产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备测定反应混合物（50μL）

添加赖氨酰氧化酶标准品或测试样品（50μL）

在37℃孵育10-30分钟

在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备试剂：

注意1：在硫醇如DTT，谷胱甘肽（还原型：GSH）和β-巯基乙醇存在下，Amplite™HRP底物不稳定。浓度高于10μM的硫醇的存在将显着降低测定动态范围。

注意2：某些洗涤剂（如Brij-35，Tween-20和NP40），NADH和NADPH也会干扰检测。

1.1 250X Amplite™HRP底物储备液：将100μLDMSO（组分D）加入到Amplite™HRP底物（组分A）的小瓶中。应及时使用原液; 任何未使用的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环。

1.2 50U / mL辣根过氧化物酶储备溶液：将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备测定反应混合物：

根据说明书中的表格制备测定反应混合物并避光。

3.在上清液中进行赖氨酰氧化酶测定：

3.1将50μL测定反应混合物（来自步骤2）加入到赖氨酰氧化酶标准品，空白对照和测试样品（参见步骤2，表3）的每个孔中，以使总赖氨酰氧化酶测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.2在37℃下孵育反应10至30分钟，避光。

3.3用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

4.对细胞进行赖氨酰氧化酶测定：

Amplite™荧光Lysyl氧化酶检测试剂盒可用于测量细胞中活性赖氨酰氧化酶的释放。 以下是建议的说明，可根据您的特定研究需求进行修改。

4.1在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要活化细胞。 

注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

4.2将50 µL赖氨酰氧化酶工作溶液添加到细胞培养基的每个孔中（来自上一步）和赖氨酰氧化酶标准品的孔中（参见表1）。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL细胞培养基和25μL测定反应混合物。

4.3在37℃下孵育反应10至30分钟，避光。

4.4使用荧光读板仪在Ex / Em = 530至570/590至600 nm（最大Ex / Em = 540/590 nm）下观察荧光增加。

参考文献

Biallelic HEPHL1 variants impair ferroxidase activity and cause an abnormal hair phenotype
Authors: Prashant Sharma, Marie Reichert, Yan Lu, Thomas C Markello, David R Adams, Peter J Steinbach, Brie K Fuqua, Xenia Parisi, Stephen G Kaler, Christopher D Vulpe
Journal: PLoS genetics (2019): e1008143

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Journal: Journal of Bone and Mineral Research (2016)

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钙离子荧光探针Fluo-5N,AM

	货号	20566	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	10×50 ug	价格	2604
	Ex (nm)	494	Em (nm)	516
	分子量	1127.92	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

关键参数

仪器：荧光酶标仪

Ex:490

Em:525

Cutoff:515

推荐孔板：纯黑色

仪器：荧光显微镜

通道：FITC

推荐孔板：黑壁透明底

仪器：流式细胞仪

通道：FITC

产品介绍

钙离子荧光探针Fluo-5N,AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Fluo-5N是Fluo-4的类似物，具有较低的钙结合亲和力（Kd = ~90 uM），使其适用于检测1μM至1 mM范围内的细胞内钙水平，这将使Fluo-4的反应饱和。。 通过将溶解的指示剂直接加入含有培养细胞的培养皿中，可以将Fluo-5N AM酯直接加载到活细胞中。 它与氩离子激光源在488 nm激发相容，使Fluo-5N可用于共聚焦显微镜，流式细胞仪和微孔板筛选应用。 它的激发和发射波长分别为494和516 nm。 钙结合后，其荧光强度增加> 100倍。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Fluo-5N，AM *细胞渗透物*储备溶液。
2.1使用的Fluo-5N，AM *细胞渗透物*的量：1mg
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Fluo-5N，AM *细胞渗透物*与443.29μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMFluo-5N，AM *细胞渗透物* 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1最终井内浓度的Fluo-5N，AM *细胞渗透物*：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
3.3最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μLFluo-5N，AM *细胞渗透物*，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议最终浓度为Fluo-5N，AM *细胞渗透物*为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至：5μMFluo-5N，AM *细胞渗透物*，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 494/516 nm运行实验

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
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Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

相关产品

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

	货号	15257	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	400 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	571	Em (nm)	585
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光是AAT Bioquest研发的检测NAD+/NADH的试剂盒。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。 在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。

传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来进行。 Amplite™荧光总NAD和NADH检测试剂盒为敏感检测NAD和NADH提供了一种便捷的方法。系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH，其显着提高了检测灵敏度。此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显着降低了生物样品引起的干扰。该测定已证明在Ex / Em = 540 / 590nm处具有高灵敏度和低干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite NAD+/NADH检测试剂盒。

Amplite™荧光总NAD和NADH分析试剂盒提供灵敏的一步法分析，可在100μL分析体积（100nM;图1）中检测少至10皮摩尔的NAD（H）。 该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且容易适应自动化而无需分离步骤。 其信号可通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（最大Ex / Em = 540 / 590nm）或吸光度酶标仪在~576nm处容易地读取。

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NAD / NADH反应混合物（50μL）

添加NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟–2小时

监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

操作方法

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NAD / NADH反应混合物：

将10mL NAD / NADH传感器缓冲液（组分B）加入NAD / NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

注意：NAD / NADH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至10μM）：

3.1将10μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到990L PBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL10μMNADH标准溶液进行1：3连续稀释，得到NADH标准品的3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1实心黑色96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

注意：将连续稀释的NADH标准品（0.01μM至10μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>100μM，最终浓度）可能由于NADH传感器（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低。

4.在上清液反应中运行NAD / NADH测定：

4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤3.3）的每个孔中，使得总NADH测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

注1：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

注意2：对于NAD / NADH比率测量，建议使用试剂盒15263。

注意3：对于基于细胞的NAD / NADH测量，建议使用ReadiUse™哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（目录号20012）裂解细胞。

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在固体黑色96孔板中用Amplite TM总NAD和NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时可以检测到低至100nM（10pmol /孔）的NADH，而NADPH没有响应。

试剂应用文献

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase

Authors: Ling, Min and Huang, Peixin and Islam, Shamima and Heruth, Daniel P and Li, Xuanan and Zhang, Li Qin and Li, Ding-You and Hu, Zhaohui and Ye, Shui Qing
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

参考文献

Enhanced 1, 3-propanediol production in Klebsiella pneumoniae by a combined strategy of strengthening the TCA cycle and weakening the glucose effect
Authors: Xinyao Lu, Shunli Ren, Jingzheng Lu, Hong Zong, Jian Song, Bin Zhuge
Journal: Journal of applied microbiology (2018)

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

相关产品

钙离子荧光探针Fluo-5N, 五钾盐

	货号	20567	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 ug	价格	2604
	Ex (nm)	494	Em (nm)	516
	分子量	958.06	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

Cal-520 ，Cal-590 和Cal-630 提供最强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。它们是荧光钙敏感染料，与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，具有显着改善的信噪比和细胞内保留。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM。一旦进入细胞内，Cal 520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM的亲脂性阻断基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM成为测量细胞钙的理想指标。高信噪比和更好的细胞内保留使Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 钙测定成为评估GPCR和钙通道靶标以及筛选其激动剂和拮抗剂的有力工具。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Cal-520 ，Cal-590 和Cal-630 主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Cal-590 和Cal-630 的长Ex / Em波长使这些染料成为完美的钙指示剂，与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系的多色检测兼容。 此外，Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Cal-520在488 nm处可以很好地激发，并与FITC滤光片组一起使用。 Cal-590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Cal-590经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。光谱和钙结合特性总结如下（参见说明书中的表1）。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca²⁺缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca²⁺水平。

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
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Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
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Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
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Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
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Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
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Journal: eLife (2017): e21074

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Journal: Neuroscience Letters (2017)

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