Amplite 荧光法乙酰胆碱检测试剂盒 红色荧光

	货号	11403	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	571	Em (nm)	584
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法乙酰胆碱检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测乙酰胆碱酯酶的试剂盒，胆碱是一种强有机碱，是卵磷脂的组成成分，也存在于神经鞘磷脂之中，是机体可变甲基的一个来源而作用于合成甲基的产物，同时又是乙酰胆碱的前体。乙酰胆碱（AcetylCholine,ACh）是一种神经递质，能特异性的作用于各类胆碱受体，在组织内迅速被胆碱酯酶破坏，其作用广泛，选择性不高。在神经细胞中，乙酰胆碱是由胆碱和乙酰辅酶A在胆碱乙酰移位酶（胆碱乙酰化酶）的催化作用下合成的。胆碱和乙酰胆碱在许多生物学过程中发挥重要的作用。Amplite乙酰胆碱检测试剂盒 *红色荧光* 为定量检测胆碱提供了一种最灵敏的方法。本试剂盒使用Amplite Red对氧化酶介导的酶偶联反应产物胆碱进行定量检测。Amplite Red的红色荧光强度与胆碱的量成比例关系。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法乙酰胆碱检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备ACh工作溶液（50μL）
2.添加ACh标准品或ACh测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度（截止= 570 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中以制备250X Amplite Red原液。

2.乙酰胆碱标准溶液（50 mM）：
将200μLddH₂O加入到乙酰胆碱标准品（组分C）的小瓶中以制备50mM乙酰胆碱标准溶液。

2.标准溶液

乙酰胆碱标准
将20μL50mM乙酰胆碱标准溶液加入到980μL测定缓冲液（组分D）中以产生1000μM乙酰胆碱标准溶液。 取1000μM乙酰胆碱标准品，在分析缓冲液（组分D）中进行1:10，得到100μM乙酰胆碱标准品（AS7）。 取100μM乙酰胆碱标准品（AS7）和1：3连续稀释液，用分析缓冲液（组分D）连续稀释乙酰胆碱标准品（AS6-AS1）。 注意：稀释的乙酰胆碱标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

1.将5mL测定缓冲液（组分D）加入乙酰胆碱探针（组分B）瓶中并充分混合。

2.将20μL250XAmplite Red 储备溶液加入乙酰胆碱探针溶液瓶中，制成乙酰胆碱（ACh）工作溶液。 注意：应立即使用乙酰胆碱（ACh）工作溶液并避光。 测定背景将随着更长的储存时间而增加。

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样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中乙酰胆碱标准品和测试样品的布局。 AS =乙酰胆碱标准品（AS1-AS7,0.14至100μM）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备乙酰胆碱标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：根据需要处理细胞或组织样本。

2.向乙酰胆碱标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL乙酰胆碱（ACh）工作溶液，使总乙酰胆碱测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL乙酰胆碱（ACh）工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 540 / 590nm（截止值= 570nm）的荧光酶标仪监测荧光增加。

参考文献

Effect of Royal Jelly on Mouse Isolated Ileum and Gastrointestinal Motility
Authors: Shino Miyauchi-Wakuda, Satomi Kagota, Kana Maruyama-Fumoto, Hirokazu Wakuda, Shizuo Yamada, Kazumasa Shinozuka
Journal: Journal of Medicinal Food (2019)

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Authors: Henry M Corpuz, Hiroshi Fujii, Soichiro Nakamura, Shigeru Katayama
Journal: Brain Research (2019): 146322

Royal jelly increases peripheral circulation by inducing vasorelaxation through nitric oxide production under healthy conditions
Authors: Yaoyue Liang, Satomi Kagota, Kana Maruyama, Yuri Oonishi, Shino Miyauchi-Wakuda, Yoshihiko Ito, Shizuo Yamada, Kazumasa Shinozuka
Journal: Biomedicine & Pharmacotherapy (2018): 1210–1219

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Journal: Journal of Gastroenterology (2017): 1–12

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Authors: H Elsawy, MA Al-Omair, A Sedky, L Al-Otaibi
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Authors: Eun-Jeong Koh, Kui-Jin Kim, Ji-Hyeon Song, Jia Choi, Hyeon Yong Lee, Do-Hyung Kang, Ho Jin Heo, Boo-Yong Lee
Journal: International Journal of Molecular Sciences (2017): 2401

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活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

产品说明书

96孔板的测定方案

概述

用于溶液测定

1.准备H₂O₂反应混合物（50μL）

2.加入H₂O₂标准品或测试样品（50μL）

3.在室温下孵育10-60分钟

4.在Ex / Em = 490/525 nm （cutoff=515nm）处检测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

用于活细胞检测

1. 在生长培养基中制备细胞
2. 使用 OxiVision Green 过氧化氢探针工作溶液对细胞进行染色并孵育
3. 用测试化合物处理细胞
4. 在 Ex/Em = 490/525 nm (Cutoff = 515nm) 处用底部读取模式检测荧光强度

溶液配制

1. OxiVision Green 过氧化氢探针储备液 (250X)
将 50 μL DMSO（组分 D）加入 OxiVision Green 过氧化氢探针（组分 A）的小瓶中，制成 250X OxiVision Green 过氧化氢探针储备液，注意避光。

2. H2O2 标准溶液（20 mM）
将 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，组分 B）加入 977 μL 的 Assay Buffer（组分 C）中，制成 20 mM H2O2 标准溶液。

注意 稀释的 H2O2 标准溶液不稳定。 未使用的部分应丢弃。

3.H2O2 标准
将 50 μL 20 mM H2O2 标准溶液加入 950 μL Assay Buffer（组分 C）中，得到 1000 μM H2O2 标准溶液。 取 1000 μM H2O2 标准溶液并进行 1:3 的系列稀释，以得到含有测定缓冲液（组分 C）的系列稀释的 H2O2 标准品（HS1 – HS7）。

4.工作溶液配制

将 20 μL 250X OxiVision Green 过氧化氢探针储备液加入 5 mL 检测缓冲液（组分 C）中，制成 OxiVision Green 过氧化氢探针工作溶液。

操作步骤

在上清液反应中检测H2O2
表 1. 纯黑色 96 孔微孔板中 H2O2 标准品和测试样品的布局。 HS= H 2 O 2 标准品（HS1 – HS7，300 至 0.3 μM）； BL=空白控制； TS=测试样品

表2. 每孔试剂组成

1.根据表 1 和表 2 中提供的布局准备 H2O2 标准 (HS)、空白对照 (BL) 和测试样品 (TS)。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂，而不是 50 μL。

2. 将 50 μL OxiVision Green 过氧化氢探针工作液加入 H2O2 标准品、空白对照和测试样品的每个孔中，使H2O2 测定总体积为 100 μL/孔。 对于384孔板，将 25 μL 的 OxiVision Green 过氧化氢探针工作溶液添加到每个孔中，总体积为 50 μL/孔。

3. 在室温下将反应孵育 15 到 30 分钟，避光。

4. 用荧光酶标仪在Ex= 490 ± 10，Em= 520 ± 10 nm（最佳 Ex/Em = 490/525 nm，截止 = 515 nm）检测荧光强度。

在活细胞中进行H2O2检测

1.根据需要培养细胞

2.用 PBS 缓冲液清洗细胞，用 100 μL/孔的 OxiVision Green 过氧化氢探针工作溶液孵育细胞 5 到 60 分钟。 对于 384 孔板，添加 25 μL/孔的 OxiVision Green 过氧化氢探针工作溶液。

3. 在 Ex/Em = 490/525 nm (Cutoff = 515 nm) 下使用荧光酶标仪（底部读取模式）检测荧光增加或使用 FITC 通道通过荧光显微镜成像荧光变化。

参考文献

Bio-inspired redox-cycling antimicrobial film for sustained generation of reactive oxygen species
Authors: Huan Liu, Xue Qu, Eunkyoung Kim, Miao Lei, Kai Dai, Xiaoli Tan, Miao Xu, Jinyang Li, Yangping Liu, Xiaowen Shi
Journal: Biomaterials (2018)

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