日度归档：2022年9月5日

Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian 24 Rxns酶试剂盒

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SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian 24 Rxns ￥30,451 Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns
Clontech 634486 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian 48 Rxns ￥47,045 Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns
Clontech 634487 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian 96 Rxns ￥63,820 Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns
Clontech 634488 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian 192 Rxns ￥114,044 Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns
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05 – 9月 – 2022 – 修饰性PEG

带分子标签的微量样本的链特异RNA-Seq分析
SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian
· 高灵敏度：可以人、大鼠或小鼠来源的250 pg-10 ng的总RNA或10-1000个细胞起始
· 添加UMI：校正来自PCR错误、重复序列以及序列错误的读取
· 用途广泛：能分析质量较差的FFPE、LCM以及cfRNA来源的样本
· 操作简便：仅需要7.5小时即可完成文库构建
· 无缝衔接Illumina测序：直接制备多达192种index的Illumina® -ready文库
 
SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian（Pico v3）设计用于从皮克级总RNA(250 pg-10 ng)中高效制备Illumina测序文库。本试剂盒采用的技术适用于高品质、部分降解及低品质RNA（如来自于FFPE或LCM样品）。升级产品与原有SMARTer 皮克级产品相比，提升了在所有Illumina测序平台的测序性能，并且还添加特别的分子条形码（UMI），从而可以消除PCR错误或duplication以及测序偏向。
 
本试剂盒采用一体化操作流程，保留了链来源信息，在反转录和PCR扩增过程中就可以添加indexes和接头。整个流程，包括文库构建及纯化仅需约7.5小时。
该试剂盒包含SMARTer RNA Unique Dual Index Kit – 24U (Code No. 634451)。另外也可以与SMARTer RNA Unique Dual Index Kits (Code No. 634452 & 634457，可单独购买）搭配使用，最多可构建多达192种indexes文库。
 
Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns
图1. SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian技术流程
 
Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns
图2. 使用SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian制备文库的结构特征
 
接头序列包含：通过PCR 1反应添加的可以与Illumina流动池结合生成簇的P7、P5序列（P7以淡蓝色表示，P5以红色表示），用于区分单个lane上多个样本的Index序列（Index 1 [i7] 序列连接在P7端，Index 2 [i5]连接在P5端）。并且还包括识别测序引物区域的Read 2（紫色）和 Read 1（绿色）。通过Read 1起始得到的原始RNA的反义链序列，Read 2起始获得的是原始RNA的正义链序列。其中，通过Read 2起始时，前8个碱基是UMI（深紫色），UMI之后的3个碱基（XXX）是Pico v3 Adapter衍生的序列。
 
Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns
表 1. 不同样本起始量的分析结果。
 
以0.5、1、5和10 ng人肺FFPE组织提取的总RNA起始，采用SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian制备RNA-Seq文库（均做两个重复），并使用NextSeq 500进行测序。
 
 
Clontech 634485 SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 - Pico Input Mammalian 24 Rxns
Technote：
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SMARTer Stranded RNA-Seq Pico v3:
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Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒 货号13815-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒

Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒

Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒 货号13815 货号 13815 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 3924
Ex (nm) 575 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测乳酸的试剂盒，乳酸是手性的并且具有两种光学异构体：L-乳酸和D-乳酸。在代谢和运动过程中，乳酸盐通过乳酸脱氢酶（LDH）不断从丙酮酸产生。 监测乳酸水平是评估组织需氧量和利用率之间平衡的好方法，在研究细胞和动物生理学时非常有用。D-乳酸不被哺乳动物代谢，其从体内消除主要取决于肾脏排泄。D-和L-乳酸存在于许多发酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉类和鱼类。D-和L-乳酸含量是食品的质量指标，如鸡蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。血液中异常高浓度的D-乳酸通常是胃肠道中细菌过度生长的反映。

AAT Bioquest的Amplite 乳酸盐检测试剂盒（L＃乳酸检测Cat＃13814和13815，D-lactate检测Cat＃13810和13811）提供荧光和吸光度检测方法，用于检测L-乳酸盐或D-乳酸盐。生物样品，如血清，血浆，尿液，以及细胞培养样品。在酶偶联测定中，乳酸与NADH成比例相关，其通过生色NADH传感器特异性监测。通过吸光度酶标仪在~575nm或~55075nm / A605nm的吸光度比下可以容易地读取信号，以提高测定灵敏度。使用此Colorimetric Amplite L-乳酸测定试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测到低至4μM的L-乳酸。它应用广泛，可以很容易地适用于需要测量L-乳酸的各种应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒。

 

适用仪器

光吸收酶标仪  
吸收： 570/605nm
推荐孔板： 透明底板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

制备L-乳酸测定混合物（50μL）

加入L-乳酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

 

操作方法

1.准备NAD储备溶液（100X）：

向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100×NAD储备溶液。

 

2.准备L-乳酸盐储备液：

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入L-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：未使用的L-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

3.准备L-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：

3.1将10μLL-乳酸盐储备液（来自步骤2）加入990L PBS缓冲液中，以产生1mM L-乳酸盐标准溶液。

注意：稀释的L-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM L-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到L-Lactate标准品的300,100,30,10,3,1和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2中所述，将L-乳酸盐标准品和含L-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微孔板中。

 

4.制备L-乳酸测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中。

4.2将50μLNAD储备溶液（100X，来自步骤1）加入到组分A的瓶子中（来自步骤4.1），并充分混合。

注意：这种L-乳酸盐测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的L-乳酸盐测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

5.运行L-乳酸测定：

5.1将50μLL-乳酸盐测定混合物（来自步骤4.2）添加至L-乳酸盐标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中以使得总L-乳酸盐测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，在每个孔中加入25μL样品和25μLL-乳酸盐测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。

 

参考文献

Exploring the Probiotic and Compound Feed Fermentative Applications of Lactobacillus plantarum SK1305 Isolated from Korean Green Chili Pickled Pepper
Authors: Kai-Min Niu, Damini Kothari, Sang-Buem Cho, Sung-Gu Han, In-Geun Song, Sam-Churl Kim, Soo-Ki Kim
Journal: Probiotics and Antimicrobial Proteins (2018): 1–12

Hypoxia induces lactate secretion and glycolytic efflux by downregulating mitochondrial pyruvate carrier levels in human umbilical vein endothelial cells
Authors: Dong Wang, Qingjie Wang, Gaoliang Yan, Yong Qiao, Boqian Zhu, Bo Liu, Chengchun Tang
Journal: Molecular medicine reports (2018)

Arenobufagin inhibits prostate cancer epithelial-mesenchymal transition and metastasis by down-regulating β-catenin
Authors: Liping Chen, Weiqian Mai, Minfeng Chen, Jianyang Hu, Zhenjian Zhuo, Xueping Lei, Lijuan Deng, Junshan Liu, Nan Yao, Maohua Huang
Journal: Pharmacological Research (2017)

Fibroblast Activation Protein Alpha-Activated Tripeptide Bufadienolide Anti-tumor Prodrug with Reduced Cardiotoxicity
Authors: Li-Juan Deng, Long-Hai Wang, Cheng-Kang Peng, Yi-Bin Li, Mao-Hua Huang, Min-Feng Chen, Xue-Ping Lei, Ming Qi, Yun Cen, Wen-Cai Ye
Journal: Journal of Medicinal Chemistry (2017)

Neuronal Culture Microenvironments Determine Preferences in Bioenergetic Pathway Use
Authors: Juliane Sünwoldt, Bert Bosche, Andreas Meisel, Philipp Mergenthaler
Journal: Frontiers in Molecular Neuroscience (2017): 305

The use of KnockOut serum replacement (KSR) in three dimentional rat testicular cells co-culture model: An improved male reproductive toxicity testing system
Authors: Xiaofang Zhang, Lei Wang, Xiaodong Zhang, Lijun Ren, Wenjing Shi, Yijun Tian, Jiangbo Zhu, Tianbao Zhang
Journal: Food and Chemical Toxicology (2017)

High glucose and interleukin 1β-induced apoptosis in human umbilical vein endothelial cells involves in down-regulation of monocarboxylate transporter 4
Authors: Dong Wang, Qingjie Wang, Gaoliang Yan, Yong Qiao, Ling Sun, Boqian Zhu, Chengchun Tang, Yuchun Gu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 607–614

Intracellular ATP decrease mediates NLRP3 inflammasome activation upon nigericin and crystal stimulation
Authors: Johji Nomura, Alexander So, Mizuho Tamura, Nathalie Busso
Journal: The Journal of Immunology (2015): 5718–5724

 

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产品名称 货号
Amplite 比色法D-乳酸检测试剂盒 Cat#13811
Amplite 比色法L-丙氨酸检测试剂盒 Cat#13826
Amplite 荧光法L-乳酸检测试剂盒 Cat#13814

说明书
Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒.pdf

T7 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 ) 货 号 #C2566H-NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

T7 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )                              收藏

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#C2566H
20 x 0.05 ml
3,429.00
无
无
无
无
无

#C2566I
6 x 0.2 ml
2,599.00
无
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T7 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

 

单独出售的组分

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml . . . . . . . . ¥939

优点

 BL21 源增强型菌株
 最常用的 T7 表达菌株
 菌落快速培养
 无动物来源产品

概述

为 BL21 源增强型菌株，用于 T7 表达。

基因型

fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10– TetS)endA1 Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• 在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶，无 λ 前噬菌体
• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
• 不受限于 DNA 是否甲基化

转化效率

高效级：0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体（fhuA2）、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

silane-PEG-NCO 40k 硅烷聚乙二醇异氰酸 分子量MW 40000

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上海金畔生物科技有限公司提供silane-PEG-NCO 40k 硅烷聚乙二醇异氰酸 分子量MW 40000

品牌：
货号：JPB-05154
中文名：硅烷聚乙二醇异氰酸 分子量MW 40000
英文名：silane-PEG-NCO 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克

更多产品，更多优惠，请联系我们！
订货热线：15221999938
qq号：2743691513
金畔博客：www.jinpanbio.cn
Email：sales@jinpanbio.com

Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit – Pico Input Mammalian 12 Rxns酶试剂盒

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SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit – Pico Input Mammalian 12 Rxns ￥15,684 Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
Clontech 635006 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit – Pico Input Mammalian 48 Rxns ￥46,033 Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
Clontech 635007 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit – Pico Input Mammalian 96 Rxns ￥63,435 Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
Clontech 634411 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian 12 Rxns ￥12,881 Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
Clontech 634412 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian 48 Rxns ￥43,794 Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
Clontech 634413 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian 96 Rxns ￥57,613 Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
Clontech 634414 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian 192 Rxns ￥103,664 Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
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SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input
Mammalian以皮克级总RNA构建Illumina链特性RNA-seq文库
· 皮克级样品起始—可以250 pg-10 ng人，小鼠或大鼠总RNA起始
· 用途广泛—可以不同品质RNA（包括FFPE/LCM样品及游离RNA）制备文库，获得高重复再现数据
· 性能提升-不增加PhiX也可获得较高的簇通过过滤百分比（FP%），识别更多转录本，重复更少
· 保留链来源信息—转录本链来源信息识别准确度高
· 快速，一体化流程—整体流程只需~6 h ，改良了buffer配方，缩短了文库纯化时间
· 无缝衔接Illumina测序—直接制备多达96种index的 Illumina®-ready文库
 
SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian设计用于从皮克级总RNA(250 pg–10 ng)中高效制备Illumina测序文库。本试剂中采用的技术适用于高品质，部分降解及低品质RNA（如来自于FFPE或LCM样品）。本试剂是一体化操作流程，保留了链来源信息，并且不需要下游文库制备，在反转录和PCR扩增过程中就可以添加indexes和接头。升级产品与原有SMARTer 皮克级产品相比，提升了在所有Illumina测序平台的测序性能，并且文库纯化操作更加方便。
核糖体RNA在总RNA中占有很高的比重（~90%）。在制备文库前从总RNA中去除掉这些大量的RNA，有利于降低测序成本，提高统计数据的比对比率。但是在以微量样品起始时，如果一开始就从总RNA中去除rRNA，会造成纯化后的起始样品太少而不能制备高品质测序文库，本试剂采用专有的特异针对哺乳动物rRNA和部分线粒体RNA的探针去除核糖体cDNA（来源于核糖体RNA的cDNA片段）。采用本试剂制备的文库与前代试剂制备的文库接头配置不同，即使是使用基于双通道SBS技术的Illumina平台如NextSeq®， MiniSeq™， 和 HiSeq® 3000/4000测序时，不需要添加大量PhiX也可以获得高比例的簇通过过滤百分比(%PF)。每个run可以获得更多的生物学相关测序reads，这又反过来减少了测序成本。采用Pico v2 Kit同样可以获得更多的特异转录本，更低的rRNA、mtRNA比对率和重复率。此外，Pico v2 Kit包含了一种新的PCR buffer，提高了文库纯化效率。
试剂盒提供12，48，96和192次反应规格。高通量版本试剂 (Code No. 634413,634414) 包含12种反向引物，8种正向引物，最多可以构建96种indexes文库。包括文库构建及纯化的整体流程只需~6 h。
 
不同样品起始量解决方案：
· 10-100 ng 总RNA, 推荐使用 SMARTer Stranded Total RNA Sample Prep Kit – Low Input Mammalian
· 100 ng-1 μg总RNA, 推荐使用SMARTer Stranded Total RNA Sample Prep Kit – HI Mammalian
 
Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
图1. SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian技术流程
 
Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
图2. SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian提高了通过过滤百分比（FP%）。如图所示，分别采用Pico v1 或Pico v2制备文库并使用NextSeq 500 或 MiniSeq平台测序。图中，蓝色图框表示未过滤（原始）reads的簇密度分布，绿色图框表示通过过滤reads的簇密度分布。 图中显示了通过过滤的reads数（以百万计）和每个run的%PF。
 
Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
图3. 新的SeqAmp CB PCR buffer利于磁珠-沉淀物形成。Pico v2中的PCR buffer经过重新设计可以更快、更紧密的形成磁珠-沉淀物。经过磁力分离后，在新的SeqAmp CB buffer（右）中的沉淀物比原来PCR buffer（左）中的沉淀物更紧密。紧密的沉淀物比松散的沉淀物更容易干燥，易于重悬。
 
Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit - Pico Input Mammalian 12 Rxns
图4. SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian 提升了灵敏度和重复再现性。上图为以1 ng和10 ng人肺FFPE来源的总RNA起始，分别采用Pico v1和Pico v2构建文库，NextSeq 500测序数据。Panel A. 以1 ng和10 ng样品起始，分别采用Pico v1和v2构建文库的测序数据。Panel B. 不同样品起始量之间，转录本表达水平的比较分析。
 
Technote：
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SMARTer Stranded RNA-Seq PICO：
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延伸阅读
病原微生物NGS解决方案来了，您准备好项目了吗？
Takara真香推荐—简便准确好用的液态活检解决方案之游离RNA篇
『石以砥焉，化钝为利！』Takara匠心打磨FFPE样本分析利器
 
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Amplite 荧光法丙酮酸检测试剂盒 货号13820-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法丙酮酸检测试剂盒

Amplite 荧光法丙酮酸检测试剂盒

Amplite 荧光法丙酮酸检测试剂盒 货号13820 货号 13820 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 3924
Ex (nm) 571 Em (nm) 585
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法丙酮酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙酮酸的试剂盒，丙酮酸是细胞内代谢途径中的重要化合物。它来源于称为糖酵解的葡萄糖代谢。一分子葡萄糖分解成两个丙酮酸分子，通过两种方式之一提供活细胞能量。当氧气存在时（有氧呼吸），丙酮酸被丙酮酸脱氢酶转化为乙酰-CoA，丙酮酸脱氢酶进入柠檬酸循环（也称为三羧酸循环）产生ATP。当氧气不足时，丙酮酸盐会厌氧分解，在动物体内产生乳酸盐，在植物和微生物体内产生乙醇。丙酮酸盐的异常水平或乳酸盐与丙酮酸盐的浓度比可能与肝脏疾病或代谢紊乱有关，并且是患者临床和其他实验室研究中的一种诊断测量。 AAT Bioquest的Amplite 比色丙酮酸测定试剂盒提供了一种灵敏的比色测定法，用于定量样品中的丙酮酸。它利用释放过氧化氢的酶偶联反应，可通过吸光度酶标仪在575 nm处通过丙酮酸盐传感器检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法丙酮酸检测试剂盒。 

 

适用仪器

荧光酶标仪  
激发： 540nm
发射： 590nm
cutoff： 570nm
推荐孔板： 黑色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品（50 µL）以及连续稀释的丙酮酸标准液（50 µL）
2.加入等体积的丙酮酸工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor 丙酮酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液。

1.2 丙酮酸标准溶液（1 mM）：
将10 µL 100 mM丙酮酸盐（组分D）添加到990 µL PBS（pH 7）中，得到1 mM丙酮酸盐溶液。

 

2.标准溶液

丙酮酸标准
将100 µL的1 mM丙酮酸标准溶液加入900 µL PBS中制成100 µM丙酮酸溶液（PS7）。 然后执行1：3连续稀释以获得连续稀释的丙酮酸标准品（PS6-PS1）。

 

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合1瓶（组分B1）中； 混合均匀。

3.2 将100μLddH2O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中； 混合均匀。

3.3 将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix 2和25 uL的200X Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中。 混合均匀。 注意：丙酮酸工作溶液不稳定，应立即使用，避免光照。

 

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中丙酮酸标准品和测试样品的布局。 PS =丙酮酸标准溶液（PS1-PS7，0.1至100 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

BL BL TS TS
PS1 PS1 … …
PS2 PS2 … …
PS3 PS3    
PS4 PS4    
PS5 PS5    
PS6 PS6    
PS7 PS7    

表2.每个孔的试剂组成

孔 容积 试剂
PS1-PS7 50ul 连续稀释（0.1至100 µM）
BL 50ul PBS
TS 50ul 样品

1.根据表1和表2提供的布局，将丙酮酸标准液（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备成黑色的96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是50 µL。

2.在丙酮标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL丙酮酸工作溶液，使丙酮酸测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。 在6.5至7.0的pH值下运行丙酮酸盐测定。

3.将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止：570 nm）下监测荧光的增加。

 

参考文献

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Detection of inflammatory arthritis by using hyperpolarized 13C-pyruvate with MR imaging and spectroscopy
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Amplex UltraRed enhances the sensitivity of fluorimetric pyruvate detection
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Journal: Anal Biochem (2010): 123

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Faecal tumour pyruvate kinase M2: not a good marker for the detection of colorectal adenomas
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Hyperpolarized 13C lactate, pyruvate, and alanine: noninvasive biomarkers for prostate cancer detection and grading
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Sensitivity and specificity of faecal tumour M2 pyruvate kinase for detection of colorectal adenomas in a large screening study
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Detection of pyruvate dehydrogenase E1 alpha-subunit deficiencies in females by immunohistochemical demonstration of mosaicism in cultured fibroblasts
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Tumor M2-pyruvate kinase in lung cancer patients: immunohistochemical detection and disease monitoring
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Measurement of pyruvate in blood by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection
Authors: Wulkan RW, Verwers R, Neele M, Mantel MJ.
Journal: Ann Clin Biochem (2001): 554

 

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