Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法)

	货号	15258	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	400 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	575	Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）是AAT Bioquest研发的检测NAD+/NADH的试剂盒。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。 NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。 在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。 通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。

传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来进行。 Amplite™荧光总NAD和NADH检测试剂盒为敏感检测NAD和NADH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH，其显着提高了检测灵敏度。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显着降低了生物样品引起的干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite NAD+/NADH检测试剂盒。 

Amplite 比色NAD / NADH检测试剂盒提供灵敏的一步法检测，可在100μL检测体积（300 nM;图1）中检测少至30皮摩尔的NAD（H）。 可以以方便的96孔或384孔板进行检测。 其信号可通过光吸收酶标仪在~575nm或~570nm至~605nm的吸光度比下轻松读取，以提高测定灵敏度。

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NAD / NADH反应混合物（50μL）

添加NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟–2小时

检测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

操作方法

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NAD / NADH反应混合物：

将10mL NAD / NADH缓冲液（组分B）加入NAD / NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

注意：NAD / NADH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至10μM）：

3.1将10μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到990L PBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL 10μM NADH标准溶液进行1：3连续稀释，得到NADH标准品的3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入到黑色96孔板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1黑色96孔板中NADH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

注意：将连续稀释的NADH标准品（0.01μM至10μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>100μM，最终浓度）可能由于NADH探针（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低。

4.在上清液反应中运行NAD / NADH测定：

4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤3.3）的每个孔中，使得总NADH测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光酶标仪检测荧光。

注1：也可将板的混合物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

注意2：对于NAD / NADH比率测量，建议使用试剂盒15263。

注意3：对于细胞的NAD / NADH检测，建议使用ReadiUse 哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（货号：20012）裂解细胞。

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在黑色96孔板中用Amplite 总NAD和NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时可以检测到低至100nM（10pmol /孔）的NADH，而NADPH没有响应。

试剂应用文献

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Han, Xiaojuan and Tai, Haoran and Wang, Xiaobo and Wang, Zhe and Zhou, Jiao and Wei, Xiawei and Ding, Yi and Gong, Hui and Mo, Chunfen and Zhang, Jie and others
Journal: Aging cell (2016): 416–427

参考文献

Reduction of renal tubular injury with a RAGE inhibitor FPS-ZM1, valsartan and their combination in streptozotocin-induced diabetes in the rat
Authors: Davoud Sanajou, Amir Ghorbani Haghjo, Hassan Argani, Leila Roshangar, Nadereh Rashtchizadeh, Saeed Nazari Soltan Ahmad, Zahra Ashrafi-Jigheh, Saman Bahrambeigi, Farshid Asiaee, Jalil Rashedi
Journal: European journal of pharmacology (2019): 40–48

Functional analysis of the mitochondrial alternative oxidase gene (aox1) from Aspergillus niger CGMCC 10142 and its effects on citric acid production
Authors: Li Hou, Ling Liu, Hongfei Zhang, Lin Zhang, Lan Zhang, Jian Zhang, Qiang Gao, Depei Wang
Journal: Applied microbiology and biotechnology (2018): 1–15

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

相关产品

钙离子荧光探针Cal Red R525/650 potassium salt

简要概述

细胞内钙通量测定法是监测GPCR和钙通道活性的一种广泛使用的方法。为了定量细胞内钙浓度，优选比例荧光荧光指示剂，因为该比率与钙浓度直接相关并且与细胞数和染料负载浓度无关。但是，最流行的比例钙指示剂（例如Fura-2和Indo-1）具有一定的局限性，例如灵敏度较低，紫外线激发，并且与HTS筛选滤光片组不兼容。Cal Red R525 / 650已开发为新型的488 nm可激发比例荧光钙指示剂。Cal Red R525 / 650在488 nm处受到很好的激发，在525 nm和650 nm处有两次发射。结合钙后 当在488 nm激发时，Cal Red R525 / 650的发射信号在525 nm处增加，在650 nm处降低。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容，对细胞的损害最小，使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的强大工具。

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca²⁺缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca²⁺水平。

参考文献

Ratiometric analysis of fura red by flow cytometry: a technique for monitoring intracellular calcium flux in primary cell subsets
Authors: Wendt ER, Ferry H, Greaves DR, Keshav S.
Journal: PLoS One (2015): e0119532

A flow cytometric comparison of Indo-1 to fluo-3 and Fura Red excited with low power lasers for detecting Ca(2+) flux
Authors: Bailey S, Macardle PJ.
Journal: J Immunol Methods (2006): 220

Use of co-loaded Fluo-3 and Fura Red fluorescent indicators for studying the cytosolic Ca(2+)concentrations distribution in living plant tissue
Authors: Walczysko P, Wagner E, Albrechtova JT.
Journal: Cell Calcium (2000): 23

[Monitoring calcium in outer hair cells with confocal microscopy and fluorescence ratios of fluo-3 and fura-red]
Authors: Su ZL, Li N, Sun YR, Yang J, Wang IM, Jiang SC.
Journal: Shi Yan Sheng Wu Xue Bao (1998): 323

Calcium transient alternans in blood-perfused ischemic hearts: observations with fluorescent indicator fura red
Authors: Wu Y, Clusin WT.
Journal: Am J Physiol (1997): H2161

Problems associated with using Fura-2 to measure free intracellular calcium concentrations in human red blood cells
Authors: Blackwood AM, Sagnella GA, Markandu ND, MacGregor GA.
Journal: J Hum Hypertens (1997): 601

IgG-induced Ca2+ oscillations in differentiated U937 cells; a study using laser scanning confocal microscopy and co-loaded fluo-3 and fura-red fluorescent probes
Authors: Floto RA, Mahaut-Smith MP, Somasundaram B, Allen JM.
Journal: Cell Calcium (1995): 377

Improved sensitivity in flow cytometric intracellular ionized calcium measurement using fluo-3/Fura Red fluorescence ratios
Authors: Novak EJ, Rabinovitch PS.
Journal: Cytometry (1994): 135

Localization of calcium entry through calcium channels in olfactory receptor neurones using a laser scanning microscope and the calcium indicator dyes Fluo-3 and Fura-Red
Authors: Schild D, Jung A, Schultens HA.
Journal: Cell Calcium (1994): 341

The distribution of intracellular calcium chelator (fura-2) in a population of intact human red cells
Authors: Lew VL, Etzion Z, Bookchin RM, daCosta R, Vaananen H, Sassaroli M, Eisinger J.
Journal: Biochim Biophys Acta (1993): 152

Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

	货号	15259	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	400 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	571	Em (nm)	585
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光是AAT Bioquest研发的检测NADP+/NADPH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。

现有的NADP / NADPH测定通过吸收在UV范围内进行。该测定具有低灵敏度和高干扰。这种Amplite™荧光总NADP和NADPH检测试剂盒为敏感检测NADP和NADPH提供了一种便捷的方法。系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NADP / NADPH，其显着提高了检测灵敏度。此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显著降低了生物样品的干扰。无需从样品混合物中纯化NADP / NADPH。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒。

Amplite™荧光总NADP和NADPH分析试剂盒提供灵敏的一步法分析，可在100μL分析体积（10 nM;图1）中检测少至1皮摩尔的NADP（H）。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。红色发射时间越长，生物样品的自发荧光干扰越小。

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NADP / NADPH反应混合物（50μL）

加入NADPH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟–2小时

监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作方法

1.准备NADPH原液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADPH储备溶液。

注意：未使用的NADPH原液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.制备NADP / NADPH反应混合物：

将10mL NADP / NADPH传感器缓冲液（组分B）加入NADP / NADPH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

注意：这种NADP / NADPH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NADP / NADPH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADPH标准品的连续稀释液（0至10μM）：

3.1将10μLNADPH储备溶液（来自步骤1）加入990L PBS缓冲液中以产生10M（10pmol / L）NADPH标准溶液。

注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL10μMNADPH标准溶液进行1：3连续稀释，得到NADPH标准品的3,1,0.3,0.1,0.03,0.01,0.003和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2中所述，将含有NADPH标准品和含NADP / NADPH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1.实心黑色96孔微孔板中NADPH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADPH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

注意：将连续稀释的NADPH标准品从0.003μM至3μM加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADPH（例如，>100μM，最终浓度）可能由于NADPH传感器（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低。

4.在上清液中运行NADP / NADPH测定：

4.1将50μLNADPH反应混合物（来自步骤2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADPH测定体积为100μL/孔

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADPH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3在Ex / Em = 530-570 / 590-600nm（最佳540 / 590nm）下用荧光板读数器监测荧光增加。

注意1：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

注意2：对于NADP / NADPH比率测量，建议使用Cat#15264。

注意3：对于基于细胞的NADP / NADPH测量，建议使用ReadiUse™哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（Cat#20012）裂解细胞。

数据分析

空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从NADPH反应孔的值中减去。 NADPH标准曲线如图1所示。

注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在黑色96孔板中用Amplite™荧光总NADP和NADPH测定试剂盒测量NADPH剂量反应。在孵育30分钟（n = 3）时可以检测到低至10nM（1pmol /孔）的NADPH，而NADH没有响应。

参考文献

Cancer-specific chemotherapeutic strategy based on the vitamin K3 mediated ROS regenerative feedback and visualized drug release in vivo
Authors: Gang-Gang Yang, Hang Zhang, Dong-Yang Zhang, Qian Cao, Jing Yang, Liang-Nian Ji, Zong-Wan Mao
Journal: Biomaterials (2018)

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

相关产品

钙离子荧光探针Cal Red R525/650 AM

简要概述

产品基本信息

货号：20590

产品名称：钙离子荧光探针Cal Red R525/650 AM

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~1100

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：492

发射波长(nm)：650

产品介绍

钙离子荧光探针Cal Red R525/650 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，细胞内钙通量测定是一种广泛使用的监测GPCR和钙通道活性的方法。为了量化细胞内钙浓度，比率荧光钙指示剂是优选的，因为该比例与钙浓度直接相关并且与细胞数量和染料加载浓度无关。然而，最流行的比率钙指示剂（例如Fura-2和Indo-1）具有某些限制，例如较低的灵敏度，UV激发，并且与HTS筛选过滤器组不兼容。 Cal Red™R525 / 650已被开发为新的488 nm可激发的比率荧光钙指示剂。 Cal Red™R525 / 650是弱荧光的，一旦进入细胞，亲脂性AM阻断基团被细胞内酯酶切割，导致带负电荷的荧光染料在细胞中保留良好，激发接近488 nm，两次发射在525 nm处， 650纳米。当用生物活性化合物刺激细胞时，该受体启动细胞内钙的释放，其被Cal Red TM R525 / 650螯合。当在488nm激发时，发射信号在525nm处增加并在650nm处减小。 Cal Red™R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容，对细胞的损伤最小，使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的有力工具。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal Red R525/650 AM。 

点击查看实验方案

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

参考文献

Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒(比色法)

简要概述

Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒（比色法）是AAT Bioquest研发的检测NADP+/NADPH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来完成。该方法具有低灵敏度和高干扰，因为该测定在需要昂贵的石英微孔板的UV范围内进行。

Amplite™比色总NADP和NADPH检测试剂盒为敏感检测NADP和NADPH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NADP / NADPH，其显着提高了检测灵敏度。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在较长波长范围内运行，这显著降低了来自生物样品的干扰。 该实验证明了高灵敏度和低干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒。

Amplite™比色总NADP和NADPH分析试剂盒提供灵敏的一步法分析，可在100μL分析体积（100 nM）内检测少至10皮摩尔的NADP（H）。 该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且容易适应自动化而无需分离步骤。 其信号可通过吸光度酶标仪在~575nm或~570nm至~605nm的吸光度比下轻松读取，以提高测定灵敏度。 如果需要更高的灵敏度，建议使用Cat#15259或15264。

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NADP / NADPH反应混合物（50μL）

加入NADPH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟–2小时

监测575±5nm处的吸光度强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作方法

1.准备NADPH原液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADPH储备溶液。

注意：未使用的NADPH原液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.制备NADP / NADPH反应混合物：

将10mL NADP / NADPH传感器缓冲液（组分B）加入NADP / NADPH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

注意：这种NADP / NADPH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NADP / NADPH混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADPH标准品的连续稀释液（0至10μM）：

3.1将10μLNADPH储备溶液（来自步骤1）加入990L PBS缓冲液中以产生10M（10pmol / L）NADPH标准溶液。

注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL10μMNADPH标准溶液进行1：3连续稀释，得到NADPH标准品的3,1,0.3,0.1,0.03,0.01,0.003和0μM连续稀释液。

3.3如表1和表2所述，将NADPH标准品和含有NADP / NADPH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微孔板中

注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1在白色/透明底96孔微孔板中的NADPH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADPH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

注意：将连续稀释的NADPH标准品从0.003μM至3μM加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADPH（例如，>100μM，最终浓度）可能由于NADPH传感器的过度氧化而导致信号降低。

4.在上清液中运行NADP / NADPH测定：

4.1将50μLNADPH反应混合物（来自步骤2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADPH测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADPH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用吸光度读数仪在575±5 nm或~570 nm至~605 nm的吸光度比下观察吸光度的增加，以提高检测灵敏度。

注意1：对于NADP / NADPH比率测量，建议使用试剂盒15263。

注意2：对于基于细胞的NADP / NADPH测量，建议使用ReadiUse™哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（Cat#20012）裂解细胞。

数据分析

        空白孔中的吸光度（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从NADPH反应孔的值中减去。 NADPH标准曲线如图1所示。

        注意：吸光度背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的吸光度非常重要。

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在白色/透明底96孔板中用Amplite™比色总NADP和NADPH测定试剂盒测量NADPH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时可以检测到低至100nM（10pmol /孔）的NADPH，而NADH没有响应。

参考文献

Comparative transcriptome analysis of a long-time span two-step culture process reveals a potential mechanism for astaxanthin and biomass hyper-accumulation in Haematococcus pluvialis JNU35
Authors: Luodong Huang, Baoyan Gao, Manman Wu, Feifei Wang, Chengwu Zhang
Journal: Biotechnology for Biofuels (2019): 18

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

相关产品

钙离子荧光探针Cal Red R525/650 AM

简要概述

关键参数

仪器：荧光酶标仪

Ex:490

Em:525/660

Cutoff:515/630

推荐孔板：黑色孔板

仪器：荧光显微镜

通道：FITC

推荐孔板：黑壁透明底

仪器：流式酶标仪

Ex比率： FITC/PerCP

Em比率：FITC/PerCP

产品介绍

细胞内钙通量测定是一种广泛使用的监测GPCR和钙通道活性的方法。为了量化细胞内钙浓度，比率荧光钙指示剂是优选的，因为该比例与钙浓度直接相关并且与细胞数量和染料负载浓度无关。然而，最流行的比率钙指示剂（例如Fura-2和Indo-1）具有某些限制，例如较低的灵敏度，UV激发，并且与HTS筛选过滤器组不兼容。Cal Red R525 / 650已被开发为新的488 nm可激发的比率荧光钙指示剂。Cal Red R525 / 650是弱荧光的，一旦进入细胞，亲脂性AM阻断基团被细胞内酯酶切割，导致带负电的荧光染料在细胞中保持良好，激发接近488nm，两次发射在525nm和650nm。当用生物活性化合物刺激细胞时，该受体启动细胞内钙的释放，其被Cal Red R525 / 650螯合。当在488nm激发时，发射信号在525nm处增加并在650nm处减小。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容，对细胞的损伤最小，使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的有力工具。由Cal Red R525 / 650螯合。当在488nm激发时，发射信号在525nm处增加并在650nm处减小。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容，对细胞的损伤最小，使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的有力工具。由Cal Red R525 / 650螯合。当在488nm激发时，发射信号在525nm处增加并在650nm处减小。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容，对细胞的损伤最小，使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的有力工具。

产品活细胞中的实验方案（点击查看）

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

操作说明

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Cal Red R525 / 650 AM储备液。
2.1Cal Red R525 / 650 AM使用量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Cal Red R525 / 650AM与-454.13μL无水DMSO混合。

3.使用10μMCalRed R525 / 650 AM 4,0.08％Pluronic®F-127和2 mM Probenecid在HHBS中制备2X工作溶液。
3.1Cal Red R525 / 650 AM的最终孔内浓度：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终孔浓度：0.04％
3.3最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Cal Red R525 / 650AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议Cal Red R525 / 650 AM的最终浓度为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127孔浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μMCalRed R525 / 650 AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。

5.孵育染料加载板

5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验。
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 492/650 nm运行实验。

参考文献

Ratiometric analysis of fura red by flow cytometry: a technique for monitoring intracellular calcium flux in primary cell subsets
Authors: Wendt ER, Ferry H, Greaves DR, Keshav S.
Journal: PLoS One (2015): e0119532

A flow cytometric comparison of Indo-1 to fluo-3 and Fura Red excited with low power lasers for detecting Ca(2+) flux
Authors: Bailey S, Macardle PJ.
Journal: J Immunol Methods (2006): 220

Use of co-loaded Fluo-3 and Fura Red fluorescent indicators for studying the cytosolic Ca(2+)concentrations distribution in living plant tissue
Authors: Walczysko P, Wagner E, Albrechtova JT.
Journal: Cell Calcium (2000): 23

[Monitoring calcium in outer hair cells with confocal microscopy and fluorescence ratios of fluo-3 and fura-red]
Authors: Su ZL, Li N, Sun YR, Yang J, Wang IM, Jiang SC.
Journal: Shi Yan Sheng Wu Xue Bao (1998): 323

Calcium transient alternans in blood-perfused ischemic hearts: observations with fluorescent indicator fura red
Authors: Wu Y, Clusin WT.
Journal: Am J Physiol (1997): H2161

Problems associated with using Fura-2 to measure free intracellular calcium concentrations in human red blood cells
Authors: Blackwood AM, Sagnella GA, Markandu ND, MacGregor GA.
Journal: J Hum Hypertens (1997): 601

IgG-induced Ca2+ oscillations in differentiated U937 cells; a study using laser scanning confocal microscopy and co-loaded fluo-3 and fura-red fluorescent probes
Authors: Floto RA, Mahaut-Smith MP, Somasundaram B, Allen JM.
Journal: Cell Calcium (1995): 377

Improved sensitivity in flow cytometric intracellular ionized calcium measurement using fluo-3/Fura Red fluorescence ratios
Authors: Novak EJ, Rabinovitch PS.
Journal: Cytometry (1994): 135

Localization of calcium entry through calcium channels in olfactory receptor neurones using a laser scanning microscope and the calcium indicator dyes Fluo-3 and Fura-Red
Authors: Schild D, Jung A, Schultens HA.
Journal: Cell Calcium (1994): 341

The distribution of intracellular calcium chelator (fura-2) in a population of intact human red cells
Authors: Lew VL, Etzion Z, Bookchin RM, daCosta R, Vaananen H, Sassaroli M, Eisinger J.
Journal: Biochim Biophys Acta (1993): 152

Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

简要概述

Amplite NADH检测试剂盒（荧光法）是美国AAT Bioquest 研发的检测NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。

传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来完成。 传统NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短UV波长使得这些方法具有低灵敏度和高干扰。 由于NAD和NADH的吸收较弱，紫外吸收方法需要较大的样品量，如果样品的可用性有限，则使相同的NAD和NADH测量不实用。

这种Amplite 荧光NADH检测试剂盒为检测NADH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶在酶循环反应中特异性识别NADH。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显著降低了生物样品的干扰。 Amplite 荧光NADH分析试剂盒提供灵敏的一步法分析，可在100μL分析体积（1μM）内检测少至100皮摩尔的NADH。 可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行测定。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite NADH检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NADH反应混合物（50μL）

加入NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟 –  2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度

1.准备NADH储备溶液：
将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。
注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NADH反应混合物：
将10mL Amplite NADH测定缓冲液（组分B）加入NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。
注意：这种NADH反应混合物足以用于两个96孔或四个384孔板。未使用的NADH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至100μM）：
3.1将50μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到450μLPBS缓冲液（pH 7.4）中以产生100μM（100pmol / L）NADH标准溶液。
注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的100μMNADH标准溶液进行1：3连续稀释，得到30,1,10,3,1,0.3,0.1和0μM的NADH标准品系列稀释液。

3.3如表1和表2所述，将NADH标准品和含有NADH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中
注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1实心黑色96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2每个孔的试剂组成

*注意：将连续稀释的NADH标准品（0.1μM至100μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份

4.在上清液反应中运行NADH测定：
4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADH测定体积为100μL/孔
注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。
4.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的荧光板读数器监测荧光增加（在Ex / Em = 540 / 590nm处最佳）。
注1：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。
注2：对于基于细胞的NADH测量，建议使用ReadiUse 哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（cat＃20012）裂解细胞。

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。
        注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech）在96孔黑色板中用Amplite NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时，可以检测到低至1μM（100pmol /孔）的NADH，而NAD没有响应。

参考文献

Mycoplasma pneumoniae protects infected epithelial cells from hydrogen peroxide-induced cell detachment.
Authors: Takeshi Yamamoto, Yutaka Kida, Koichi Kuwano
Journal: Cellular microbiology (2019): e13015

Design, synthesis, and ex vivo evaluation of a selective inhibitor for retinaldehyde dehydrogenase enzymes
Authors: Angelica R Harper, Anh T Le, Timothy Mather, Anthony Burgett, William Berry, Jody A Summers
Journal: Bioorganic & medicinal chemistry (2018)

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

相关产品

钙离子荧光探针Cal-520-葡聚糖偶联物*MW10000*

	货号	20601	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	5 mg	价格	3924
	Ex (nm)	493	Em (nm)	515
	分子量	~11000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：20601

产品名称：钙离子荧光探针Cal-520-葡聚糖偶联物*MW10000*

规格：5mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~11000

溶剂：水

激发波长(nm)：492

发射波长(nm)：514

产品介绍

钙离子荧光探针Cal-520-葡聚糖偶联物*MW10000*是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合钙的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离钙浓度的变化。使用贴片移液管或显微注射，可以使用这些葡聚糖缀合的钙指示剂的细胞不渗透盐形式物理地加载细胞。使用荧光显微镜测量来自这些细胞的荧光信号。与AM酯形式相比，我们的钙指示剂的葡聚糖形式显示出泄漏和区室化的显着减少。在荧光钙指示剂葡聚糖结合物中，Cal-520葡聚糖结合物可能是最佳选择，因为它们具有高荧光量子产率和钙的大荧光增强。与Oregon Green BAPTA-1葡聚糖相比，Cal-520葡聚糖显示出更低的背景和更大的钙诱导的荧光增强。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal-520-葡聚糖偶联物*MW10000*。 

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

参考文献

Amplite NADPH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

简要概述

Amplite NADPH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光是美国AAT Bioquest研发的检测NADPH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。 NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。 在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。 通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。 传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来完成。 该方法具有低灵敏度和高干扰，因为该测定在需要昂贵的石英微孔板的UV范围内进行。

这种Amplite 荧光NADPH检测试剂盒为检测NADPH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶特异性识别酶再循环反应中的NADPH。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显着降低了来自生物样品的干扰。

Amplite 荧光NADPH检测试剂盒提供灵敏的一步法检测，在100μL检测体积（1μM;图1）中检测少至100皮摩尔的NADPH。 该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。 该测定试剂盒已用于筛选使用NADP / NADPH作为辅因子的酶活性。 它还被用于在基于细胞的测定中灵敏检测NADPH。 与其他商业试剂盒相比，该试验具有更高的信号/背景比。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NADPH检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NADPH反应混合物（50μL）

加入NADPH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟 –  2小时在Ex / Em = 540/590 nm处

监测荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作方法

1.准备NADPH原液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADPH储备溶液。

注意：未使用的NADPH原液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NADPH反应混合物：

将10mL Amplite™NADPH测定缓冲液（组分B）加入NADPH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

注意：这种NADPH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NADPH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADPH标准品的连续稀释液（0至100μM）：

3.1将50μLNADPH储备液（来自步骤1）加入450μLPBS缓冲液（pH 7.4）中，得到100μM（100pmol / L）NADPH标准溶液。

注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL100μMNADPH标准溶液，进行1：3连续稀释，得到30,10,3,1,0.3,0.1和0μM的NADPH标准品系列稀释液。

3.3如表1和2中所述，将NADPH标准品和含有NADPH的测试样品的系列稀释液加入到实心黑色96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1实心黑色96孔微孔板中NADPH标准品和测试样品的布局

注意：NS = NADPH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2每个孔的试剂组成

*注意：将连续稀释的NADPH标准品（0.1μM至100μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份

4.在上清液反应中运行NADPH测定：

4.1将50μLNADPH反应混合物（来自步骤2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADPH测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADPH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3在Ex / Em = 530-570 / 590-600nm（（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）下用荧光板读数器监测荧光增加。

注意1：平板的内容物也可以转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

注意2：对于基于细胞的NADPH测量，建议使用ReadiUse™哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（cat＃20012）裂解细胞。

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADPH反应的那些孔的值中减去。 NADPH标准曲线如图1所示。

        注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在96孔黑色板中用Amplite 荧光NADPH测定试剂盒测量NADPH剂量反应。 低至1μM（100pmol /孔）可以在孵育1小时（n = 3）时检测到NADPH，而NADP没有响应。

参考文献

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

Cell-Line Selectivity Improves the Predictive Power of Pharmacogenomic Analyses and Helps Identify NADPH as Biomarker for Ferroptosis Sensitivity
Authors: Kenichi Shimada, Miki Hayano, Nen C Pagano, Brent R Stockwell
Journal: Cell chemical biology (2016): 225–235

相关产品 

ReadiUse 即用型NADPH再生试剂盒

	货号	15265	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1000 Tests	价格	3924
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

ReadiUse 即用型NADPH再生试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADPH的试剂盒，黄嘌呤是在大多数人体组织和液体中发现的嘌呤碱。 许多兴奋剂来源于黄嘌呤，包括咖啡因，氨茶碱，IBMX，旁黄嘌呤，己酮可可碱，可可碱和茶碱，它们可以刺激心率，收缩力，高浓度的心律失常。 因此，检测生物样品中的黄嘌呤变化对于疾病诊断和治疗监测是重要的。 Amplite 比色黄嘌呤测定试剂盒为测量黄嘌呤提供了一种快速且超灵敏的方法。 它可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式进行。 黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶存在下氧化成尿酸释放过氧化氢，用吸光度酶标仪在576nm处用Amplite Red进行特异性测定。 使用Amplite 比色黄嘌呤测定试剂盒，在100μL反应体积中检测到低至1.2μM的黄嘌呤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的ReadiUse 即用型NADPH再生试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NADPH再生原液（2X）：
通过将全部含量的测定缓冲液II（组分B）和500X葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（组分C）加入测定缓冲液I（组分A）中，制成2X NADPH再生原液。

样品操作及实验分析

将等体积的2X NADPH Regenerate储备溶液添加到所需的测定系统中。 注意：2.5毫升测定缓冲液I（组分A），2.5毫升测定缓冲液II（组分B）和10 µL 500X葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（组分C）足以用于1个板。

参考文献

Specialized Enzymes in Insect Lipid Metabolism
Authors: Marina Ann MacLean
Journal: (2019)

Functional characterization of CYP4G11—a highly conserved enzyme in the western honey bee Apis mellifera
Authors: Bernarda Calla, Marina MacLean, Ling-Hsiu Liao, Inderpreet Dhanjal, Claus Tittiger, Gary J Blomquist, May R Berenbaum
Journal: Insect molecular biology (2018)

exo-Brevicomin biosynthesis in the fat body of the mountain pine beetle, Dendroctonus ponderosae
Authors: Minmin Song, Andrew Gorzalski, Trang T Nguyen, Xibei Liu, Christopher Jeffrey, Gary J Blomquist, Claus Tittiger
Journal: Journal of chemical ecology (2014): 181–189

exo-Brevicomin biosynthetic pathway enzymes from the Mountain Pine Beetle, Dendroctonus ponderosae
Authors: Minmin Song, Patrick Delaplain, Trang T Nguyen, Xibei Liu, Leah Wickenberg, Christopher Jeffrey, Gary J Blomquist, Claus Tittiger
Journal: Insect biochemistry and molecular biology (2014): 73–80

Functional characterization of myrcene hydroxylases from two geographically distinct Ips pini populations
Authors: Minmin Song, Amy C Kim, Andrew J Gorzalski, Marina MacLean, Sharon Young, Matthew D Ginzel, Gary J Blomquist, Claus Tittiger
Journal: Insect biochemistry and molecular biology (2013): 336–343

An insect-specific P450 oxidative decarbonylase for cuticular hydrocarbon biosynthesis
Authors: Yue Qiu, Claus Tittiger, Claude Wicker-Thomas, Gaelle Le Goff, Sharon Young, Eric Wajnberg, Thierry Fricaux, Nathalie Taquet, Gary J Blomquist, René Feyereisen
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2012): 14858–14863

相关产品