荧光淬灭剂Tide Quencher 1炔烃

	货号	2189	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	5 mg	价格	2604
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量	327.40	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

荧光淬灭剂Tide Quencher 1炔烃是美国AAT Bioquest生产的淬灭剂，TQ7WS旨在成为Cy7，TF7和Alexa Fluor 750的优异猝灭剂。TQ7WS具有1.吸收更强; 2.淬火效率更高; 3.具有所需溶解度的多功能反应形式，用于标记寡核苷酸和肽。该TQ7WS产品主要用于标记肽。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的荧光淬灭剂Tide Quencher 1炔烃。 

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产品说明书

操作步骤

用Tide Quencher 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

以下方案已经过优化，可用于标记200μg（~6 A260 nm单位）的专有寡核苷酸。您需要修改协议，以通过多次实验为您的特定应用程序获得最佳结果。您的氨基改性OLIGO必须进行处理以去除快速反应并消耗染料SUCCINIMIDYL酯的氨。

1.制备Oligo溶液（溶液A）将氨基修饰的oligo（~200μg）溶解在四硼酸盐缓冲液（100μL，pH 8.5±0.5）中。

注1：寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中（如果可能，> 10mg / mL）。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。

注意：在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1在搅拌或摇动（保持反应混合物避光）的同时向染料溶液（B，20-50μL）中加入寡聚物溶液（A，100μL）。

3.2在室温下在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。

注意：在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶，以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合，因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后，应标记50-90％的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话，反应可以孵育过夜。然而，在大多数情况下，过夜孵育不会导致更高的标记效率。

4.纯化染料 – 寡糖结合物

4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸进行初步纯化

a.将20μL（一般十分之一反应溶液体积）的3M NaCl和300μL冷无水乙醇（通常为两个半反应溶液体积）加入反应小瓶中。

b.充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。

c.将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。

d.注意：如果离心时间不够长，可能会导致样品丢失。

f.小心取出上清液，用冷的70％乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。

g.注意：一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前，通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸最少被未反应的标记物污染。

4.2通过HPLC或凝胶电泳进行最终纯化

使用Tide Quencher 染料标记肽

以下方案已经过优化，用于标记10 mg仅含有一个游离氨基的专利肽（MW~2000）。您需要修改方案，以便通过多个实验为您的特定应用程序提供最佳结果。

1.制备肽溶液（溶液A）

1.1将肽（~10 mg）溶解在DMF（~1 ml）中。

注1：肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中（如果可能，> 10mg / mL）。

2.2注意：在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1向染料溶液（B，500μL）中加入肽溶液（A，1mL），搅拌或摇动（保持反应混合物不发光）。

3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

4.纯化染料 – 肽缀合物

4.1浓缩反应溶液并在C18柱上纯化，得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分，合并> 97％纯度的级分并冻干。

4.2注1：HPLC纯化条件：TEAB缓冲液（三乙基碳酸氢铵，0.25mmol，pH = 7.0-8.0）用作缓冲液A，乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0％B至30％B进行（流速：100毫升/分钟）。

4.3注2：操作过程中避免强光。

参考文献

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310

Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1

Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272

Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226

FERRAMENTAS PARA ESTUDO DA BIOLOGIA DE GPCRS (G-PROTEIN COUPLED RECEPTORS)
Authors: Frederico Marianetti Soriani, Remo Castro Russo
Journal: Unknown

相关产品

荧光淬灭剂Tide Quencher 1亚磷酰胺

	货号	2198	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 umoles	价格	2604
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量	589.73	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

荧光淬灭剂Tide Quencher 1亚磷酰胺是美国AAT Bioquest生产的淬灭剂，TQ1被设计为DABCYL的优异猝灭剂替代品。与DABCYL相比，TQ1具有（a）吸收更强; （b）淬火效率更高; （c）具有所需溶解度的多功能反应形式，用于标记寡核苷酸和肽。该TQ1产物主要用于寡核苷酸的合成内标记。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的荧光淬灭剂Tide Quencher 1亚磷酰胺。 

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产品说明书

操作步骤

用Tide Quencher 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

以下方案已经过优化，可用于标记200μg（~6 A260 nm单位）的专有寡核苷酸。您需要修改协议，以通过多次实验为您的特定应用程序获得最佳结果。您的氨基改性OLIGO必须进行处理以去除快速反应并消耗染料SUCCINIMIDYL酯的氨。

1.制备Oligo溶液（溶液A）将氨基修饰的oligo（~200μg）溶解在四硼酸盐缓冲液（100μL，pH 8.5±0.5）中。

注1：寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中（如果可能，> 10mg / mL）。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。

注意：在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1在搅拌或摇动（保持反应混合物避光）的同时向染料溶液（B，20-50μL）中加入寡聚物溶液（A，100μL）。

3.2在室温下在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。

注意：在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶，以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合，因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后，应标记50-90％的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话，反应可以孵育过夜。然而，在大多数情况下，过夜孵育不会导致更高的标记效率。

4.纯化染料 – 寡糖结合物

4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸进行初步纯化

a.将20μL（一般十分之一反应溶液体积）的3M NaCl和300μL冷无水乙醇（通常为两个半反应溶液体积）加入反应小瓶中。

b.充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。

c.将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。

d.注意：如果离心时间不够长，可能会导致样品丢失。

f.小心取出上清液，用冷的70％乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。

g.注意：一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前，通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸最少被未反应的标记物污染。

4.2通过HPLC或凝胶电泳进行最终纯化

使用Tide Quencher 染料标记肽

以下方案已经过优化，用于标记10 mg仅含有一个游离氨基的专利肽（MW~2000）。您需要修改方案，以便通过多个实验为您的特定应用程序提供最佳结果。

1.制备肽溶液（溶液A）

1.1将肽（~10 mg）溶解在DMF（~1 ml）中。

注1：肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中（如果可能，> 10mg / mL）。

2.2注意：在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1向染料溶液（B，500μL）中加入肽溶液（A，1mL），搅拌或摇动（保持反应混合物不发光）。

3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

4.纯化染料 – 肽缀合物

4.1浓缩反应溶液并在C18柱上纯化，得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分，合并> 97％纯度的级分并冻干。

4.2注1：HPLC纯化条件：TEAB缓冲液（三乙基碳酸氢铵，0.25mmol，pH = 7.0-8.0）用作缓冲液A，乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0％B至30％B进行（流速：100毫升/分钟）。

4.3注2：操作过程中避免强光。

参考文献

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310

Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1

Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272

Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226

FERRAMENTAS PARA ESTUDO DA BIOLOGIA DE GPCRS (G-PROTEIN COUPLED RECEPTORS)
Authors: Frederico Marianetti Soriani, Remo Castro Russo
Journal: Unknown

相关产品

荧光淬灭剂Tide Quencher 2亚磷酰胺

	货号	2208	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 umoles	价格	2604
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量	681.87	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：2208

产品名称：荧光淬灭剂Tide Quencher 2亚磷酰胺

规格：100 umoles

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：681.87

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：501

发射波长（nm）：N/A

产品介绍

TQ2被设计为FAM，HEX，TET，JOE，TF2和罗丹明6G的优异猝灭剂。TQ2有（a）吸收更强; （b）淬火效率更高; （c）具有所需溶解度的多功能反应形式，用于标记寡核苷酸和肽。该TQ2产物主要用于寡核苷酸的合成内标记。

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参考文献

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310

Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1

Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272

Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226

FERRAMENTAS PARA ESTUDO DA BIOLOGIA DE GPCRS (G-PROTEIN COUPLED RECEPTORS)
Authors: Frederico Marianetti Soriani, Remo Castro Russo
Journal: Unknown

相关产品

Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光

	货号	20108	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	25 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	493	Em (nm)	517
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞，半胱天冬酶抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合。 Caspase-1主要参与促炎细胞因子的激活和细胞凋亡过程。已经证明胱天蛋白酶1对肽序列Tyr-Val-Ala-Asp（YVAD）具有底物选择性。该试剂盒使用FAM-YVAD-FMK作为半胱天冬酶1活性的荧光指示剂。 FAM-YVAD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的半胱天冬酶1。一旦与半胱天冬酶1结合，荧光试剂保留在细胞内。结合抑制胱天蛋白酶1但不会阻止细胞凋亡的进行。

有多种参数可用于监测细胞凋亡。这种Cell Meter 活细胞半胱天冬酶1活性检测试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 1活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1活性，或用于筛选半胱天冬酶1抑制剂。绿色标记试剂FAM-YVAD-FMK允许通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。

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产品说明书

分离细胞的检测方案

概述

用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞

将FAM-YVAD-FMK以1：150的比例加入到细胞溶液中

在室温下孵育1小时

将细胞沉淀，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞

注：使用前将所有部件在室温下解冻。

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度，但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：

1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向FAM-YVAD-FMK（组分A）的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。

3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液（来自步骤1）以1：150的比例添加到细胞溶液中，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育1小时。

注1：对于FAM-YVAD-FMK标记，细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2：对于粘附细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.将细胞以约200g旋转5分钟，并用1mL洗涤缓冲液（组分B）洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1：FAM-YVAD-FMK是荧光的，因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样，用于步骤6。

5.如果需要，用DNA染色标记细胞（如用于死细胞的碘化丙锭，或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst）。

6.通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度（对于碘化丙锭，Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料，Ex / Em = 350 / 461纳米）。

6.1对于流式细胞仪，使用FL1通道监测荧光强度（FL2通道用于碘化丙锭染色）。

6.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。

注意：如果需要平衡细胞浓度，调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失，则此调整步骤是可选的。

6.3使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞（用于碘化丙啶染色的TRITC通道，用于Hoechst染色的DAPI通道）。

6.4使用荧光酶标仪，使用Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）底部读取模式监测荧光强度。

参考文献

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

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