实验方案

工作溶液配制

为了标记50 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将5 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与50 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：如果蛋白质浓度不同，请相应地调整蛋白质体积，以使〜50 µg蛋白质可用于标记反应。
注意：要标记100 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将10 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：蛋白质应溶于1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，则必须针对1X PBS（pH 7.2-7.4）进行透析，或使用10 kDa的Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜去除游离的胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）被广泛用于蛋白质沉淀。
注意：为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL，结合效率明显降低，低于1 mg / mL。 

操作步骤

1. 将蛋白质工作溶液（溶液A）添加到一个小瓶的标记染料（组分A）中，并通过将小瓶涡旋几秒钟将它们充分混合。
   注意：如果要标记100 µg的蛋白质，请使用两个小瓶（组分A），将100 µg的蛋白质分成2 x 50 µg的蛋白质，并使每个50 µg的蛋白质与一小瓶的标记染料反应。然后合并两个小瓶，用于下一步。
2. 将缀合反应混合物在室温下放置30-60分钟。
   注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。 

1. 将5 µL（对于50 µg蛋白质）或10 µL（对于100 µg蛋白质）添加到缀合反应混合物中，占TQ™染色猝灭缓冲液（组分C）总反应体积的10％；混合均匀。
2. 在室温下孵育10分钟。标记的蛋白（抗体）可以使用了。 

蛋白质缀合物应在载体蛋白（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5 mg / mL的浓度存储。为了更长的存储时间，可以将蛋白质缀合物冻干或分成单份使用，并存储在≤–20°C下。

图示

图1. HeLa细胞中微管蛋白的免疫荧光染色。HeLa细胞用4％PFA固定，用0.1％Triton X-100透化并封闭。然后将细胞与小鼠抗微管蛋白抗体一起孵育，并用ReadiLink™xtra Rapid iFluor™594抗体标记试剂盒（#1960）标记的山羊抗小鼠IgG染色。

参考文献

Identification of a Small Probe That Can Be Conjugated to Proteins by Proximity Labeling.
Authors: Sun, Weiping and Huo, Yinbo and Mei, Yuxuan and Zhou, Qingtong and Zhao, Suwen and Zhuang, Min
Journal: ACS chemical biology (2020): 39-43

Paper-based nuclease protection assay with on-chip sample pretreatment for point-of-need nucleic acid detection.
Authors: Noviana, Eka and Jain, Sidhartha and Hofstetter, Josephine and Geiss, Brian J and Dandy, David S and Henry, Charles S
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2020): 3051-3061

A neuraminidase potency assay for quantitative assessment of neuraminidase in influenza vaccines.
Authors: Byrne-Nash, Rose T and Gillis, Jacob H and Miller, David F and Bueter, Katie M and Kuck, Laura R and Rowlen, Kathy L
Journal: NPJ vaccines (2019): 3

Author Correction: A dynamic three-step mechanism drives the HIV-1 pre-fusion reaction.
Authors: Iliopoulou, Maro and Nolan, Rory and Alvarez, Luis and Watanabe, Yasunori and Coomer, Charles A and Jakobsdottir, G Maria and Bowden, Thomas A and Padilla-Parra, Sergi
Journal: Nature structural & molecular biology (2019): 526

Site-Specific Fluorescent Labeling of Antibodies and Diabodies Using SpyTag/SpyCatcher System for In Vivo Optical Imaging.
Authors: Alam, Md Kausar and El-Sayed, Ayman and Barreto, Kris and Bernhard, Wendy and Fonge, Humphrey and Geyer, C Ronald
Journal: Molecular imaging and biology (2019): 54-66

Highly efficient electrochemical sensing platform for sensitive detection DNA methylation, and methyltransferase activity based on Ag NPs decorated carbon nanocubes.
Authors: Gao, Fenglei and Fan, Taotao and Ou, Shanshan and Wu, Jing and Zhang, Xing and Luo, Jianjun and Li, Na and Yao, Yao and Mou, Yingfeng and Liao, Xianjiu and Geng, Deqin
Journal: Biosensors & bioelectronics (2018): 201-208

Improved performance of lateral flow immunoassays for alpha-fetoprotein and vanillin by using silica shell-stabilized gold nanoparticles.
Authors: Lu, Xuewen and Mei, Ting and Guo, Qi and Zhou, Wenjing and Li, Xiaomei and Chen, Jitao and Zhou, Xinke and Sun, Ning and Fang, Zhiyuan
Journal: Mikrochimica acta (2018): 2

Intracellular in situ labeling of TiO2 nanoparticles for fluorescence microscopy detection.
Authors: Brown, Koshonna and Thurn, Ted and Xin, Lun and Liu, William and Bazak, Remon and Chen, Si and Lai, Barry and Vogt, Stefan and Jacobsen, Chris and Paunesku, Tatjana and Woloschak, Gayle E
Journal: Nano research (2018): 464-476

Multiplex Immunoassay Profiling of Serum in Psychiatric Disorders.
Authors: Stephen, Laurie and Schwarz, Emanuel and Guest, Paul C
Journal: Advances in experimental medicine and biology (2017): 149-156

Multiplex Immunoassay Profiling.
Authors: Stephen, Laurie
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2017): 169-176

实验方案

工作溶液配制

为了标记50 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将5 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与50 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：如果蛋白质浓度不同，请相应地调整蛋白质体积，以使〜50 µg蛋白质可用于标记反应。
注意：要标记100 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将10 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：蛋白质应溶于1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，则必须针对1X PBS（pH 7.2-7.4）进行透析，或使用10 kDa的Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜去除游离的胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）被广泛用于蛋白质沉淀。
注意：为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL，结合效率明显降低，低于1 mg / mL。 

操作步骤

1. 将蛋白质工作溶液（溶液A）添加到一个小瓶的标记染料（组分A）中，并通过将小瓶涡旋几秒钟将它们充分混合。
   注意：如果要标记100 µg的蛋白质，请使用两个小瓶（组分A），将100 µg的蛋白质分成2 x 50 µg的蛋白质，并使每个50 µg的蛋白质与一小瓶的标记染料反应。然后合并两个小瓶，用于下一步。
2. 将缀合反应混合物在室温下放置30-60分钟。
   注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。 

1. 将5 µL（对于50 µg蛋白质）或10 µL（对于100 µg蛋白质）添加到缀合反应混合物中，占TQ™染色猝灭缓冲液（组分C）总反应体积的10％；混合均匀。
2. 在室温下孵育10分钟。标记的蛋白（抗体）可以使用了。 

蛋白质缀合物应在载体蛋白（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5 mg / mL的浓度存储。为了更长的存储时间，可以将蛋白质缀合物冻干或分成单份使用，并存储在≤–20°C下。

图示

图1. HeLa细胞中微管蛋白的免疫荧光染色。HeLa细胞用4％PFA固定，用0.1％Triton X-100透化并封闭。然后将细胞与小鼠抗微管蛋白抗体一起孵育，并用ReadiLink™xtra Rapid AF488抗体标记试剂盒（#1978）标记的山羊抗小鼠IgG染色。

参考文献

Identification of a Small Probe That Can Be Conjugated to Proteins by Proximity Labeling.
Authors: Sun, Weiping and Huo, Yinbo and Mei, Yuxuan and Zhou, Qingtong and Zhao, Suwen and Zhuang, Min
Journal: ACS chemical biology (2020): 39-43

Paper-based nuclease protection assay with on-chip sample pretreatment for point-of-need nucleic acid detection.
Authors: Noviana, Eka and Jain, Sidhartha and Hofstetter, Josephine and Geiss, Brian J and Dandy, David S and Henry, Charles S
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2020): 3051-3061

A neuraminidase potency assay for quantitative assessment of neuraminidase in influenza vaccines.
Authors: Byrne-Nash, Rose T and Gillis, Jacob H and Miller, David F and Bueter, Katie M and Kuck, Laura R and Rowlen, Kathy L
Journal: NPJ vaccines (2019): 3

Author Correction: A dynamic three-step mechanism drives the HIV-1 pre-fusion reaction.
Authors: Iliopoulou, Maro and Nolan, Rory and Alvarez, Luis and Watanabe, Yasunori and Coomer, Charles A and Jakobsdottir, G Maria and Bowden, Thomas A and Padilla-Parra, Sergi
Journal: Nature structural & molecular biology (2019): 526

Site-Specific Fluorescent Labeling of Antibodies and Diabodies Using SpyTag/SpyCatcher System for In Vivo Optical Imaging.
Authors: Alam, Md Kausar and El-Sayed, Ayman and Barreto, Kris and Bernhard, Wendy and Fonge, Humphrey and Geyer, C Ronald
Journal: Molecular imaging and biology (2019): 54-66

Highly efficient electrochemical sensing platform for sensitive detection DNA methylation, and methyltransferase activity based on Ag NPs decorated carbon nanocubes.
Authors: Gao, Fenglei and Fan, Taotao and Ou, Shanshan and Wu, Jing and Zhang, Xing and Luo, Jianjun and Li, Na and Yao, Yao and Mou, Yingfeng and Liao, Xianjiu and Geng, Deqin
Journal: Biosensors & bioelectronics (2018): 201-208

Improved performance of lateral flow immunoassays for alpha-fetoprotein and vanillin by using silica shell-stabilized gold nanoparticles.
Authors: Lu, Xuewen and Mei, Ting and Guo, Qi and Zhou, Wenjing and Li, Xiaomei and Chen, Jitao and Zhou, Xinke and Sun, Ning and Fang, Zhiyuan
Journal: Mikrochimica acta (2018): 2

Intracellular in situ labeling of TiO2 nanoparticles for fluorescence microscopy detection.
Authors: Brown, Koshonna and Thurn, Ted and Xin, Lun and Liu, William and Bazak, Remon and Chen, Si and Lai, Barry and Vogt, Stefan and Jacobsen, Chris and Paunesku, Tatjana and Woloschak, Gayle E
Journal: Nano research (2018): 464-476

Multiplex Immunoassay Profiling of Serum in Psychiatric Disorders.
Authors: Stephen, Laurie and Schwarz, Emanuel and Guest, Paul C
Journal: Advances in experimental medicine and biology (2017): 149-156

Multiplex Immunoassay Profiling.
Authors: Stephen, Laurie
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2017): 169-176

实验方案

工作溶液配制

为了标记50 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将5 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与50 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：如果蛋白质浓度不同，请相应地调整蛋白质体积，以使〜50 µg蛋白质可用于标记反应。
注意：要标记100 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将10 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：蛋白质应溶于1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，则必须针对1X PBS（pH 7.2-7.4）进行透析，或使用10 kDa的Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜去除游离的胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）被广泛用于蛋白质沉淀。
注意：为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL，结合效率明显降低，低于1 mg / mL。 

操作步骤

1. 将蛋白质工作溶液（溶液A）添加到一个小瓶的标记染料（组分A）中，并通过将小瓶涡旋几秒钟将它们充分混合。
   注意：如果要标记100 µg的蛋白质，请使用两个小瓶（组分A），将100 µg的蛋白质分成2 x 50 µg的蛋白质，并使每个50 µg的蛋白质与一小瓶的标记染料反应。然后合并两个小瓶，用于下一步。
2. 将缀合反应混合物在室温下放置30-60分钟。
   注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。 

1. 将5 µL（对于50 µg蛋白质）或10 µL（对于100 µg蛋白质）添加到缀合反应混合物中，占TQ™染色猝灭缓冲液（组分C）总反应体积的10％；混合均匀。
2. 在室温下孵育10分钟。标记的蛋白（抗体）可以使用了。 

蛋白质缀合物应在载体蛋白（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5 mg / mL的浓度存储。为了更长的存储时间，可以将蛋白质缀合物冻干或分成单份使用，并存储在≤–20°C下。

图示

图1. HeLa细胞中微管蛋白的免疫荧光染色。HeLa细胞用4％PFA固定，用0.1％Triton X-100透化并封闭。然后将细胞与小鼠抗微管蛋白抗体一起孵育，并用ReadiLink™xtra Rapid AF594抗体标记试剂盒（#1982）标记的山羊抗小鼠IgG染色。

参考文献

Identification of a Small Probe That Can Be Conjugated to Proteins by Proximity Labeling.
Authors: Sun, Weiping and Huo, Yinbo and Mei, Yuxuan and Zhou, Qingtong and Zhao, Suwen and Zhuang, Min
Journal: ACS chemical biology (2020): 39-43

Paper-based nuclease protection assay with on-chip sample pretreatment for point-of-need nucleic acid detection.
Authors: Noviana, Eka and Jain, Sidhartha and Hofstetter, Josephine and Geiss, Brian J and Dandy, David S and Henry, Charles S
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2020): 3051-3061

A neuraminidase potency assay for quantitative assessment of neuraminidase in influenza vaccines.
Authors: Byrne-Nash, Rose T and Gillis, Jacob H and Miller, David F and Bueter, Katie M and Kuck, Laura R and Rowlen, Kathy L
Journal: NPJ vaccines (2019): 3

Author Correction: A dynamic three-step mechanism drives the HIV-1 pre-fusion reaction.
Authors: Iliopoulou, Maro and Nolan, Rory and Alvarez, Luis and Watanabe, Yasunori and Coomer, Charles A and Jakobsdottir, G Maria and Bowden, Thomas A and Padilla-Parra, Sergi
Journal: Nature structural & molecular biology (2019): 526

Site-Specific Fluorescent Labeling of Antibodies and Diabodies Using SpyTag/SpyCatcher System for In Vivo Optical Imaging.
Authors: Alam, Md Kausar and El-Sayed, Ayman and Barreto, Kris and Bernhard, Wendy and Fonge, Humphrey and Geyer, C Ronald
Journal: Molecular imaging and biology (2019): 54-66

Highly efficient electrochemical sensing platform for sensitive detection DNA methylation, and methyltransferase activity based on Ag NPs decorated carbon nanocubes.
Authors: Gao, Fenglei and Fan, Taotao and Ou, Shanshan and Wu, Jing and Zhang, Xing and Luo, Jianjun and Li, Na and Yao, Yao and Mou, Yingfeng and Liao, Xianjiu and Geng, Deqin
Journal: Biosensors & bioelectronics (2018): 201-208

Improved performance of lateral flow immunoassays for alpha-fetoprotein and vanillin by using silica shell-stabilized gold nanoparticles.
Authors: Lu, Xuewen and Mei, Ting and Guo, Qi and Zhou, Wenjing and Li, Xiaomei and Chen, Jitao and Zhou, Xinke and Sun, Ning and Fang, Zhiyuan
Journal: Mikrochimica acta (2018): 2

Intracellular in situ labeling of TiO2 nanoparticles for fluorescence microscopy detection.
Authors: Brown, Koshonna and Thurn, Ted and Xin, Lun and Liu, William and Bazak, Remon and Chen, Si and Lai, Barry and Vogt, Stefan and Jacobsen, Chris and Paunesku, Tatjana and Woloschak, Gayle E
Journal: Nano research (2018): 464-476

Multiplex Immunoassay Profiling of Serum in Psychiatric Disorders.
Authors: Stephen, Laurie and Schwarz, Emanuel and Guest, Paul C
Journal: Advances in experimental medicine and biology (2017): 149-156

Multiplex Immunoassay Profiling.
Authors: Stephen, Laurie
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2017): 169-176

实验方案

工作溶液配制

为了标记50 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将5 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与50 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：如果蛋白质浓度不同，请相应地调整蛋白质体积，以使〜50 µg蛋白质可用于标记反应。
注意：要标记100 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将10 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：蛋白质应溶于1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，则必须针对1X PBS（pH 7.2-7.4）进行透析，或使用10 kDa的Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜去除游离的胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）被广泛用于蛋白质沉淀。
注意：为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL，结合效率明显降低，低于1 mg / mL。 

操作步骤

1. 将蛋白质工作溶液（溶液A）添加到一个小瓶的标记染料（组分A）中，并通过将小瓶涡旋几秒钟将它们充分混合。
   注意：如果要标记100 µg的蛋白质，请使用两个小瓶（组分A），将100 µg的蛋白质分成2 x 50 µg的蛋白质，并使每个50 µg的蛋白质与一小瓶的标记染料反应。然后合并两个小瓶，用于下一步。
2. 将缀合反应混合物在室温下放置30-60分钟。
   注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。 

1. 将5 µL（对于50 µg蛋白质）或10 µL（对于100 µg蛋白质）添加到缀合反应混合物中，占TQ™染色猝灭缓冲液（组分C）总反应体积的10％；混合均匀。
2. 在室温下孵育10分钟。标记的蛋白（抗体）可以使用了。 

蛋白质缀合物应在载体蛋白（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5 mg / mL的浓度存储。为了更长的存储时间，可以将蛋白质缀合物冻干或分成单份使用，并存储在≤–20°C下。

图示

图1. HeLa细胞中微管蛋白的免疫荧光染色。HeLa细胞用4％PFA固定，用0.1％Triton X-100透化并封闭。然后将细胞与小鼠抗微管蛋白抗体一起孵育，并用ReadiLink™xtra Rapid AF647抗体标记试剂盒（#1985）标记的山羊抗小鼠IgG染色。

参考文献

Identification of a Small Probe That Can Be Conjugated to Proteins by Proximity Labeling.
Authors: Sun, Weiping and Huo, Yinbo and Mei, Yuxuan and Zhou, Qingtong and Zhao, Suwen and Zhuang, Min
Journal: ACS chemical biology (2020): 39-43

Paper-based nuclease protection assay with on-chip sample pretreatment for point-of-need nucleic acid detection.
Authors: Noviana, Eka and Jain, Sidhartha and Hofstetter, Josephine and Geiss, Brian J and Dandy, David S and Henry, Charles S
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2020): 3051-3061

A neuraminidase potency assay for quantitative assessment of neuraminidase in influenza vaccines.
Authors: Byrne-Nash, Rose T and Gillis, Jacob H and Miller, David F and Bueter, Katie M and Kuck, Laura R and Rowlen, Kathy L
Journal: NPJ vaccines (2019): 3

Author Correction: A dynamic three-step mechanism drives the HIV-1 pre-fusion reaction.
Authors: Iliopoulou, Maro and Nolan, Rory and Alvarez, Luis and Watanabe, Yasunori and Coomer, Charles A and Jakobsdottir, G Maria and Bowden, Thomas A and Padilla-Parra, Sergi
Journal: Nature structural & molecular biology (2019): 526

Site-Specific Fluorescent Labeling of Antibodies and Diabodies Using SpyTag/SpyCatcher System for In Vivo Optical Imaging.
Authors: Alam, Md Kausar and El-Sayed, Ayman and Barreto, Kris and Bernhard, Wendy and Fonge, Humphrey and Geyer, C Ronald
Journal: Molecular imaging and biology (2019): 54-66

Highly efficient electrochemical sensing platform for sensitive detection DNA methylation, and methyltransferase activity based on Ag NPs decorated carbon nanocubes.
Authors: Gao, Fenglei and Fan, Taotao and Ou, Shanshan and Wu, Jing and Zhang, Xing and Luo, Jianjun and Li, Na and Yao, Yao and Mou, Yingfeng and Liao, Xianjiu and Geng, Deqin
Journal: Biosensors & bioelectronics (2018): 201-208

Improved performance of lateral flow immunoassays for alpha-fetoprotein and vanillin by using silica shell-stabilized gold nanoparticles.
Authors: Lu, Xuewen and Mei, Ting and Guo, Qi and Zhou, Wenjing and Li, Xiaomei and Chen, Jitao and Zhou, Xinke and Sun, Ning and Fang, Zhiyuan
Journal: Mikrochimica acta (2018): 2

Intracellular in situ labeling of TiO2 nanoparticles for fluorescence microscopy detection.
Authors: Brown, Koshonna and Thurn, Ted and Xin, Lun and Liu, William and Bazak, Remon and Chen, Si and Lai, Barry and Vogt, Stefan and Jacobsen, Chris and Paunesku, Tatjana and Woloschak, Gayle E
Journal: Nano research (2018): 464-476

Multiplex Immunoassay Profiling of Serum in Psychiatric Disorders.
Authors: Stephen, Laurie and Schwarz, Emanuel and Guest, Paul C
Journal: Advances in experimental medicine and biology (2017): 149-156

Multiplex Immunoassay Profiling.
Authors: Stephen, Laurie
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2017): 169-176

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

过氧化物酶标记

Styramide标记

复染和荧光成像

表1.建议用于核复染色的产品。 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

相关产品

Mabtech的经过仔细验证的ELISAPRO试剂盒提供了所有必需的试剂，以方便，可靠，特异的方式方便地定量测定血清，血浆和细胞培养上清液中的分析物。

ELISAPRO试剂盒随附有预先涂有单克隆抗体（mAb）。样品中的分析物被包被的mAb捕获，并被生物素化的检测mAb和链霉亲和素-HRP（SA-HRP）检测。注：TMB底物的添加将导致底物出现颜色。用硫酸终止反应，并且可以使用ELISA板读数器定量光密度。通过与平行分析的ELISA标准品的系列稀释液比较来确定分析物的浓度。

ELISAPRO试剂盒包括Apo ELISA缓冲液，一种可防止假阳性信号的缓冲液。缓冲液可阻止嗜异性抗体交联测定抗体。嗜异性抗体通常存在于人血清/血浆中，也可以存在于其他物种中。缓冲液已使用来自健康人类献血者的血清/血浆样品进行了验证。

1. 酶标仪可在450 nm读取
2. ELISA平板清洗器；自动或手动（例如，多移液管或喷射瓶）•精密移液管，吸头和量筒
3. 用于标准和样品稀释的试管
4. 蒸馏水或去离子水 

Stop溶液0.18 M H2SO4（<1％）对眼睛和皮肤有刺激性，应小心处理。由于不知道暴露的影响，因此应仔细处理该标准。溶液中的缓冲液和试剂含有防腐剂Kathon CG（0.002％），这是一种潜在的过敏原，可能通过皮肤接触引起过敏。人和动物样品应被视为潜在危险的生物材料。所有材料应按照当地法规进行处理。有关更多信息，请查阅我们网站上的《安全数据表》。

在开始测定之前，让板和测定试剂达到室温（TMB底物除外，最好使用冷底物）。
计划板布局，使其一式两份，包括标准曲线，样品和测定背景对照。每孔的体积不应超过100μl。

样品实验方案

储备溶液配制

将50 ml洗涤缓冲液浓缩液添加到950 ml蒸馏水或去离子水中（足以完成1个板的所有洗涤步骤）。如果在20倍浓缩物中形成了晶体，则将其升至室温并轻轻混合以溶解。

用蒸馏水或去离子水将Apo ELISA缓冲液浓缩液稀释5倍，以制备所需体积的Apo ELISA缓冲液。对于每个板，将30 ml Apo ELISA缓冲液浓缩液添加到120 ml水中。

所有样品均应在Apo ELISA缓冲液中稀释至少2倍。除去可见的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀释，应在样品之前添加缓冲液。高度溶血和高血脂的样品可能会导致定量结果不准确。含有超出分析标准范围的高水平分析物的样品将需要进一步稀释。

根据对空腹健康受试者的反复分析，我们建议稀释系数为50,000X。精确的移液非常重要，在稀释步骤之间更换吸头，并使用新鲜制成的稀释液。指示的数量足以重复。

通过添加1 ml标准重构缓冲液将ELISA标准液重构为1.5μg/ ml的储液，请勿搅拌。让标准液溶解15分钟，然后涡旋3秒。标准液应等份保存在-20°C下。避免重复冻融循环。

如图所示，稀释标准储备溶液以创建标准曲线。指示的数量足以重复。最后一个样品瓶用作测定背景对照，即应省略标准液。在使用30分钟内准备标准曲线。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

过氧化物酶标记

Styramide标记

复染和荧光成像

表1.建议用于核复染色的产品。 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

相关产品