Cell Meter™荧光法细胞毒性检测试剂盒 货号22782-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter™荧光法细胞毒性检测试剂盒

Cell Meter™荧光法细胞毒性检测试剂盒

货号 22782 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5000 Tests 价格 10548
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 荧光法细胞毒性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的细胞毒性检测试剂盒,Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具,包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。有许多不同的参数都可以用来检验细胞活性。Cell Meter荧光法细胞毒性检测试剂盒提供了一种快速、简单、精确、均一的一种荧光分析法来对细胞活性进行检测。本检测法是基于蓝色、非荧光性染料刃天青,接受了来自活细胞线粒体呼吸链中释放的电子时,被还原成粉红色荧光染料(试卤灵);通过对其颜色、荧光的变化的观察来实现检测。产物试卤灵的总量与活细胞数量成直接比例关系。对细胞的增殖性和细胞毒性检测,用本试剂盒比用其他检测法(例如,MTT)具有更高的灵敏度;因为本试剂盒的组分非常适合于低细胞毒性分析,并且能进行长时间保温(例如24~48小时)。本检测法可以便捷地用于96和384微孔板分析中。其高灵敏度(<100 CHO细胞),非放射性和无需洗脱,这些特性使本试剂盒适用于细胞增值性和细胞毒性的高通量扫描筛选,与许多化合物不同的是,它可以用于各种不同的实验平台中。本试剂盒提供所有必需组分和最佳检测方案。它适合于增殖型和非增殖型细胞,也可用于悬浮和贴壁细胞。96微孔板中,每孔用试剂20ul,本试剂盒提供的试剂足以进行1000次检测;384微孔板中,每孔加试剂10ul,本试剂盒提供的试剂足以进行2000次检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 荧光法细胞毒性检测试剂盒。 

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适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式: 底读模式

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物(100μL/孔/ 96孔板或50μL/孔/ 384孔板)制备细胞
2.添加1/5体积的分析溶液(组分A)
3.将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育1-24小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度(底部读取模式)(截止= 570 nm)

 

操作步骤

1.在具有黑色壁和透明底部的组织培养微孔板中每孔100至10,000个细胞。 将测试化合物添加到细胞中,并在37℃,5%CO2培养箱中孵育所需的一段时间(例如24,48或96小时)。 对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相同量的化合物缓冲液。 对于96孔板,建议的总体积为100μL,对于384孔板,建议的总体积为50μL。

 

2.对照组设置
2.1阳性对照:含有细胞和已知的增殖或细胞毒性诱导剂。
2.2阴性对照:含有细胞但不含有测试化合物。
2.3载体对照:含有细胞和用于递送测试化合物的载体。
2.4非细胞对照:含有不含细胞的生长培养基。 注意:血清中的LDH会导致背景荧光。
2.5测试化合物对照:含有用于递送测试化合物的载体[Hank’s平衡盐溶液(HBSS)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)]和测试化合物。 一些测试化合物具有强自发荧光并且可能产生假阳性结果。 注意:对于96孔板,将所有对照的总体积与100μL匹配,对于具有生长培养基的384孔板,将所有对照的总体积与50μL相匹配。
 
3.将测定溶液(组分A)预热至37°C,并在开始实验前彻底混合。

4.向每个孔中加入20μL/孔(96孔板)或10μL/孔(384孔板)的测定溶液(组分A)。 轻轻摇动平板30秒,混合试剂。

5.将细胞在37°C,5%CO2培养箱中孵育1-24小时,避光。 注意:适当的孵育时间取决于单个细胞类型的代谢率和使用的细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。 由于刃天青可以转化为无色二氢呋喃,因此不推荐极长的孵育时间。

6.在Ex / Em = 540 / 590nm(截止= 570nm)下用荧光酶标仪(底部读取模式)监测荧光强度。

 
数据分析
        从含有细胞的那些孔的值中减去来自非细胞对照孔的背景荧光读数。注意:空白孔的背景荧光可以根据生长培养基或微量滴定板的来源而变化。每个孔中的荧光读数表示该孔中的细胞数。

根据以下公式计算样品和对照的细胞活力百分比:
%细胞活力= 100×(Fsample-Fo)/(Fctrl-Fo)
Fsample是在测试化合物存在下的荧光读数。
Fctrl是不存在测试化合物(载体对照)时的荧光读数。
Fo是平均背景(非细胞对照)荧光强度。

        从空白标准孔获得的读数(RFU)用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。该等式可用于计算CHO-K1细胞样品。

Cell Meter™荧光法细胞毒性检测试剂盒   货号22782
图1.用Cell Meter 荧光细胞细胞毒性测定试剂盒测量CHO-K1细胞数量响应。 将0至10,000细胞/孔/100μL的CHO-K1细胞在Costar黑壁/透明底96孔板中接种过夜。 将细胞与20μL/孔的测定溶液(组分A)在37℃下孵育3小时。 用NOVOstar仪器(BMG Labtech)在Ex / Em = 540 / 590nm(截止值= 570nm)下测量荧光强度。 荧光强度与所示的细胞数呈线性关系(R2 = 0.998)。

 

参考文献

A fluorometric study of relative ocular lens cytosensitivity to multipurpose contact lens solutions using the resazurin assay method
Authors: Oriowo MO.
Journal: Toxicol In Vitro (2006): 1548

A resazurin-based biosensor for organic pollutants
Authors: Tizzard AC, Bergsma JH, Lloyd-Jones G.
Journal: Biosens Bioelectron (2006): 759

Application of the resazurin microtitre assay for detection of multidrug resistance in Mycobacterium tuberculosis in Algiers
Authors: Nateche F, Martin A, Baraka S, Palomino JC, Khaled S, Portaels F.
Journal: J Med Microbiol (2006): 857

Determination of the diagnostic value of the resazurin reduction assay for evaluating boar semen by receiver operating characteristic analysis
Authors: Zrimsek P, Kosec M, Kunc J, Mrkun J.
Journal: Asian J Androl (2006): 343

Development and application of a resazurin-based biomass activity test for activated sludge plant management
Authors: McNicholl BP, McGrath JW, Quinn JP.
Journal: Water Res. (2006)

Development of resazurin microtiter assay for drug sensibility testing of Trypanosoma cruzi epimastigotes
Authors: Rolon M, Vega C, Escario JA, Gomez-Barrio A.
Journal: Parasitol Res (2006): 103

Evaluation of the resazurin microtiter assay for rapid detection of ofloxacin resistance in M. tuberculosis
Authors: Umubyeyi AN, Martin A, Zissis G, Struelens M, Karita E, Portaels F.
Journal: Int J Tuberc Lung Dis (2006): 808

Rapid susceptibility test for Mycobacterium tuberculosis to isoniazid and rifampin with resazurin method in screw-cap tubes
Authors: Coban AY, Cekic Cihan C, Bilgin K, Uzun M, Akgunes A, Cetinkaya E, Durupinar B.
Journal: J Chemother (2006): 140

Comparative evaluation of the nitrate reduction assay, the MTT test, and the resazurin microtitre assay for drug susceptibility testing of clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis
Authors: Montoro E, Lemus D, Echemendia M, Martin A, Portaels F, Palomino JC.
Journal: J Antimicrob Chemother (2005): 500

Detection of mitochondrial respiratory dysfunction in circulating lymphocytes using resazurin
Authors: Abu-Amero KK, Bosley TM.
Journal: Arch Pathol Lab Med (2005): 1295

 

相关产品

产品名称 货号
Cell Meter 比色法细胞毒性检测试剂盒 Cat#22780

说明书
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CytoFix BCECF, AM pH荧光探针 货号21200-AAT Bioquest荧光染料

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CytoFix BCECF, AM pH荧光探针

CytoFix BCECF, AM pH荧光探针

货号 21200 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3732
Ex (nm) 504 Em (nm) 527
分子量 638.63 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:21200

产品名称:CytoFix BCECF, AM pH荧光探针

规格:1 mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:638.63

溶剂:DMSO

激发波长(nm):504

发射波长(nm):527

 

产品介绍

细胞内pH在许多细胞事件中起重要的调节作用,包括细胞生长,钙调节,酶活性,受体介导的信号转导,离子转运,内吞作用,趋化作用,细胞粘附和其他细胞过程。近年来,pH敏感的荧光染料已广泛应用于监测细胞内pH的变化。使用荧光pH指示剂的成像技术使研究人员能够以更大的空间分辨率和采样密度研究这些过程。其中2’,7′-双-(2-羧乙基)-5-(和-6)-羧基荧光素(BCECF)是最受欢迎的pH探针,因为它可用于按比例监测pKa〜7.0的细胞pH。 BCECF AM是BCECF的细胞可渗透版本。但是,由于药物外排转运蛋白的活性,当BCECF通过其AM酯装载到活细胞中时,BCECF迅速从活细胞中泄漏出来。 CytoFix BCECF是包含细胞保留基团的BCECF衍生物。新修饰的BCECF衍生物在活细胞中的保留时间比BCECF染料长得多。 CytoFix BCECF保留了BCECF相同的pH值,并改善了细胞保留率。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的CytoFix BCECF, AM。 

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参考文献

Intracellular pH Measurements in Glioblastoma Cells Using the pH-Sensitive Dye BCECF
Authors: Galifianakis, N. V., Placantonakis, D. G., Chesler, M.
Journal: Methods Mol Biol (2018): 103-109

Evaluation of BCECF fluorescence ratio imaging to properly measure gastric intramucosal pH variations in vivo
Authors: Rochon, P., Jourdain, M., Mangalaboyi, J., Fourrier, F., Soulie-Begu, S., Buys, B., Dehlin, G., Lesage, J. C., Chambrin, M. C., Mordon, S.
Journal: J Biomed Opt (2007): 064014

Calibration methods and avoidance of errors in measurement of intracellular pH (pHcyt) using the indicator bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein (BCECF) in human platelets
Authors: Valant, P. A., Haynes, D. H.
Journal: J Fluoresc (1992): 191-206

Estimation of intramitochondrial pca and ph by fura-2 and 2,7 biscarboxyethyl-5(6)-carboxyfluorescein (bcecf) fluorescence
Authors: Davis MH, Altschuld RA, Jung DW, Brierley GP.
Journal: Biochem Biophys Res Commun (1987): 40

说明书
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ICG酰肼 货号987-AAT Bioquest荧光染料

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ICG酰肼

ICG酰肼

ICG酰肼    货号987 货号 987 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3924
Ex (nm) 789 Em (nm) 814
分子量 973.04 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:987

产品名称:ICG酰肼

规格:1mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:N/A

外观:固体

溶剂:DMSO

激发波长(nm):780

发射波长(nm):800

 

产品介绍

ICG酰肼是美国AAT Bioquest生产的吲哚菁绿,吲哚菁绿(ICG)是具有NIR吸收性质(约780nm处的峰值吸收)和~800nm处的发射最大值的三羰花青型染料。这种染料也被称为Cardio Green和其他一些不常见的商品名。非侵入性近红外(NIR)荧光成像染料ICG经FDA批准用于眼科血管造影,以确定心输出量和肝血流量和功能。由于红外频率穿透视网膜层,允许ICG血管造影成像比荧光血管造影更深的循环模式。ICG与血浆蛋白紧密结合,并限制在血管系统中。ICG的半衰期为150至180秒,仅通过肝脏从胆汁液中排出。最近的一项研究表明ICG在注射后20分钟内靶向动脉粥样硬化,并提供足够的信号增强,用于体内检测动脉粥样硬化兔中富含脂质,发炎,冠状动脉大小的斑块。离体荧光反射成像显示,与注射生理盐水的动脉粥样硬化兔相比,注射ICG的动脉粥样硬化兔的斑块靶 – 背景比高。它还用于其他医学诊断和癌症患者,用于检测实体瘤,淋巴结的定位,以及重建手术期间的血管造影,视网膜和脉络膜血管的可视化以及光动力疗法。在癌症诊断和治疗中,ICG可以用作成像染料和高温剂。在可见光范围内吸收很少是自发荧光低的原因,组织吸光度和NIR波长(700-900nm)的散射。该ICG酰肼可用于通过众所周知的席夫碱化学标记碳水化合物和糖蛋白。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的ICG酰肼。 

 

参考文献

Assessment of Lexiscan for Blood Brain Barrier disruption to facilitate Fluorescence brain imaging
Authors: Rebecca W Pak, Hanh Le, Heather Valentine, Daniel Thorek, Arman Rahmim, Dean Wong, Jin U Kang
Journal: (2017): ATu3B–2

Bioengineering of injectable encapsulated aggregates of pluripotent stem cells for therapy of myocardial infarction
Authors: Shuting Zhao, Zhaobin Xu, Hai Wang, Benjamin E Reese, Liubov V Gushchina, Meng Jiang, Pranay Agarwal, Jiangsheng Xu, Mingjun Zhang, Rulong Shen
Journal: Nature Communications (2016): 13306

Deep Photoacoustic/Luminescence/Magnetic Resonance Multimodal Imaging in Living Subjects Using High-Efficiency Upconversion Nanocomposites
Authors: Yu Liu, Ning Kang, Jing Lv, Zijian Zhou, Qingliang Zhao, Lingceng Ma, Zhong Chen, Lei Ren, Liming Nie
Journal: Advanced Materials (2016)

Single-Layer MoS2 Nanosheets with Amplified Photoacoustic Effect for Highly Sensitive Photoacoustic Imaging of Orthotopic Brain Tumors
Authors: Jingqin Chen, Chengbo Liu, Dehong Hu, Feng Wang, Haiwei Wu, Xiaojing Gong, Xin Liu, Liang Song, Zonghai Sheng, Hairong Zheng
Journal: Advanced Functional Materials (2016)

In Vitro and In Vivo Analysis of Indocyanine Green-Labeled Panitumumab for Optical Imaging A Cautionary Tale
Authors: Yang Zhou, Young-Seung Kim, Diane E Milenic, Kwamena E Baidoo, Martin W Brechbiel
Journal: Bioconjugate chemistry (2014): 1801–1810

说明书
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荧光淬灭剂Tide Quencher 2酸 货号2200-AAT Bioquest荧光染料

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荧光淬灭剂Tide Quencher 2酸

荧光淬灭剂Tide Quencher 2酸

荧光淬灭剂Tide Quencher 2酸    货号2200 货号 2200 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 mg 价格 2604
Ex (nm) Em (nm)
分子量 382.48 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

荧光淬灭剂Tide Quencher 2酸是美国AAT Bioquest生产的淬灭剂,TQ2 旨在成为 FAM、HEX、TET、JOE、TF2 和罗丹明 6G 的卓越猝灭剂。 TQ2 有 (a)更强的吸收; (b)更高的淬火效率;和 (c)具有所需溶解度的多功能反应形式,用于标记寡核苷酸和肽。该 TQ2 产品主要用于标记肽。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的荧光淬灭剂Tide Quencher 2酸。 

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产品说明书

操作步骤

用Tide Quencher 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

1.准备Oligo溶液(溶液A)
将氨基修饰的oligo(~200μg)溶解在四硼酸盐缓冲液(100μL,pH 8.5±0.5)中。
注1:寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。
注2:避免使用含有伯胺的缓冲液,如Tris,因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液(溶液B)
通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中(如果可能,> 10mg / mL)。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。
注意:在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应
3.1向染料溶液(B,20-50μL)中搅拌或摇动(保持反应混合物避光)加入低聚物溶液(A,100μL)。
3.2在室温下,在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。
注意:在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶,以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合,因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后,应标记50-90%的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话,反应可以孵育过夜。然而,在大多数情况下,过夜孵育不会导致更高的标记效率。

4.纯化染料 – 寡糖结合物
4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸的初步纯化
4.1.1将20μL(一般十分之一反应溶液体积)的3M NaCl和300μL冷无水乙醇(通常为两个半反应溶液体积)加入反应小瓶中。
4.1.2充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。
4.1.3将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。
注意:如果离心时间不够长,可能会导致样品丢失。
4.1.4小心取出上清液,用冷的70%乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。
注意:一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前,通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸最低限度被未反应物污染。
4.2通过HPLC或凝胶电泳进行最终纯化。

 

使用Tide Quencher 染料标记肽

1.制备肽溶液(溶液A)
将肽(~10 mg)溶解在DMF(~1 ml)中。
注1:肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。
注2:避免使用含有伯胺的缓冲液,如Tris,因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液(溶液B)
通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中(如果可能,> 10mg / mL)。
注意:在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应
3.1向染料溶液(B,500μL)中加入肽溶液(A,1mL),搅拌或摇动(保持反应混合物不发光)。
3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

4.纯化染料 – 肽缀合物
浓缩反应溶液并在C18柱上纯化,得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分,合并> 97%纯度的级分并冻干。
注1:HPLC纯化条件:TEAB缓冲液(三乙基碳酸氢铵,0.25mmol,pH = 7.0-8.0)用作缓冲液A,乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0%B至30%B进行(流速:100毫升/分钟)。
注2:操作过程中避免强光。

 

参考文献

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310

Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1

Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272

Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226

FERRAMENTAS PARA ESTUDO DA BIOLOGIA DE GPCRS (G-PROTEIN COUPLED RECEPTORS)
Authors: Frederico Marianetti Soriani, Remo Castro Russo
Journal: Unknown

 

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产品名称 货号
荧光淬灭剂Tide Quencher 2叠氮化物 Cat#2211
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说明书
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Amplite 荧光法法丙二醇(MDA)定量试剂盒 货号10072-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光法法丙二醇(MDA)定量试剂盒

Amplite 荧光法法丙二醇(MDA)定量试剂盒

Amplite 荧光法法丙二醇(MDA)定量试剂盒    货号10072 货号 10072 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 5244
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法法丙二醇(MDA)定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。丙二醛(MDA)是脂质过氧化过程中的天然副产物之一。它被广泛用作确定氧化应激的可靠生物标志物,MDA的定量是评估病理生理过程中氧化应激的必不可少的方法。Amplite 荧光丙二醛(MDA)定量试剂盒提供了一种新的方法来测量MDA,而无需基于TBARS的MDA分析所需的加热步骤。MDA Green 可以与MDA反应,以方便的96孔或384孔板形式增强绿色荧光信号。与其他商用MDA分析试剂盒不同,该分析功能强大且对MDA具有特异性,几乎不受其他醛的干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法法丙二醇(MDA)定量试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 480nm
发射: 555nm
cutoff: 530nm
推荐孔板: 黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备MDA标准品​​或测试样品(50 µL)
  2. 添加MDA Green 工作溶液(50 µL)
  3. 在室温下孵育6分钟
  4. 添加MDA终止液(50 µL)
  5. 检测Ex / Em = 480/555 nm的荧光强度

 

溶液制备

储备溶液

1. MDA标准溶液(100 mM):将100µL ddH2O加入MDA标准溶液(组分C)的样品瓶中,制成100 mM MDA标准溶液。

2. MDA Green 储备溶液(250 X):将20µL DMSO(组分E)添加到一小瓶MDA Green (组分A)中,制成MDA Green 储备溶液。注意:制备后,所有储备溶液应储存在-20oC下。避免重复冻融循环。

 

标准溶液

将10 µL 100 mM MDA标准溶液加到990 µL MDA分析缓冲液(组分B)中,以生成1000 µM MDA标准溶液(MDA7)。取1000 µM MDA标准溶液(MDA7)并进行1:3连续稀释,以得到带有MDA分析缓冲液(组分B)的系列稀释MDA标准溶液(MDA6- MDA1)。

 

工作溶液

MDA Green 工作溶液:将20µL 250 X MDA Green 储备溶液添加到5 mL MDA分析缓冲液(组分B)中,并充分混合以制成MDA Green 工作溶液。 注意:该MDA Green 工作溶液应在实验前准备好,并避免光照。

 

样品分析

表1. 96孔透明底微孔板中MDA标准品和测试样品的布局。 MDA = MDA标准品(MDA1-MDA7,6.25至400μM),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
MDA1 MDA1
MDA2 MDA2
MDA3 MDA3    
MDA4 MDA4    
MDA5 MDA5    
MDA6 MDA6    
MDA7 MDA7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
MDA1-MDA7 50ul 连续稀释(6.25至400μM)
BL 50ul 稀释缓冲液(组分B)
TS 50ul 测试样品
  1. 根据表1和2中提供的布局,准备MDA标准品​​(MDA),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂,而不是50 µL。
  2. 将50 µL MDA Green 工作溶液添加到MDA标准品​​,空白对照和测试样品的每个孔中。对于384孔板,请在每个孔中添加25 µL MDA Green™工作溶液。
  3. 在避光条件下,于室温下孵育反应5-6分钟。
  4. 向反应的每个孔中加入50 µL MDA终止溶液(组分D)。对于384孔板,向每个孔中添加25 µL MDA终止液(组分D)。
  5. 使用荧光板读数器在Ex / Em = 480/555 nm(截止= 530 nm)处检测荧光强度。

 

参考文献

Glutathione peroxidase and malondialdehyde in children with chronic hepatitis C
Authors: Khedr, M. A., El-Araby, H. A., Konsowa, H. A., Sokar, S. S., Mahmoud, M. F., Adawy, N. M., Zakaria, H. M.
Journal: Clin Exp Hepatol (2019): 81-87

Malondialdehyde Assay in the Evaluation of Aspirin Antiplatelet Effects
Authors: Polzin, A., Dannenberg, L., Schneider, T., Knoop, B., Naguib, D., Helten, C., Pohl, M., Kelm, M., Zeus, T., Hohlfeld, T.
Journal: Pharmacology (2019): 23-29

Status of malondialdehyde, catalase and superoxide dismutase levels/activities in schoolchildren with iron deficiency and iron-deficiency anemia of Kashere and its environs in Gombe State, Nigeria
Authors: Sharif Usman, S., Dahiru, M., Abdullahi, B., Abdullahi, S. B., Maigari, U. M., Ibrahim Uba, A.
Journal: Heliyon (2019): e02214

The Evaluation of Glutathione Reductase and Malondialdehyde Levels in Patients With Lumbar Disc Degeneration Disease
Authors: Bakirezer, S. D., Yaltirik, C. K., Kaya, A. H., Yilmaz, S. G., Ozdogan, S., Billur, D., Isbir, T.
Journal: In Vivo (2019): 811-814

Association between dietary and metabolic factors and IgM antibodies to phosphorylcholine and malondialdehyde in patients with systemic lupus erythematosus and population-based matched controls
Authors: Lourdudoss, C., Ajeganova, S., Frostegard, J.
Journal: Clin Exp Rheumatol (2018): 428-433

Autoimmune reactivity to malondialdehyde adducts in systemic lupus erythematosus is associated with disease activity and nephritis
Authors: Hardt, U., Larsson, A., Gunnarsson, I., Clancy, R. M., Petri, M., Buyon, J. P., Silverman, G. J., Svenungsson, E., Gronwall, C.
Journal: Arthritis Res Ther (2018): 36

Elevated serum levels of malondialdehyde and cortisol are associated with major depressive disorder: A case-control study
Authors: Islam, M. R., Islam, M. R., Ahmed, I., Moktadir, A. A., Nahar, Z., Islam, M. S., Shahid, S. F. B., Islam, S. N., Islam, M. S., Hasnat, A.
Journal: SAGE Open Med (2018): 2050312118773953

Estimation of malondialdehyde levels in serum and saliva of children affected with sickle cell anemia
Authors: Baliga, S., Chaudhary, M., Bhat, S., Bhansali, P., Agrawal, A., Gundawar, S.
Journal: J Indian Soc Pedod Prev Dent (2018): 43-47

Evaluation of correlation between expression of P53 and Malondialdehyde levels in prostate cancer patients
Authors: Arif, M., Rashid, A., Majeed, A., Qaiser, F., Razak, S.
Journal: J Pak Med Assoc (2018): 1373-1377

Malondialdehyde-acetaldehyde antibody concentrations in rheumatoid arthritis and other rheumatic conditions
Authors: Mikuls, T. R., Duryee, M. J., Engl and B. R., Anderson, D. R., Hearth-Holmes, M., Su, K., Michaud, K., Payne, J. B., Sayles, H., Hunter, C., McGowan, J. D., Klassen, L. W., Thiele, G. M.
Journal: Int Immunopharmacol (2018): 113-118

 

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Amplite 荧光法法丙二醇(MDA)定量试剂盒.pdf

荧光淬灭剂Tide Quencher 2胺 货号2202-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

荧光淬灭剂Tide Quencher 2胺

荧光淬灭剂Tide Quencher 2胺

荧光淬灭剂Tide Quencher 2胺    货号2202 货号 2202 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 2604
Ex (nm) Em (nm)
分子量 424.56 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

荧光淬灭剂Tide Quencher 2胺是美国AAT Bioquest生产的淬灭剂,TQ2 旨在成为 FAM、HEX、TET、JOE、TF2 和罗丹明 6G 的卓越猝灭剂。 TQ2 有 (a)更强的吸收; (b)更高的淬火效率;和 (c)具有所需溶解度的多功能反应形式,用于标记寡核苷酸和肽。该 TQ2 产品主要用于标记肽。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的荧光淬灭剂Tide Quencher 2胺。 

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产品说明书

操作步骤

用Tide Quencher 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

1.准备Oligo溶液(溶液A)
将氨基修饰的oligo(~200μg)溶解在四硼酸盐缓冲液(100μL,pH 8.5±0.5)中。
注1:寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。
注2:避免使用含有伯胺的缓冲液,如Tris,因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液(溶液B)
通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中(如果可能,> 10mg / mL)。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。
注意:在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应
3.1向染料溶液(B,20-50μL)中搅拌或摇动(保持反应混合物避光)加入低聚物溶液(A,100μL)。
3.2在室温下,在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。
注意:在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶,以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合,因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后,应标记50-90%的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话,反应可以孵育过夜。然而,在大多数情况下,过夜孵育不会导致更高的标记效率。

4.纯化染料 – 寡糖结合物
4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸的初步纯化
4.1.1将20μL(一般十分之一反应溶液体积)的3M NaCl和300μL冷无水乙醇(通常为两个半反应溶液体积)加入反应小瓶中。
4.1.2充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。
4.1.3将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。
注意:如果离心时间不够长,可能会导致样品丢失。
4.1.4小心取出上清液,用冷的70%乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。
注意:一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前,通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸最低限度被未反应物污染。
4.2通过HPLC或凝胶电泳进行最终纯化。

 

使用Tide Quencher 染料标记肽

1.制备肽溶液(溶液A)
将肽(~10 mg)溶解在DMF(~1 ml)中。
注1:肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。
注2:避免使用含有伯胺的缓冲液,如Tris,因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液(溶液B)
通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中(如果可能,> 10mg / mL)。
注意:在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应
3.1向染料溶液(B,500μL)中加入肽溶液(A,1mL),搅拌或摇动(保持反应混合物不发光)。
3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

4.纯化染料 – 肽缀合物
浓缩反应溶液并在C18柱上纯化,得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分,合并> 97%纯度的级分并冻干。
注1:HPLC纯化条件:TEAB缓冲液(三乙基碳酸氢铵,0.25mmol,pH = 7.0-8.0)用作缓冲液A,乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0%B至30%B进行(流速:100毫升/分钟)。
注2:操作过程中避免强光。

 

参考文献

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
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